ODN-2395

目录号: V44297 纯度: ≥98%
ODN-2395 是一种新型、有效的 C 类寡脱氧核苷酸,可作为 TLR9 激动剂,具有用作疫苗佐剂的潜力。
ODN-2395 CAS号: 1254617-22-5
产品类别: New3
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产品描述
ODN-2395 是一种新型高效的 C 类寡脱氧核苷酸,可作为 TLR9 激动剂,具有用作疫苗佐剂的潜力。ODN 2395 的序列为 5'-tcgtcgttttcggcgc:gcgccg-3'。
ODN-2395(CAS#: 1254617-22-5)是一种合成的C类寡脱氧核苷酸(ODN),可作为强效的Toll样受体9(TLR9)激动剂和疫苗佐剂。其序列为5'-tcgtcgttttcggcgc:gcgccg-3',其中碱基经硫代磷酸酯化以增强核酸酶抗性,并且具有部分回文序列cggcgc:gcgccg,使其能够形成串联体。
生物活性&实验参考方法
靶点
ODN-2395 specifically targets Toll-like receptor 9 (TLR9) within endosomes of plasmacytoid dendritic cells and B cells. As a Class C agonist, it contains both a phosphorothioate backbone and a palindromic sequence. It strongly induces the production of both pro-inflammatory cytokines (e.g., IL-6, TNF-alpha) and type I interferons (e.g., IFN-alpha), thereby stimulating both innate and adaptive immune responses.
体外研究 (In Vitro)
体外实验表明,ODN-2395 可激活 TLR9 信号通路。用 ODN-2395 处理人外周血单核细胞 (PBMC) 可促进浆细胞样树突状细胞 (pDC) 和 B 细胞的成熟。ODN-2395 能有效诱导多种细胞因子和趋化因子的分泌,包括 IFN-α、IP-10、IL-6 和 TNF-α。此外,ODN-2395 还能上调抗原呈递细胞上共刺激分子(CD80、CD86)的表达。
体内研究 (In Vivo)
在体内,ODN-2395 可用作疫苗佐剂。当与抗原(例如病毒蛋白或肿瘤抗原)联合给药时,它能显著增强抗原特异性免疫应答的强度和质量。它能促进 Th1 型免疫应答,其特征是高水平的 IgG2a 抗体和 CD8+ T 细胞应答。在传染病和癌症的临床前模型中,已证实其作为佐剂的有效性。
酶活实验
对于非细胞介导的TLR9结合实验,标准方案包括使用生物素标记的ODN-2395和链霉亲和素包被的微孔板。将重组人或小鼠TLR9胞外结构域加入微孔板中。使用抗TLR9抗体检测结合情况。可使用未标记的ODN-2395或非特异性ODN进行竞争性结合实验以评估选择性。或者,可以使用表面等离子共振(SPR)实验来测定ODN-2395/TLR9相互作用的解离常数(KD)。
细胞实验
对于体外细胞实验,分离小鼠脾细胞或人外周血单核细胞 (PBMC) 并接种于 96 孔板中。用浓度为 0.1-10 uM 的 ODN-2395 处理细胞 24-48 小时。收集上清液,并使用多重 ELISA 检测细胞因子分泌情况。或者,也可以使用报告基因细胞系(例如 HEK-Blue hTLR9 细胞)来检测 NF-κB 或 IRF 通路的激活情况,这些细胞系在 TLR9 激活后会分泌碱性磷酸酶报告基因。
动物实验
在体内动物模型中,ODN-2395 通常用作佐剂。标准方案包括在第 0 天和第 14 天,将模型抗原(例如 OVA,10 μg)与 ODN-2395(例如,每只小鼠 20-50 μg)混合,通过皮下或肌肉注射免疫小鼠(例如 C57BL/6)。对照组仅注射抗原。在第 28 天采集血液,通过 ELISA 检测抗原特异性抗体滴度(IgG、IgG1、IgG2a)。收集脾脏进行 T 细胞 ELISpot 检测,以检测分泌 IFN-γ 的 T 细胞。
药代性质 (ADME/PK)
ODN-2395 是一种 22 聚体寡核苷酸,分子量约为 7035 Da。其硫代磷酸酯骨架赋予其抗核酸酶降解的能力,使其在血浆中的半衰期比天然 DNA 更长(体内估计为数小时)。作为佐剂使用时,通常在注射部位给药,并被局部免疫细胞吸收。全身吸收可导致可预测的免疫激活,最终通过细胞代谢清除。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
作为一种免疫刺激性寡核苷酸,ODN-2395 的毒性与其作用机制密切相关。TLR9 的过度激活可导致“细胞因子风暴”,其特征是炎症细胞因子过度释放,进而引起发热、低血压和组织损伤。在临床前研究中,全身给药可能引起短暂的流感样症状和脾肿大。理论上,长期给药可能导致自身免疫性疾病。ODN-2395 目前是一种研究工具,尚未获临床批准。
参考文献

[1]. Modulation of TLR9 response in a mouse model of herpes simplex virus encephalitis. Antiviral Res. 2012 Dec;96(3):414-21.

其他信息
ODN-2395 是一种 C 类 CpG ODN,属于 TLR9 激动剂的三大主要类别(A、B、C)之一,这三大类别根据其结构和细胞因子谱进行区分。A 类 ODN 能强效诱导 IFN-α,但对 B 细胞活化的诱导作用较弱;B 类 ODN 则相反;C 类 ODN(如 ODN-2395)能诱导平衡的免疫反应,因此特别适合作为疫苗佐剂。其回文序列使其能够形成多聚体结构,这可能是其高活性的关键因素。ODN-2395 尚未获准用于人体,但已广泛应用于兽用疫苗和相关研究。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
NA??MOLECULARWEIGHT
分子量
0
CAS号
1254617-22-5
相关CAS号
Biotin-labeled ODN 2395 sodium;FITC-labeled ODN 2395 sodium
外观&性状
White to off-white solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们