NF157

P2Y11 (pKi = 7.35); P2Y11 (IC50 = 463 nM); P2Y11 (Ki = 44.3 nM); P2Y1 (Ki = 187 µM); P2Y2 (Ki = 28.9 µM)
NF157 selectively targets the P2Y11 receptor, a G-protein-coupled receptor activated by ATP and NAD+. It exhibits selectivity for P2Y11 and P2X1 receptors over P2Y1, P2Y2, P2X2, P2X3, P2X4, and P2X7 receptors, making it a valuable tool for studying P2Y11-mediated signaling.

NF157 的选择性不如 P2X1，但其对 P2Y11 的选择性比 P2Y1（>650 倍）、P2Y2（>650 倍）、P2X2（3 倍）、P2X3（8 倍）、P2X4（>22 倍）和 P2X7（>67 倍）更高[1]。NF157（30 和 60 µM；24 小时）以剂量依赖的方式显著降低了 II 型胶原的降解。当应用 60 µM NF157 时，TNF-α（10 ng/mL）诱导的 II 型胶原降解几乎完全恢复[2]。 NF157（30 和 60 µM；24 小时）显著降低了 NF-κB 荧光素酶活性，同时几乎完全恢复了 TNF-α（10 ng/mL）诱导的 p65 核转位 [2]。体外实验表明，NF157 能有效抑制 P2Y11 受体活性，IC50 值为 463 nM。其 pKi 值为 7.35，表明其具有高亲和力。NF157 可抑制 NAD+ 诱导的人粒细胞活化，并降低基质金属蛋白酶 (MMP)-3 和 MMP-13 的表达。

在体内，NF157可通过降低MMP-3和MMP-13的表达，在骨关节炎（OA）的治疗中具有潜在应用价值。MMP-3和MMP-13是参与软骨降解的关键酶。NF157抑制P2Y11介导的信号传导的能力也可能对炎症性疾病具有重要意义。

8f/NF157 在重组 P2X 受体上的电生理学评估。[1]
采用先前描述的方法，在表达各种大鼠 (r) 和人 (h) P2X 亚型（rP2X1、hP2X1、rPX2、rP2X3、hP2X3、rP2X4、hP2X4、rP2X7）的重组非洲爪蟾卵母细胞上评估了 NF157 对 P2X 受体的抑制效力。通过对汇总数据进行 Hill 方程的非线性最小二乘拟合，得到浓度-抑制曲线和 IC50 值。rP2X2 受体的非脱敏特性使得在持续 ATP 刺激下同时施加 NF157 可以量化稳态条件下的内向电流抑制。从有效浓度的NF157共同作用后电流幅度立即下降可以推断，电流抑制几乎是瞬时的。经典的Cheng-Prusoff方程可用于计算NF157对rP2X2受体的Ki值。NF157对P2X受体脱敏的抑制效力通过峰值电流测量确定。如前所述，通常无法通过共同应用激动剂和拮抗剂来准确评估脱敏受体的IC50值，因为在两种化合物达到结合平衡之前，激动剂诱导的电流就会因脱敏而开始下降。为了解决这个问题，表达脱敏P2X受体的卵母细胞在NF157持续存在的情况下，先用NF157预平衡15秒，然后再用ATP刺激。我们之前已证明，苏拉明衍生物可竞争性阻断 P2X 受体。因此，如果在达到峰值电流响应所需时间内，NF157 与受体的解离程度不显著，则 ATP 只能与未被 NF157 占据的受体结合，从而导致一种伪不可逆的抑制作用。在这种情况下，Ki 值和 IC50 值将相等。因此，我们假设从峰值电流测量值推导出的 IC50 值接近或等于 Ki 值。无论如何，由于 ATP 的应用浓度接近其 EC50 值，Ki 值与 IC50 值的最大偏差为 2 倍。所有结果均以至少三次实验的平均值 ± 标准误差 (SEM) 表示。

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P2Y11 受体结合亲和力采用放射性配体结合实验测定。将表达人 P2Y11 受体的细胞的膜制备物与放射性标记的配体（例如 [³³P]-ATP）和不同浓度的 NF157 一起孵育。通过竞争性结合曲线计算 Ki 或 pKi。

Western Blot 分析[2]
细胞类型： SW1353 细胞
测试浓度： 30 和 60 µM
孵育时间： 24 小时
实验结果： TNF-α 诱导的 NF-κB 活化减弱。

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NF-κB 启动子-荧光素酶活性检测 [2]
通过检测 NF-κB 启动子-荧光素酶活性来评估 NF-κB 的转录活性。将NF-κB启动子-荧光素酶和β-半乳糖苷酶质粒用Lipofectamine 2000转染至SW1353细胞。在有或无浓度为30和60 μM的NF157的情况下，用10 ng/ml TNF-α处理人软骨细胞SW1353细胞24小时。制备细胞裂解液，并使用Secrete-Pair™双荧光检测试剂盒在发光仪上测定荧光素酶活性和β-半乳糖苷酶活性。荧光素酶活性以β-半乳糖苷酶活性进行标准化。在表达P2Y11受体的细胞（例如人粒细胞）中评估NF157的功能活性。用 NAD+ 或 ATP 刺激细胞，并在拮抗剂存在的情况下测量下游信号事件（例如，钙动员或 cAMP 积累）。计算 IC50 值。

体内疗效可在骨关节炎动物模型中进行评估，例如小鼠内侧半月板不稳定（DMM）模型。NF157可通过关节内或全身给药，并通过组织学分析和MMP-3及MMP-13水平的测定来评估软骨退化的进展。

NF157 是一种分子量大、带负电荷的分子（分子量为 1437.08 g/mol），预计口服生物利用度较低。在研究环境中，通常采用注射给药。其药代动力学特性受其分子大小和电荷的限制。

基于其P2Y11拮抗机制，NF157预计具有良好的安全性。然而，与任何研究性化合物一样，仍需进行全面的毒理学研究。其较大的分子尺寸可能会限制其在某些组织中的分布。

[1]. Synthesis and structure-activity relationships of suramin-derived P2Y11 receptor antagonists with nanomolar potency. J Med Chem. 2005 Nov 3;48(22):7040-8.

[2]. Inhibition of P2Y11R ameliorated TNF-α-induced degradation of extracellular matrix in human chondrocytic SW1353 cells. Am J Transl Res. 2019 Apr 15;11(4):2108-2116.

由于缺乏高选择性和高效的P2Y(11)受体拮抗剂，对这种主要表达于免疫细胞上的G蛋白偶联受体的评估一直受到阻碍。我们以具有中等抑制效力的物质苏拉明为模板，合成了18种尿素化合物，这些化合物具有苏拉明及其前体的甲基结构变体，并测试了它们对P2Y(11)、P2Y(1)和P2Y(2)受体的功能。苏拉明甲基的氟取代得到了第一个纳摩尔级P2Y(11)受体拮抗剂（8f，NF157，pK(i)：7.35）。为了评估其选择性，我们还测试了8f对各种P2X受体的拮抗作用。化合物 8f 对 P2Y(11) 的选择性高于 P2Y(1)（>650 倍）、P2Y(2)（>650 倍）、P2X(2)（3 倍）、P2X(3)（8 倍）、P2X(4)（>22 倍）和 P2X(7)（>67 倍），但对 P2X(1) 无选择性。QSAR 研究证实，芳香连接区中具有有利共振和尺寸参数的残基确实可以增强效力，化合物 8f 即是如此。连接两个阴离子簇的对称结构似乎对生物活性至关重要。化合物 8f 可能有助于评估 P2Y(11) 受体的生理功能。[1] 本研究报道了一系列苏拉明类似物的合成及其构效关系，并发现了首个纳摩尔级 P2Y11 受体拮抗剂 8f。该拮抗剂对 P2Y11 受体的选择性至少比对 P2Y1 和 P2Y2 受体的选择性高 650 倍，对 P2X2、P2X3、P2X4 和 P2X7 受体的选择性高 3 至 67 倍。然而，化合物 8f 对 P2Y11 和 P2X1 受体的效力大致相当。连接两个阴离子簇的对称结构似乎对其生物活性至关重要。定量构效关系 (QSAR) 研究表明，在芳香连接区，用共振 (R)、大小 (B5) 和部分电荷 (Q(Oortho)) 取代残基 R 的邻位酰胺氧原子可以提高其效力，例如氟化衍生物 8f。QSAR 结果可以指导靶向合成和开发更多高效且选择性（也包括对 P2X1）的 P2Y11 配体。因此，本研究及新型配体8f可能有助于更深入地理解P2Y11受体的生理和病理生理作用。[1] 骨关节炎是全球主要的公共卫生负担。关节破坏是骨关节炎的主要病理特征，其主要原因是关节细胞外基质中II型胶原蛋白和蛋白聚糖分别被金属蛋白酶和聚集体过度降解。然而，其确切机制尚不清楚。目前，能够延缓或阻止疾病进展的非侵入性疗法非常有限。在本研究中，我们使用新型P2Y11R拮抗剂NF157，在SW1353细胞系中研究了嘌呤能蛋白P2Y11及其受体P2Y11R在TNF-α介导的软骨细胞外基质降解中的作用。据我们所知，这是首个探讨NF157在骨关节炎（OA）中作用的研究。我们的研究结果表明，P2Y11R可能确实在TNF-α诱导的骨关节炎（OA）细胞外基质降解中发挥作用，因为NF157处理显著降低了金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-13、含血小板反应蛋白基序的整合素以及ADAMTS-4和ADAMTS-5的表达，并以剂量依赖的方式改善了SW1353软骨细胞中II型胶原和聚集蛋白聚糖的降解。此外，我们发现NF157处理显著降低了p65的核转位及其随后激活的核因子κB（NF-κB）[2]。NF-κB被认为是一种关键的促炎转录因子，可促进骨关节炎（OA）和许多其他炎症性疾病的发生发展。日本最近的一项研究表明，γ射线诱导的ATP释放可激活P2Y11受体，进而通过p38/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路激活NF-κB。在一项相关研究中，作者发现NF157处理可抑制NF-κB的激活。另一项研究表明，ATP选择性地靶向p65，并通过P2Z嘌呤受体激活NF-κB，而P2Z嘌呤受体与P2Y11R一样，对ATP具有高亲和力。在本研究中，我们发现使用30和60 µM的NF157阻断P2Y11R可剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的p65核转位。此外，我们还证实，使用NF157拮抗P2Y11R可剂量依赖性地显著降低NF-κB的荧光素酶活性。我们的研究首次证实，使用选择性P2Y11受体拮抗剂NF157阻断P2Y11嘌呤受体，可通过下调TNF-α诱导的MMP-3、MMP-13、ADAMTS-4和ADAMTS-5的表达，显著抑制关节细胞中细胞外基质成分的降解，从而抑制II型胶原和蛋白聚糖的降解以及NF-κB的激活。这些积极的结果提示，NF157可能具有作为靶向疗法治疗和预防骨关节炎中II型胶原和蛋白聚糖过度降解的潜力。需要进一步研究以更好地理解这些结果背后的复杂机制。[2] NF157是一种研究用化合物，用作高选择性P2Y11受体拮抗剂。它是研究P2Y11受体在炎症、免疫反应和骨关节炎中功能的重要工具。目前尚未获准用于临床。

C49H34F2N6O23S6

1305.19

1435.89

C, 45.09; H, 2.63; F, 2.91; N, 6.44; O, 28.19; S, 14.74

104869-26-3

Off-white to pink solid powder

11.271

551.01

UDVIAMRWOLIUAE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C49H34F2N6O23S6/c50-33-9-7-25(47(60)54-35-11-13-39(83(69,70)71)31-19-29(81(63,64)65)21-41(43(31)35)85(75,76)77)17-37(33)56-45(58)23-3-1-5-27(15-23)52-49(62)53-28-6-2-4-24(16-28)46(59)57-38-18-26(8-10-34(38)51)48(61)55-36-12-14-40(84(72,73)74)32-20-30(82(66,67)68)22-42(44(32)36)86(78,79)80/h1-22H,(H,54,60)(H,55,61)(H,56,58)(H,57,59)(H2,52,53,62)(H,63,64,65)(H,66,67,68)(H,69,70,71)(H,72,73,74)(H,75,76,77)(H,78,79,80)

8-[[4-fluoro-3-[[3-[[3-[[2-fluoro-5-[(4,6,8-trisulfonaphthalen-1-yl)carbamoyl]phenyl]carbamoyl]phenyl]carbamoylamino]benzoyl]amino]benzoyl]amino]naphthalene-1,3,5-trisulfonic acid

NF-157; NF 157; NF157

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~1 mg/mL (~0.70 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。