NF157

P2Y11 (pKi = 7.35); P2Y11 (IC50 = 463 nM); P2Y11 (Ki = 44.3 nM); P2Y1 (Ki = 187 µM); P2Y2 (Ki = 28.9 µM)

NF157 的选择性不如 P2X1，但对 P2Y11 的选择性比 P2Y1（>650 倍）、P2Y2（>650 倍）、P2X2（3 倍）、P2X3（8 倍）、P2X4（>22）更高-倍）和 P2X7（>67 倍）[1]。 NF157（30 和 60 µM；24 小时）以剂量依赖性方式显着减少 II 型胶原蛋白的分解。当应用 60 µM NF157 时，II 型胶原蛋白几乎完全从 TNF-α (10 ng/mL) 诱导的降解中恢复 [2]。 NF157（30 和 60 µM；24 小时）显着降低 NF-κB 荧光素酶活性，同时几乎完全恢复 TNF-α (10 ng/mL) 触发的 p65 核易位 [2]。

重组P2X受体8f/NF157的电生理评估。[1]
使用先前描述的方案，在重组表达各种大鼠（r）和人（h）P2X亚型（rP2X1、hP2X1、rPX2、rP2X3、hP2X3、rP2X4、hP2X4、rP2X7）的X.laevis卵母细胞上评估了NF157对P2X受体的抑制效力。浓度-抑制曲线和IC50值来自Hill方程对合并数据的非线性最小二乘拟合。rP2X2受体的非致敏特性允许在ATP持续刺激期间通过联合施加NF157来量化稳态条件下的内向电流抑制。从共同施加有效浓度的NF157后电流振幅立即减小推断，电流抑制几乎是瞬间发生的。经典的Cheng-Prusoff方程可用于计算rP2X2受体的NF157的Ki值。通过峰值电流测量确定NF157对P2X受体脱敏的抑制效力。如前所述，通过同时应用激动剂和拮抗剂通常无法准确评估脱敏受体的IC50值，因为在两种化合物达到结合平衡之前，激动剂诱导的电流会因脱敏而开始下降。为了解决这个问题，表达脱敏P2X受体的卵母细胞在持续存在NF157的情况下用ATP攻击之前，用NF157预平衡15秒。我们之前已经证明，苏拉明衍生物竞争性阻断P2X受体。因此，如果NF157在达到峰值电流反应所需的时间内没有与受体显著分离，ATP只能与NF157未占据的受体结合，导致伪不可逆型抑制。在这些条件下，Ki和IC50值将相等。因此，我们假设从峰值电流测量中推断出的IC50值接近或等于Ki值。在任何情况下，Ki值与IC50值的最大偏差为2倍，因为ATP的浓度接近其EC50值。所有结果均以平均值±SEM的形式呈现，来自至少三个实验。

蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： SW1353 细胞
测试浓度： 30 和 60 µM
孵育时间： 24 小时
实验结果：减少 TNF-α 诱导的 NF-κB 激活。

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NF-κB启动子萤光素酶测定[2]
通过测量NF-κB启动子萤光素酶活性来评估NF-κB的转录活性。将NF-κB启动子荧光素酶和β-半乳糖苷酶质粒用Lipofectamine 2000转染入SW1353细胞。在存在或不存在浓度为30和60μM的NF157的情况下，用10ng/ml TNF-α处理人软骨细胞SW1353细胞24小时。制备细胞裂解物，并使用光度计上的Secrete PairTM双发光测定试剂盒测定萤光素酶活性和β-半乳糖苷酶活性。萤光素酶活性被标准化为β-半乳糖苷酶活性。

[1]. Synthesis and structure-activity relationships of suramin-derived P2Y11 receptor antagonists with nanomolar potency. J Med Chem. 2005 Nov 3;48(22):7040-8.

[2]. Inhibition of P2Y11R ameliorated TNF-α-induced degradation of extracellular matrix in human chondrocytic SW1353 cells. Am J Transl Res. 2019 Apr 15;11(4):2108-2116.

目前尚未开发出选择性强且高效的P2Y(11)受体拮抗剂，这阻碍了对这种主要表达于免疫细胞上的G蛋白偶联受体的评估。以具有中等抑制效力的苏拉明为模板，我们合成了18种具有苏拉明及其前体甲基结构变体的脲类化合物，并对其在P2Y(11)、P2Y(1)和P2Y(2)受体上的功能进行了测试。苏拉明甲基的氟取代得到了首个纳摩尔级P2Y(11)受体拮抗剂（8f，NF157，pK(i)：7.35）。为了评估其选择性，我们还测试了8f对多种P2X受体的拮抗作用。化合物 8f 对 P2Y(11) 的选择性高于 P2Y(1)（>650 倍）、P2Y(2)（>650 倍）、P2X(2)（3 倍）、P2X(3)（8 倍）、P2X(4)（>22 倍）和 P2X(7)（>67 倍），但对 P2X(1) 无选择性。QSAR 研究证实，芳香连接区中具有有利共振和尺寸参数的残基确实可以提高效力，化合物 8f 即是如此。连接两个阴离子簇的对称结构似乎是生物活性所必需的。化合物 8f 可能有助于评估 P2Y(11) 受体的生理功能。 [1]
本研究报道了一系列苏拉明类似物的合成及其构效关系，并发现了首个纳摩尔级P2Y11受体拮抗剂8f。该拮抗剂对P2Y11受体的选择性至少比P2Y1和P2Y2受体高650倍，对P2X2、P2X3、P2X4、P2X7受体的选择性高3倍至67倍以上。然而，8f对P2Y11和P2X1受体的效力大致相当。连接两个阴离子簇的对称结构似乎是其生物活性所必需的。定量构效关系（QSAR）研究表明，在芳香连接区，对残基R邻位酰胺氧原子进行共振（R）、尺寸（B5）和部分电荷（Q(Oortho)）的取代，可以提高其效力，例如氟代衍生物8f。 QSAR结果可指导进一步高效且选择性（也针对P2X1）的P2Y11配体的定向合成和开发。因此，本研究及新型配体8f可能有助于更深入地了解P2Y11受体的生理和病理生理作用。[1]骨关节炎是全球主要的健康负担。关节破坏是由金属蛋白酶和聚集蛋白酶分别过度降解关节细胞外基质中的II型胶原和聚集蛋白聚糖而导致的，这是骨关节炎的主要病理特征。然而，其确切机制仍不甚明了。目前，能够减缓或阻止疾病进展的非侵入性疗法寥寥无几。在本研究中，我们利用新型P2Y11R拮抗剂NF157，探讨了嘌呤能蛋白P2Y11及其受体P2Y11R在TNF-α介导的SW1353细胞系软骨细胞外基质降解中的作用。据我们所知，这是首个探索NF157在骨关节炎（OA）中作用的研究。我们的结果表明，P2Y11R可能确实在TNF-α诱导的OA细胞外基质降解中发挥作用，因为NF157处理显著降低了金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-13、具有血小板反应蛋白基序的解整合素和金属蛋白酶（ADAMTS）-4和ADAMTS-5的表达，并以剂量依赖的方式改善了SW1353软骨细胞中II型胶原和聚集蛋白聚糖的降解。此外，我们发现 NF157 治疗显著降低了 p65 的核转位及其后续的核因子 κB (NF-κB) 的激活。[2] NF-κB 被公认为一种关键的促炎转录因子，可促进骨关节炎 (OA) 以及许多其他炎症性疾病的发生发展。日本最近的一项研究表明，γ 射线诱导的 ATP 释放激活 P2Y11 受体，进而通过 p38/丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 通路激活 NF-κB。在一项相关研究中，作者发现 NF157 治疗抑制了 NF-κB 的激活。另一项研究表明，ATP 选择性地靶向 p65，并通过 P2Z 嘌呤受体激活 NF-κB，而 P2Z 嘌呤受体与 P2Y11R 一样，对 ATP 具有高亲和力。在本研究中，我们发现，使用 30 和 60 µM 的 NF157 阻断 P2Y11R 可剂量依赖性地抑制 TNF-α 诱导的 p65 核转位。此外，我们证实，使用 NF157 拮抗 P2Y11R 可剂量依赖性地显著降低 NF-κB 荧光素酶活性。我们的研究结果首次表明，使用选择性 P2Y11 拮抗剂 NF157 阻断 P2Y11 嘌呤受体可通过下调 TNF-α 诱导的 MMP-3、MMP-13、ADAMTS-4 和 ADAMTS-5 的表达，进而抑制 II 型胶原和聚集蛋白聚糖的降解以及 NF-κB 的激活，从而显著阻止关节细胞外基质成分的降解。这些积极结果表明，NF157 可能具有作为靶向治疗药物的潜力，用于治疗和预防骨关节炎中 II 型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖的过度降解。需要进一步研究以更好地了解实现这些结果的复杂机制。[2]

C49H34F2N6O23S6

1305.19

1435.89

C, 45.09; H, 2.63; F, 2.91; N, 6.44; O, 28.19; S, 14.74

104869-26-3

Off-white to pink solid powder

11.271

551.01

UDVIAMRWOLIUAE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C49H34F2N6O23S6/c50-33-9-7-25(47(60)54-35-11-13-39(83(69,70)71)31-19-29(81(63,64)65)21-41(43(31)35)85(75,76)77)17-37(33)56-45(58)23-3-1-5-27(15-23)52-49(62)53-28-6-2-4-24(16-28)46(59)57-38-18-26(8-10-34(38)51)48(61)55-36-12-14-40(84(72,73)74)32-20-30(82(66,67)68)22-42(44(32)36)86(78,79)80/h1-22H,(H,54,60)(H,55,61)(H,56,58)(H,57,59)(H2,52,53,62)(H,63,64,65)(H,66,67,68)(H,69,70,71)(H,72,73,74)(H,75,76,77)(H,78,79,80)

8-[[4-fluoro-3-[[3-[[3-[[2-fluoro-5-[(4,6,8-trisulfonaphthalen-1-yl)carbamoyl]phenyl]carbamoyl]phenyl]carbamoylamino]benzoyl]amino]benzoyl]amino]naphthalene-1,3,5-trisulfonic acid

NF-157; NF 157; NF157

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~1 mg/mL (~0.70 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。