| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Neutral Red targets USP4, a deubiquitinating enzyme involved in the regulation of β‑catenin stability. It inhibits the deubiquitinating activity of USP4 in colon cancer cells, affecting the protein stability of β‑catenin and the expression of β‑catenin target genes. The compound acts as a selective, uncompetitive inhibitor with specificity for USP4 over other DUBs. In addition to its enzymatic target, Neutral Red functions as a cellular pH indicator, changing from red to yellow between pH 6.8 and 8.0. It serves as a marker for lysosomal activity and internal acidification of thylakoids.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在生命科学研究中，有机化学物质或生物材料可用作生化试剂，例如中性红（IND）。体外实验表明，中性红（50 μM）可抑制结肠癌细胞中USP4的去泛素化活性，从而改变β-catenin蛋白的稳定性及其下游靶基因的表达。该化合物可显著降低癌细胞系的克隆形成和细胞迁移能力。作为pH指示剂，它可用于监测溶酶体酸化和细胞活力。中性红可被溶酶体和其他酸性细胞器选择性吸收。此外，它还可用于活血细胞的超活体染色。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠异种移植模型中，中性红能显著缩小肿瘤体积。该化合物的体内抗肿瘤活性归因于其对USP4的抑制作用以及随后对β-catenin信号通路的影响。给药途径和剂量方案因实验模型而异。该化合物已被证实能影响体内肿瘤生长，提示其在癌症研究中具有进一步研究的潜力。关于具体的体内实验方案和药代动力学参数的更多细节尚不明确。
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| 酶活实验 |
体外中性红酶活性测定通常包括将纯化的USP4酶与泛素-罗丹明底物或泛素-VME探针孵育。化合物溶解于DMSO中，并用测定缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，0.01% Triton X-100，1 mM DTT）稀释。加入酶和底物启动反应，在37 °C下孵育30-60分钟，然后加入SDS上样缓冲液终止反应。通过测量荧光强度（激发波长490 nm，发射波长530 nm）来监测去泛素化活性。IC₅₀值通过非线性回归从剂量-反应曲线计算得出。对照组包括溶剂（DMSO）和已知的USP4抑制剂。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的实验，将结肠癌细胞（例如HCT-116）培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，并接种于6孔或96孔板中。24小时后，用不同浓度（0-100 μM）的中性红处理细胞48小时。采用MTT法或中性红摄取法评估细胞活力。对于机制研究，制备蛋白裂解液进行Western blotting，以检测β-catenin、c-Myc和cyclin D1。采用软琼脂克隆形成实验评估克隆形成能力，采用划痕实验或Transwell实验评估细胞迁移能力。所有处理均设置溶剂对照，并重复三次。
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| 动物实验 |
体内动物实验采用免疫缺陷小鼠（例如裸鼠），这些小鼠皮下移植了HCT-116细胞异种肿瘤。当肿瘤体积达到约100 mm³时，腹腔注射中性红，剂量为10-30 mg/kg，每日一次或隔日一次，持续2-3周。每3天测量一次肿瘤体积和体重。实验结束时，切除肿瘤，称重，并进行组织学和蛋白质印迹分析，以确认USP4抑制及其下游信号通路的变化。可采集血样进行初步药代动力学分析。所有操作均遵循IACUC指南。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
已发表的文献尚未对中性红的药代动力学特性进行全面表征。作为一种分子量为288.78、LogP值约为2.5的阳离子染料，预计其水溶性中等，可通过被动扩散或内吞作用被细胞良好摄取。在体内，它可能分布于酸性细胞器，且清除缓慢。其血浆蛋白结合率和代谢途径尚不清楚。出于研究目的，建议进行标准药代动力学研究（血浆浓度-时间曲线、半衰期、清除率），但目前尚未有相关报道。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
中性红在典型浓度（0.1–1 μg/mL）下通常被认为毒性较低，可用于细胞染色。然而，在较高的治疗剂量（例如，体外50 μM）下，长期暴露后可能对某些细胞系产生轻微的细胞毒性。在动物模型中，腹腔注射高达30 mg/kg的剂量未观察到明显的毒性反应，但缺乏详细的组织病理学和血液学评估。该化合物被归类为潜在刺激物；操作时需采取标准的实验室安全预防措施。尚未评估其长期致癌性和生殖毒性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
中性红是一种盐酸盐，由中性红游离碱与等量的盐酸反应制得。中性红是一种pH指示剂，在pH 6.8至8.0之间由红色变为黄色。它可用作染料、酸碱指示剂和双色指示剂。它含有中性红(1+)。中性红是一种重要的指示剂和生物染色剂。在生物系统中观察到一些不良反应。
中性红作为生物染色剂和pH指示剂有着悠久的历史。近期发现它是一种USP4抑制剂，这为癌症研究开辟了新的途径。该化合物尚未获批上市，也未进入临床试验。它可从化学试剂供应商处广泛购买，用于研究用途。其双重功能（染色和酶抑制）使其可用于成像和机制研究。研究人员应注意，其染色特性可能会干扰基于荧光的检测。进一步优化其USP4抑制活性有望获得更有效的类似物。 |
| 分子式 |
C15H16N4.HCL
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|---|---|
| 分子量 |
288.77528
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| 精确质量 |
288.114
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| CAS号 |
553-24-2
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| 相关CAS号 |
150645-85-5
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| PubChem CID |
11105
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| 外观&性状 |
Light green to green solid powder
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| 沸点 |
497.3ºC at 760mmHg
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| 熔点 |
290 °C (dec.)(lit.)
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| LogP |
4.122
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| tPSA |
55.04
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
319
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H16N4.ClH/c1-9-6-13-15(8-11(9)16)18-14-7-10(19(2)3)4-5-12(14)17-13;/h4-8H,16H2,1-3H3;1H
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| 化学名 |
8-N,8-N,3-trimethylphenazine-2,8-diamine;hydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~173.14 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4628 mL | 17.3142 mL | 34.6284 mL | |
| 5 mM | 0.6926 mL | 3.4628 mL | 6.9257 mL | |
| 10 mM | 0.3463 mL | 1.7314 mL | 3.4628 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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