Obtusifolin

别名: Obtusifolin 美决明子素;决明蒽醌; 2,8-二羟基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌
目录号: V34237 纯度: ≥98%
Obtusifolin 是从决明种子中分离出来的,是蒽醌类的天然产物。
Obtusifolin CAS号: 477-85-0
产品类别: NF-κB
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
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产品描述

描述: 钝叶决明素是一种天然存在的蒽醌类化合物,提取自钝叶决明(Cassia obtusifolia)的种子。钝叶决明素通过阻断NF-κB通路,有效控制气道上皮细胞中MUC5AC黏蛋白的基因表达和生成。钝叶决明素可通过靶向甲状旁腺激素相关蛋白,预防邻苯二甲酸酯类药物诱导的乳腺癌骨转移。


钝叶决明素 是一种从钝叶决明(Cassia obtusifolia,也见于决明子Cassia tora L.)种子中分离得到的蒽醌类化合物。据报道,它具有抗过敏、抗炎和抗氧化作用。该化合物已被研究其通过NF-κB通路调节气道上皮细胞中气道黏蛋白(MUC5AC)生成和基因表达的潜力。此外,研究表明,Obtusifolin可通过靶向甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)抑制邻苯二甲酸酯诱导的乳腺癌骨转移。[1][2]
生物活性&实验参考方法
靶点
NF-κB
Nuclear factor kappa B (NF-κB) signaling pathway, specifically by inhibiting PMA-induced phosphorylation of IKKα/β, IκBα, and nuclear translocation of NF-κB p65. [1]
Parathyroid hormone-related protein (PTHrP). [2]
体外研究 (In Vitro)
在NCI-H292人呼吸道上皮细胞中,Obtusifolin(10⁻⁶、10⁻⁵、10⁻⁴ M)显著抑制了EGF、PMA和TNF-α诱导的MUC5AC黏蛋白生成。黏蛋白生成量分别为:单独使用EGF组为340±8%,而EGF+Obtusifolin(1、10、100 µM)组分别为286±43%、193±19%和102±9%;单独使用PMA组为197±5%,而PMA+Obtusifolin组分别为191±3%、170±1%和52±2%。单独使用TNF-α的抑制率为252±12%,而TNF-α+Obtusifolin组的抑制率分别为187±1%、151±2%和124±11%。[1]在NCI-H292细胞中,Obtusifolin(1、5、10、20、50 µM)以剂量依赖的方式抑制PMA诱导的NF-κB p65核转位。[1]在NCI-H292细胞中,Obtusifolin抑制PMA诱导的IκBα磷酸化、IκBα降解以及IKKα/β(Ser176/180)磷酸化。 [1]在NCI-H292细胞中,Obtusifolin似乎影响TNFR1信号通路中衔接蛋白RIP1的表达。[1]在MDA-MB-231人乳腺癌细胞中,Obtusifolin处理(该单次处理的浓度未明确)降低了邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导的PTHrP和IL-8分泌。Obtusifolin完全逆转了DBP处理引起的PTHrP和IL-8分泌。[2]在MDA-MB-231细胞中,DBP处理细胞的条件培养基(DBP-MDA-MB-231-CM)介导成骨细胞中RANKL的上调;Obtusifolin处理完全消除了这种作用。 [2]
在使用 CD14+ 单核细胞的破骨细胞生成试验中,Obtusifolin 处理(浓度未指定)完全抑制了 DBP-MDA-MB-231-CM 增强的破骨细胞分化和骨吸收活性。[2]
体内研究 (In Vivo)
在NCI-H292细胞中,Obtusifolin(1、10、100 μM)抑制EGF、PMA或TNFα诱导的MUC5AC基因表达[1]。
酶活实验
采用 ELISA 试剂盒测定并定量了 MDA-MB-231 细胞条件培养基中的 PTHrP 水平和 IL-8 水平。PTHrP 的测定采用 ELISA 试剂盒,IL-8 的测定采用 DuoSet ELISA 试剂盒。[2] 采用 DuoSet ELISA 试剂盒评估并定量了成骨细胞培养上清液中的 M-CSF、RANKL 和 OPG 水平。[2]
细胞实验
为了检测MUC5AC的表达,将NCI-H292细胞(一种人肺黏液表皮样癌细胞系)培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中。在去除血清(0.2%胎牛血清)24小时后,用不同浓度(1、10、100 µM)的Obtusifolin预处理细胞30分钟,然后在无血清RPMI 1640培养基中分别用EGF(25 ng/ml)、PMA(10 ng/ml)或TNF-α(0.2 nM)刺激24小时。收集细胞裂解液,使用45M1小鼠单克隆MUC5AC抗体,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MUC5AC蛋白的表达水平。 [1]
为检测MUC5AC基因表达,将NCI-H292细胞用Obtusifolin预处理30分钟,然后用EGF、PMA或TNF-α刺激24小时。使用RNA提取试剂盒分离总RNA,并进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。使用的引物为MUC5AC(正向引物:5'-TGA TCA TCC AGC AGG GCT-3',反向引物:5'-CCG AGC TCA GAG GAC ATA TGG G-3')和管家基因Rig/S15。 [1]
为进行NF-κB通路Western blot分析,将NCI-H292细胞与1、5、10、20和50 µM的Obtusifolin孵育24小时,然后用PMA(50 ng/ml)刺激30分钟。使用核和胞质提取试剂制备核提取物和胞质提取物。使用RIPA缓冲液制备全细胞裂解液。将蛋白质进行SDS-PAGE电泳,转移至PVDF膜,并用针对NF-κB p65、IκBα、磷酸化IκBα(Ser 32/36)、IKKα/β、磷酸化IKKα/β(Ser176/180)、RIP1、TRAF2、TRADD、p84和β-actin的抗体进行检测。 [1]
在乳腺癌骨转移研究中,MDA-MB-231人乳腺癌细胞培养于含10% FBS的α-MEM培养基中。为获得条件培养基(CM),将MDA-MB-231细胞(2 x 10⁶/100mm培养皿)用不同浓度的DBP处理6小时,然后更换培养基,孵育24小时后收集上清液并过滤。为检测Obtusifolin,将MDA-MB-231细胞用该化合物预处理1小时,然后用DBP(1 µM)孵育6小时(用于检测PTHrP)或24小时(用于检测IL-8)。采用ELISA法检测培养基中PTHrP和IL-8的水平。[2]
在成骨细胞实验中,将人原代成骨细胞培养于成骨细胞生长培养基中。将来自对照组或DBP处理的MDA-MB-231细胞的条件培养基(control-CM和DBP-CM)加入成骨细胞中培养24小时。采用ELISA法检测成骨细胞上清液中M-CSF、RANKL和OPG的水平。[2]
对于破骨细胞生成,使用磁珠从外周血单核细胞中纯化CD14+单核细胞。将CD14+单核细胞在含有20% control-CM或DBP-MDA-MB-231-CM,并添加100 ng/mL M-CSF和50 ng/mL RANKL的培养基中培养14-21天,以生成破骨细胞。通过TRAP染色(多核细胞,核数>3)检测破骨细胞的形成,并使用骨吸收测定板评估骨吸收活性。 [2]
为了敲低 PTHrP,使用转染试剂将 20 nM 非靶向或 PTHrP siRNA 混合物转染至 MDA-MB-231 细胞。24 小时后,用 DBP 处理细胞,并通过 qRT-PCR 检测 PTHrP 的变化。[2]
参考文献

[1]. Obtusifolin isolated from the seeds of Cassia obtusifolia regulates the gene expression and production of MUC5AC mucin in airway epithelial cells via affecting NF-κB pathway. Phytother Res. 2019 Apr;33(4):919-928.

[2]. Obtusifolin suppresses phthalate esters-induced breast cancer bone metastasis by targeting parathyroid hormone-related protein. J Agric Food Chem. 2014 Dec 10;62(49):11933-40.

其他信息
钝叶素是一种二羟基蒽醌。据报道,钝叶素存在于番泻叶和番泻叶提取物中,并且已有相关数据。
钝叶素是决明子(Cassia tora L.)种子中的主要生物活性化合物(也可从钝叶决明子中分离得到)。它是一种蒽醌衍生物,据报道,在分离研究中其纯度为98%。其化学结构已通过包括¹H-NMR、¹³C-NMR、HMQC和HMBC在内的光谱方法进行了表征。[1][2]
在气道炎症的背景下,钝叶素对MUC5AC粘蛋白生成和基因表达的抑制作用被认为部分是通过影响PMA诱导的IκBα降解和NF-κB p65的核转位而实现的。研究结果表明,Obtusifolin可能是一种治疗肺部疾病的新型有效黏液调节剂。[1]
在癌症治疗方面,本研究首次揭示了Obtusifolin能够逆转邻苯二甲酸酯介导的骨吸收。Obtusifolin抑制了邻苯二甲酸酯介导的骨吸收,可能是一种新型的抗乳腺癌骨转移药物。研究表明,在乳腺癌细胞暴露于邻苯二甲酸二丁酯(DBP)后,Obtusifolin能够完全逆转PTHrP和IL-8的分泌。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H12O5
分子量
284.2635
精确质量
284.068
元素分析
C, 67.60; H, 4.26; O, 28.14
CAS号
477-85-0
相关CAS号
477-85-0
PubChem CID
3083575
外观&性状
Yellow to orange solid powder
密度
1.448±0.06 g/cm3
沸点
528.0±50.0 °C at 760 mmHg
熔点
242-243ºC
闪点
202.2±23.6 °C
蒸汽压
0.0±1.4 mmHg at 25°C
折射率
1.678
LogP
4.18
tPSA
83.83
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
21
分子复杂度/Complexity
448
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O(C([H])([H])[H])C1=C(C(C([H])([H])[H])=C([H])C2C(C3C([H])=C([H])C([H])=C(C=3C(C=21)=O)O[H])=O)O[H]
InChi Key
NYRXUBDGDSRBGB-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C16H12O5/c1-7-6-9-12(16(21-2)13(7)18)15(20)11-8(14(9)19)4-3-5-10(11)17/h3-6,17-18H,1-2H3
化学名
2,8-dihydroxy-1-methoxy-3-methylanthracene-9,10-dione
别名
Obtusifolin
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 10~25 mg/mL (35.2~88 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.5179 mL 17.5895 mL 35.1791 mL
5 mM 0.7036 mL 3.5179 mL 7.0358 mL
10 mM 0.3518 mL 1.7590 mL 3.5179 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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