Nusinersen   中文名称: 诺西那生

SMN2 gene; Nusinersen is an antisense oligonucleotide (ASO) that targets the SMN2 pre-mRNA, promoting exon 7 inclusion to increase functional SMN protein production in spinal muscular atrophy (SMA). [1]

通过抑制 SMN2 中的内含子剪接沉默子，SMN-ASO nusinersen 提高 SMN 水平并促进外显子 7 的包含和 FL-SMN2 转录本的产生 [2]。

在一项随机、双盲、假手术对照的临床试验中，婴儿期发病的SMA患者接受鞘内注射nusinersen（每剂12 mg）。与对照组相比，治疗组的运动功能（通过Hammersmith婴儿神经学检查评估）显著改善（37% vs. 0%应答者）。[1] 在小鼠SMA模型中，nusinersen与靶向NCALD的ASO联用比单用nusinersen进一步改善运动功能和生存率，表明协同效应。[2]

---

在中期分析中，nusinersen组婴儿出现运动里程碑反应的比例明显高于对照组（51名婴儿中有21名[41%]对27名婴儿中的0名[0%]，P<0.001），这一结果促使试验提前终止。在最后的分析中，nusinersen组中出现运动里程碑反应的婴儿比例明显高于对照组（73名婴儿中有37名[51%]对37名[0%]中的0名），nusinersen组无事件生存的可能性高于对照组(死亡或使用永久性辅助通气的风险比，0.53；P = 0.005)。nusinersen组总生存的可能性高于对照组(死亡风险比，0.37；P=0.004)，筛查时病程较短的婴儿比病程较长的婴儿更有可能受益于nusinersen。两组不良事件的发生率和严重程度相似。 结论：在患有脊髓性肌萎缩症的婴儿中，接受nusinersen的婴儿比对照组的婴儿更有可能存活并改善运动功能。为了使药物的益处最大化，早期治疗可能是必要的。(由Biogen和Ionis Pharmaceuticals资助；ENDEAR ClinicalTrials.gov号码：NCT02193074)。[1]

---

脊髓性肌萎缩症（SMA）是一种引起最常见的遗传性儿童期致死率的神经肌肉疾病。最近，nusinersen，一种纠正SMN2剪接从而增加全长SMN蛋白的反义寡核苷酸（ASO）已被FDA和EMA批准用于SMA治疗。然而，在严重和/或症状后sma影响的个体中给予nusinsen不足以对抗该疾病。因此，需要额外的smn独立治疗来支持运动神经元和神经肌肉连接的功能。我们最近发现无症状的smn1缺失个体通过减少神经钙素δ (NCALD)的表达来预防SMA。NCALD的减少被证明是一种跨物种的SMA保护性修饰剂，包括蠕虫、斑马鱼和小鼠。在这里，我们通过对皮层神经元、成年和新生小鼠的逐步筛选策略，从450个已开发的Ncald aso3中鉴定出Ncald aso3是对中枢神经系统最有效和无毒的ASO。在一项随机盲法临床前研究中，对严重SMA小鼠模型进行了单次皮下低剂量SMN-ASO和单次脑室内Ncald-ASO3或对照aso的症状前注射。NCALD减少约70%，持续约1个月。虽然低剂量SMN-ASO可以挽救多器官损伤，但额外减少NCALD可显著改善SMA病理，包括P21时神经肌肉连接和肌肉的电生理和组织学特性，以及3个月时的运动缺陷。目前的研究表明，联合smn依赖和smn独立的aso治疗SMA的额外益处。这项工作说明了在一些无症状个体中发现的修饰基因如何有助于开发针对所有sma患者的治疗方法。［２］

背景：脊髓性肌萎缩症是一种常染色体隐性遗传的神经肌肉疾病，由运动神经元存活蛋白（SMN）水平不足引起。Nusinersen 是一种反义寡核苷酸药物，可修饰 SMN2 基因的前体信使 RNA 剪接，从而促进全长 SMN 蛋白的生成。方法：我们开展了一项随机、双盲、安慰剂对照的 III 期临床试验，旨在评估 nusinersen 对脊髓性肌萎缩症患儿的疗效和安全性。主要终点为运动里程碑反应（根据 Hammersmith 婴儿神经系统检查结果定义）和无事件生存期（至死亡或需要永久性辅助通气的时间）。次要终点包括总生存期以及根据筛选时疾病持续时间进行的无事件生存期亚组分析。仅对主要终点进行了预先设定的中期分析。为了将总体 I 类错误率控制在 0.05，最终分析中对第二个主要终点和次要终点采用了分层检验策略。[1]

---

在小鼠研究中，SMA 模型小鼠在出生后第 1 天 (P1) 和第 5 天 (P5) 通过脑室内 (ICV) 注射接受 nusinersen（每次 40 μg）。ASO 溶解于人工脑脊液 (aCSF) 中。[2]

在临床试验中，nusinersen总体耐受性良好，治疗组和对照组均常见不良事件（例如呼吸道感染）。未报告剂量限制性毒性。[1]

[1]. Nusinersen versus Sham Control in Infantile-Onset Spinal Muscular Atrophy. N Engl J Med. 2017 Nov 2;377(18):1723-1732.

[2]. NCALD Antisense Oligonucleotide Therapy in Addition to Nusinersen further Ameliorates Spinal Muscular Atrophy in Mice. Am J Hum Genet. 2019 Jul 3;105(1):221-230.

另见：Nusinersen（注释已移至此处）。

---

药物适应症
Spinraza适用于治疗5q脊髓性肌萎缩症。

---

因此，需要开发其他不依赖于SMN的方法来维持运动神经元和神经肌肉接头（NMJ）功能的终身功能。该系统的优势在于，SMN和NCALD基因将通过同一系统（即反义寡核苷酸（ASO）方法）进行靶向。我们通过在P2小鼠脑室内注射特异性Ncald-ASO，实现了靶组织中NCALD蛋白水平的下调（超过70%）。然而，与恢复SMN2剪接的SMN MOE ASO（nusinersen）相比，用于下调RNA的Ncald MOE gapmer ASO的代谢稳定性较差。虽然SMN-ASO在皮下注射后非常稳定，且在6个月后仍对肝脏有积极作用³¹，但Ncald-ASO3的作用持续时间约为1个月，之后在3个月后消失。这表明需要考虑每月重复注射或进一步设计方案以优化作用持续时间。我们的研究结果提供了概念验证，即NCALD介导的ASO在中枢神经系统中的下调是可能的，并表明在新生动物中，单次症状前注射Ncald-ASO3即可改善SMA病理和运动功能障碍。尽管NCALD蛋白及其抑制作用在P4至10月龄期间于脊髓中逐渐下调，但在最初几个月内每月重复进行脑室内（icv）推注Ncald-ASO3仍可能进一步增强其积极作用，类似于基因修饰的SMA-Ncaldko/wt小鼠的效果²²。本研究的未来展望是设计针对人NCALD的ASO，并分析其在人iPSC衍生培养的运动神经元中的作用，这些ASO可能用于治疗SMA患者。最后，这项工作阐明了在一些无症状个体中发现的修饰基因如何有助于开发适用于所有SMA患者的疗法^[2]。Nusinersen（Spinraza®）是首个获得FDA批准的SMA疾病修饰疗法，适用于所有类型的SMA。它通过调节SMN2剪接来补偿SMN1突变。[1] 在临床前模型中，与靶向NCALD的ASO联合治疗可能比nusinersen单药治疗更有效。[2]

C234H340N61O128P17S17

7127.1942691803

7124.282

1258984-36-9

131801471

White to off-white solid powder

-13.7

2860

40

167

176

457

19100

72

S=P(O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C=NC3C(N)=NC=NC2=3)O1)OCCOC)OP(O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C(NC(C(C)=C2)=O)=O)O1)OCCOC)OP(O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C=NC3C(NC(N)=NC2=3)=O)O1)OCCOC)OP(O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C(N=C(C(C)=C2)N)=O)O1)OCCOC)OP(O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C(NC(C(C)=C2)=O)=O)O1)OCCOC)OP(O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C=NC3C(NC(N)=NC2=3)=O)O1)OCCOC)OP(O)(OC[C@@H]1[C@H]([C@H]([C@H](N2C=NC3C(NC(N)=NC2=3)=O)O1)OCCOC)O)=S)=S)=S)=S)=S)=S)O[C@@H]1[C@@H](COP(O)(O[C@@H]2[C@@H](COP(O)(O[C@@H]3[C@@H](COP(O)(O[C@@H]4[C@@H](COP(O)(O[C@@H]5[C@@H](COP(O)(O[C@@H]6[C@@H](COP(O)(O[C@@H]7[C@@H](COP(O)(O[C@@H]8[C@@H](COP(O)(O[C@@H]9[C@@H](COP(O)(O[C@@H]%10[C@@H](COP(O)(O[C@@H]%11[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]%11OCCOC)N%11C(NC(C(C)=C%11)=O)=O)=S)O[C@H]([C@@H]%10OCCOC)N%10C(N=C(C(C)=C%10)N)=O)=S)O[C@H]([C@@H]9OCCOC)N9C=NC%10C(N)=NC=NC9=%10)=S)O[C@H]([C@@H]8OCCOC)N8C(N=C(C(C)=C8)N)=O)=S)O[C@H]([C@@H]7OCCOC)N7C(NC(C(C)=C7)=O)=O)=S)O[C@H]([C@@H]6OCCOC)N6C(NC(C(C)=C6)=O)=O)=S)O[C@H]([C@@H]5OCCOC)N5C(NC(C(C)=C5)=O)=O)=S)O[C@H]([C@@H]4OCCOC)N4C(N=C(C(C)=C4)N)=O)=S)O[C@H]([C@@H]3OCCOC)N3C=NC4C(N)=NC=NC3=4)=S)O[C@H]([C@@H]2OCCOC)N2C(NC(C(C)=C2)=O)=O)=S)O[C@H]([C@@H]1OCCOC)N1C=NC2C(N)=NC=NC1=2

WWFDJIVIDXJAQR-FFWSQMGZSA-N

InChI=1S/C234H340N61O128P17S17/c1-106-66-278(224(308)261-178(106)235)205-162(356-50-32-338-14)144(119(391-205)79-373-425(320,442)407-143-117(77-296)389-204(161(143)355-49-31-337-13)282-70-110(5)193(298)271-228(282)312)410-431(326,448)383-89-129-154(172(366-60-42-348-24)215(401-129)289-99-254-135-182(239)246-95-250-186(135)289)419-436(331,453)379-81-121-145(163(357-51-33-339-15)206(393-121)279-67-107(2)179(236)262-225(279)309)408-426(321,443)375-83-123-149(167(361-55-37-343-19)210(395-123)284-72-112(7)195(300)273-230(284)314)413-429(324,446)378-86-125-150(168(362-56-38-344-20)211(397-125)285-73-113(8)196(301)274-231(285)315)414-430(325,447)377-85-124-148(166(360-54-36-342-18)209(396-124)283-71-111(6)194(299)272-229(283)313)412-428(323,445)374-80-120-147(165(359-53-35-341-17)208(392-120)281-69-109(4)181(238)264-227(281)311)411-432(327,449)384-90-130-155(173(367-61-43-349-25)216(402-130)290-100-255-136-183(240)247-96-251-187(136)290)420-437(332,454)381-87-127-152(170(364-58-40-346-22)213(399-127)287-75-115(10)198(303)276-233(287)317)415-433(328,450)385-91-131-157(175(369-63-45-351-27)218(403-131)292-102-257-138-185(242)249-98-253-189(138)292)422-440(335,457)386-92-132-156(174(368-62-44-350-26)217(404-132)291-101-256-137-184(241)248-97-252-188(137)291)421-438(333,455)382-88-128-153(171(365-59-41-347-23)214(400-128)288-76-116(11)199(304)277-234(288)318)417-435(330,452)388-94-134-159(177(371-65-47-353-29)220(406-134)295-105-260-141-192(295)267-223(245)270-202(141)307)423-439(334,456)380-82-122-146(164(358-52-34-340-16)207(394-122)280-68-108(3)180(237)263-226(280)310)409-427(322,444)376-84-126-151(169(363-57-39-345-21)212(398-126)286-74-114(9)197(302)275-232(286)316)416-434(329,451)387-93-133-158(176(370-64-46-352-28)219(405-133)294-104-259-140-191(294)266-222(244)269-201(140)306)418-424(319,441)372-78-118-142(297)160(354-48-30-336-12)203(390-118)293-103-258-139-190(293)265-221(243)268-200(139)305/h66-76,95-105,117-134,142-177,203-220,296-297H,30-65,77-94H2,1-29H3,(H,319,441)(H,320,442)(H,321,443)(H,322,444)(H,323,445)(H,324,446)(H,325,447)(H,326,448)(H,327,449)(H,328,450)(H,329,451)(H,330,452)(H,331,453)(H,332,454)(H,333,455)(H,334,456)(H,335,457)(H2,235,261,308)(H2,236,262,309)(H2,237,263,310)(H2,238,264,311)(H2,239,246,250)(H2,240,247,251)(H2,241,248,252)(H2,242,249,253)(H,271,298,312)(H,272,299,313)(H,273,300,314)(H,274,301,315)(H,275,302,316)(H,276,303,317)(H,277,304,318)(H3,243,265,268,305)(H3,244,266,269,306)(H3,245,267,270,307)/t117-,118-,119-,120-,121-,122-,123-,124-,125-,126-,127-,128-,129-,130-,131-,132-,133-,134-,142-,143-,144-,145-,146-,147-,148-,149-,150-,151-,152-,153-,154-,155-,156-,157-,158-,159-,160-,161-,162-,163-,164-,165-,166-,167-,168-,169-,170-,171-,172-,173-,174-,175-,176-,177-,203-,204-,205-,206-,207-,208-,209-,210-,211-,212-,213-,214-,215-,216-,217-,218-,219-,220-,424?,425?,426?,427?,428?,429?,430?,431?,432?,433?,434?,435?,436?,437?,438?,439?,440?/m1/s1

1-[(2R,3R,4R,5R)-4-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。