Octyl gallate   中文名称: 没食子酸辛酯

Human serum albumin (HSA) and bovine serum albumin (BSA). Octyl gallate binds primarily to Sudlow site II (the ibuprofen binding site) on HSA. [2]
NADPH oxidase in polymorphonuclear neutrophils (PMNs). [1]
Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) virions and infected cells. [3]

据报道，辛基没食子酸酯对幽门螺杆菌具有抗菌活性，其最低抑菌浓度 (MIC) 为 125 µg/mL[1]。

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在无细胞抗氧化活性测定中，辛基没食子酸酯 (G8) 在 DPPH 自由基清除试验中 EC50 值约为 5 µM，表明其具有强效的自由基清除活性。[1]
在三烯降解试验（过氧自由基 ROO• 清除）中，辛基没食子酸酯 (G8) 是所测试的没食子酸酯类化合物中最有效的分子，其抗氧化活性比其他物质高约五倍，Trolox 当量抗氧化活性 (TEAC) 值约为 1.2。 [1] 辛基没食子酸酯 (10 µM) 几乎完全抑制了幽门螺杆菌、酵母聚糖或 PMA 刺激的人多形核白细胞 (PMN) 产生的超氧阴离子自由基，该抑制作用通过鲁米诺依赖性化学发光法和 WST-1 检测法测定。相比之下，没食子酸的抑制率约为 20%。[1] 辛基没食子酸酯 (10 µM) 对受刺激白细胞产生的活性氧 (ROS) 具有强效抑制作用（鲁米诺依赖性化学发光法），无论刺激物（幽门螺杆菌、酵母聚糖、PMA）如何，抑制率均超过 90%。[1] 在 NBT 细胞化学检测中，用 10 µM 辛基没食子酸酯处理 PMA 刺激的 PMN 后，甲臜沉淀（表明超氧阴离子的产生）减少了 96%。 [1] 10 µM 的没食子酸辛酯对 PMA 诱导的中性粒细胞形态变化（包括空泡化和核破坏）具有保护作用。[1] 10 µM 的没食子酸辛酯显著抑制了酵母聚糖刺激的 PMN 产生次氯酸 (HOCl)。然而，在利用纯化的髓过氧化物酶 (MPO) 和过氧化氢 (H₂O₂) 的无细胞体系中，没食子酸辛酯 (G8) 导致 HOCl 产生显著增加。[1] 没食子酸辛酯对幽门螺杆菌表现出强效抗菌活性，其最小抑菌浓度 (MIC) 为 125 μg/mL，最小杀菌浓度 (MBC) 为 250 μg/mL。 [1] 辛基没食子酸酯 (15 μM) 可抑制 HEp-2 细胞中 HSV-1 的增殖，使子代病毒产量降低约 10,000 倍。[3] 辛基没食子酸酯 (15 μM) 可抑制 HEp-2 细胞中水疱性口炎病毒 (VSV，一种 RNA 病毒) 的增殖，使子代病毒产量降低至对照组的约百分之一。[3] 辛基没食子酸酯可抑制 HEp-2 细胞中脊髓灰质炎病毒 (一种 RNA 病毒) 的增殖，但抑制效果较差；需要 60 μM 的浓度才能达到 90% 以上的抑制率。[3] 辛基没食子酸酯以浓度依赖的方式直接灭活 HSV-1 病毒颗粒（具有杀病毒活性）。在 50 μg/mL（约 178 μM）浓度下，室温孵育 10 分钟后，该化合物可使病毒感染性降低 90% 以上。它还能灭活水疱性口炎病毒 (VSV)，但即使在 200 μg/mL 的浓度下也无法灭活脊髓灰质炎病毒。[3] 辛基没食子酸酯 (15 μM) 可抑制 HEp-2 细胞内 HSV-1 的增殖和释放，这在单步生长曲线中得到了证实。[3] 辛基没食子酸酯 (15 μM) 可选择性地加速 HSV-1 感染的 HEp-2 细胞的死亡，这通过台盼蓝排除法测定。[3] 在人血清白蛋白 (HSA) 和牛血清白蛋白 (BSA) 存在的情况下，辛基没食子酸酯的荧光强度选择性地增强。在1:1的摩尔比下，与HSA和BSA混合后，发射强度分别增加了约49倍和11倍（λex = 320 nm）。[2]
向辛基没食子酸酯-HSA混合物中加入与Sudlow II位点结合的布洛芬（IP）后，辛基没食子酸酯的STD NMR信号和荧光增强完全被抑制，表明布洛芬主要与Sudlow II位点结合。苯丁唑酮（PB）则不抑制荧光增强。[2]

DPPH自由基清除试验：通过测定清除稳定DPPH自由基的能力来评价抗氧化活性。将不同浓度的没食子酸辛酯加入DPPH甲醇溶液中。在室温下避光孵育30分钟后，在517 nm处测定吸光度。EC50值通过三次重复实验的线性插值法获得。[1] 三烯降解（CAT）试验：使用油水乳液体系测定过氧自由基（ROO•）清除能力。以AAPH作为过氧自由基来源，可降解桐油中的共轭三烯——桐酸，导致在273 nm处测得的吸光度变化。通过没食子酸辛酯在降解曲线中引起的滞后期来评价其保护作用。计算曲线下面积 (AUC)，并将 (AUC_样品 - AUC_对照) 与浓度的关系斜率与 Trolox 的斜率进行比较，以确定 Trolox 等效抗氧化活性 (TEAC)。[1]
髓过氧化物酶 (MPO)/H₂O₂ HOCl 生成测定：在无细胞体系中测定了没食子酸辛酯对 HOCl 生成的影响。在 96 孔板中进行反应，加入 PBS、牛磺酸 (10 mM)、MPO (10 nM)、H₂O₂ (100 μM) 和待测化合物。用 H₂O₂ 触发反应，在 37°C 下孵育 30 分钟，并用过氧化氢酶终止反应。加入 TMB 溶液，并在 630 nm 处测量吸光度以定量牛磺酸氯胺（HOCl 的产物）。 [1]
荧光光谱：使用荧光分光光度计，在激发波长λex = 280 nm时，采用5/5 nm（激发/发射）狭缝宽度；在激发波长λex = 320 nm时，采用10/5 nm狭缝宽度，对没食子酸辛酯与蛋白质的相互作用进行荧光分析。[2]
荧光寿命测量：使用时间相关单光子计数法测量没食子酸辛酯对蛋白质荧光的时间分辨猝灭。蛋白质浓度为4.0 μM，没食子酸辛酯浓度分别为4.0 μM和8.0 μM。激发波长和发射波长分别为280 nm和345 nm。 [2]
圆二色谱 (CD) 光谱：使用 CD 光谱仪评估了没食子酸辛酯对蛋白质二级结构的影响。在 HSA/BSA 浓度恒定为 2.0 μM 的条件下，记录了不同浓度（0 至 8.0 μM）的没食子酸辛酯的光谱。测量在 298 K 下进行，使用 2 mm 石英比色皿，扫描波长范围为 250 nm 至 190 nm，步长为 1 nm。[2]
核磁共振波谱（STD 和 WATERGATE）：在 298 K 下，使用 700 MHz Inova 核磁共振波谱仪，通过一维 WATERGATE 和饱和转移差分 (STD) 核磁共振实验表征了没食子酸辛酯与 HSA 之间的相互作用。样品包含 0.01 mM HSA 和 0.4 mM 没食子酸辛酯。 WATERGATE 谱图的采集和弛豫时间均为 2 秒，扫描次数为 32 次。STD 实验采用 2 秒高斯脉冲序列，交替照射频率为 -0.7 ppm 或 -45 ppm，扫描次数为 256 次。[2]
分子对接：使用 Discovery Studio 3.1 中的 CDOCKER 对接程序模拟了没食子酸辛酯与人血清白蛋白 (HSA)（Sudlow II 位点）的结合模式。HSA 的晶体结构为 2BXG。生成并优化了没食子酸辛酯的三维结构。选择 CDOCKER 能量最低的构象进行分析。[2]

PMN分离和ROS测定（鲁米诺依赖性化学发光法）：使用Histopaque-1077/1119梯度从血液中分离人多形核中性粒细胞（PMN）。将PMN（1 x 10^6 个细胞/mL）与没食子酸辛酯在37°C下预孵育10分钟。加入鲁米诺（10 μM）和刺激物（幽门螺杆菌、酵母聚糖或PMA）。使用发光仪测量30-90分钟的光发射。通过积分光发射来测量ROS的产生，并计算相对于对照组的抑制效力。[1]
超氧阴离子测定（鲁米诺依赖性化学发光法）：将分离的PMN（1 x 10^6 个细胞/mL）与没食子酸辛酯在37°C下预孵育10分钟。加入鲁米诺（10 μM）和刺激物。使用发光仪测量 30-60 分钟内的发光情况，以特异性地测量超氧阴离子自由基的产生。[1]
超氧阴离子测量（WST-1 法）：将分离的 PMN（1 x 10^6 个细胞/mL）与没食子酸辛酯在 37°C 下预孵育 10 分钟。加入 WST-1（500 μM）和刺激物。孵育 30-90 分钟后，通过分光光度法在 450 nm 处测定 WST-1 还原为可溶性甲臜的吸光度来测量细胞外超氧阴离子的释放。 [1]
硝基蓝四唑 (NBT) 检测：将 PMN（1 x 10^6 个细胞/mL）与 PMA (0.1 μM) 和没食子酸辛酯 (10 μM) 孵育 30 分钟。加入 NBT 溶液，继续孵育 30 分钟。然后将细胞离心涂片（细胞离心涂片），用 May-Grunwald-Giemsa 染色，并在显微镜下观察。测定含有深色甲臜颗粒（超氧化物还原 NBT）的细胞百分比。[1]
中性粒细胞形态学检测：将 PMN（1 x 10^6 个细胞/mL）与没食子酸辛酯 (10 μM) 预孵育 10 分钟，然后用 PMA (0.1 μM) 激活 30 分钟。将细胞离心至载玻片上，用 May-Grunwald-Giemsa 染色，并在光学显微镜下观察，以评估空泡化和核破坏情况，作为 NADPH 氧化酶活化和保护的指标。[1]
次氯酸生成（活化中性粒细胞）：将 PMN（2 x 10^6 个细胞/mL）在含有 10 mM 牛磺酸和没食子酸辛酯的 PBS 缓冲液中于 37°C 预孵育 10 分钟。用 PMA 或酵母聚糖刺激细胞 30-90 分钟。用过氧化氢酶终止反应。转移上清液，并加入 TMB 溶液。在 630 nm 处用分光光度计检测生成的氧化产物，以测量牛磺酸氯胺（由 HOCl 产生）。 [1]
抗菌活性测定（肉汤微量稀释法测定最小抑菌浓度MIC）：将幽门螺杆菌（ATCC 43504）悬液（10^6 CFU/mL）加入含有10%胎牛血清和不同浓度没食子酸辛酯（终浓度62.5至1000 μg/mL）的96孔板中。将培养板置于36-37℃、微需氧环境（10% CO2）下培养72小时。培养前后均采用分光光度计在630 nm处测定细菌生长情况。最小抑菌浓度（MIC）定义为抑制细菌生长90%以上的最低浓度。从每个孔中取样接种至琼脂平板上，以测定最小杀菌浓度（MBC）。 [1]
病毒生长抑制（病毒产量测定）：将汇合的HEp-2或Vero细胞单层以指定的MOI感染HSV-1、VSV或脊髓灰质炎病毒。将感染的细胞在37°C下于含0.1% BSA和不同浓度没食子酸辛酯的无血清MEM培养基中孵育。孵育后（例如，HSV-1孵育24小时），通过冻融法收集全部子代病毒（细胞+培养基）。通过在Vero细胞上进行噬斑试验来测定感染性病毒颗粒的数量。[3]
直接杀病毒活性测定：将病毒制剂（10^5 PFU的HSV-1，溶于含1%小牛血清的PBS中）与不同浓度的没食子酸辛酯混合，并在室温下孵育10分钟。将混合物用冰冷的PBS稀释，并通过Vero细胞噬斑试验测定剩余的感染性病毒。[3]
细胞病变效应（CPE）和细胞死亡测定：将HEp-2细胞进行模拟感染或HSV-1感染，并在有或无没食子酸辛酯（15 μM）的条件下孵育。通过显微镜观察圆形细胞来确定CPE。为了测定细胞死亡，将细胞用胰蛋白酶消化，并通过台盼蓝染色排除法测定活细胞和死细胞的数量。[3]
添加时间实验：将感染HSV-1的HEp-2细胞在不含试剂的培养基中孵育。在感染后不同时间点（pi），向培养基中添加没食子酸辛酯，使其最终浓度为14.2 μM（4 μg/mL）。在感染后 23 小时，对每种培养物中的子代病毒总数进行测定，以确定病毒增殖周期中对试剂敏感的步骤。[3]

在HEp-2细胞中，与具有更长烷基链的没食子酸酯相比，辛基没食子酸酯的细胞毒性相对较低。浓度为15 μM（约4.2 μg/mL）时，经台盼蓝染色排除法测定，在孵育24或36小时后，未感染的HEp-2细胞中出现中等程度的细胞死亡。此外，无论是否感染病毒，辛基没食子酸酯均能显著改变HEp-2细胞的胞质结构（细胞变圆、收缩、脱落）。[3] 联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会（JECFA）制定了成人每日允许摄入量（ADI）为0.2 mg/kg体重（以丙酯、辛酯和月桂酯的总和计）。 [1] 研究表明，没食子酸烷基酯（包括没食子酸辛酯）可以抑制丙酮酸羧化和乳酸糖异生，其中没食子酸辛酯的抑制作用更强，这凸显了其对肝脏的潜在毒性作用。[1]

[1]. Octyl gallate, a food additive with potential beneficial properties to treat Helicobacter pylori infection. Food Funct. 2017 Jul 19;8(7):2500-2511.

[2]. Octyl gallate: An antioxidant demonstrating selective and sensitive fluorescent property. Food Chem. 2017 Mar 15;219:268-273.

[3]. Antiviral effect of octyl gallate against DNA and RNA viruses. Antiviral Res. 2007 Feb;73(2):85-91.

没食子酸辛酯是由没食子酸的羧基和辛醇的羟基缩合而成的没食子酸酯。它是一种食品抗氧化剂、植物代谢物和降血糖剂。没食子酸辛酯是人造黄油中常用的抗氧化剂。研究表明，没食子酸辛酯具有抗病毒特性（A7906）。

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没食子酸辛酯是食品工业中广泛使用的食品添加剂。该研究强调，由于其具有双重抗活性氧（ROS）和抗幽门螺杆菌活性，因此在治疗幽门螺杆菌感染方面具有潜在的应用价值，而这种活性主要取决于其疏水性。[1]
没食子酸辛酯是一种国际公认的抗氧化剂，欧盟食品中允许的最大含量为25至400毫克/千克。 [2]在日本，辛基没食子酸酯被厚生劳动省认定为准药品。[3]辛基没食子酸酯在人血清白蛋白（HSA）存在下具有选择性和灵敏的荧光特性，可用于通过标准加入法测定其浓度，但该方法必须在特定条件下进行（例如，使用相应的空白食品样品）。[2]

C15H22O5

282.3322

282.146

1034-01-1

61253

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

482.9±40.0 °C at 760 mmHg

101-104 °C(lit.)

177.1±20.8 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.552

5.26

86.99

3

5

9

20

269

0

NRPKURNSADTHLJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H22O5/c1-2-3-4-5-6-7-8-20-15(19)11-9-12(16)14(18)13(17)10-11/h9-10,16-18H,2-8H2,1H3

octyl 3,4,5-trihydroxybenzoate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~442.74 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。