| 规格 | 价格 | |
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| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
TOPK (IC50 = 2.6 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：OTS514 强烈抑制 TOPK 阳性癌细胞的生长。它还对卵巢癌细胞系显示出显着的生长抑制作用，IC50 值为 3.0 至 46 nM。 OTS514对5种肾癌细胞系VMRC-RCW、Caki-1、Caki-2、769-P和786-O具有生长抑制作用，其中TOPK高表达。 IC50 值范围为 19.9 至 44.1 nM 细胞测定：细胞在补充有 20% 胎牛血清和 1×StemSpan CC100 的 RPMI 中培养。用 OTS514（20 或 40 nM）或 OTS964（100 或 200 nM）处理细胞 48 小时。收集的细胞用PBS洗涤并重悬于100ml PBS中，随后用CD41a抗体在室温下染色20分钟。最后，再次用PBS洗涤细胞，然后通过流式细胞术分析CD41a染色。使用抗STAT5抗体通过蛋白质印迹检查STAT5的表达。
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| 体内研究 (In Vivo) |
对人类肺癌细胞的小鼠异种移植研究证明了 OTS514 的体内功效，但发现该化合物也会引起严重的造血毒性 [红细胞 (RBC) 和白细胞 (WBC) 减少，并伴有血小板显着增加。与赋形剂对照相比，口服 OTS514 显着延长了 ES-2 腹部播散异种移植模型的总生存期（P < 0.001）。
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| 酶活实验 |
如前所述，通过蛋白质印迹检测TOPK的表达和组蛋白H3（Ser10）的磷酸化。用于蛋白质印迹的其他抗体如下：c-Src（1:1000）、Fyn（1:1000”）和Lyn（1:1000“）。使用细胞计数试剂盒-8通过比色测定法测量体外细胞存活率。将细胞（100μl）以产生连续线性生长的密度（A549，1×103个细胞；LU-99，2×103个电池；DU4475，4×103个手机；MDA-MB-231，3×103个电脑；T47D，3×104个手机；Daudi，5×103个汽车；UM-UC-3，1×105个手机；HCT-116，1×104个汽车；MKN1，2×104个电脑；MKN45，4×105个电脑；HepG2，4×107个电脑；MIAPaca-2，2×107个手机；22Rv1，6×103个；HT29，3×105个汽车）铺在96孔板中。在37°C下暴露于化合物72小时之前，让细胞粘附过夜。用分光光度计在450nm波长下读取板。所有检测均一式三份。在测量IC50值后，我们计算z分数以产生P值。在IC50值（nM）的对数转换（基数10）后，计算13个TOPK阳性细胞系的IC50对数值的平均值和SD。OTS514的平均值和标准差分别为0.76和0.23，OTS964分别为1.53和0.26。然后，根据HT29 IC50值，OTS514和OTS964的z得分分别为6.44和3.62[1]。
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| 细胞实验 |
人造血干细胞的体外分化[1]
从健康供体的生长因子动员外周血中纯化CD34+HSC，然后在添加了20%胎牛血清和1×StemSpan CC100的RPMI中培养细胞。用OTS514（20或40 nM）或OTS964（100或200 nM）处理细胞48小时。收集的细胞用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重新悬浮在100μl PBS中，然后在室温下用CD41a抗体染色20分钟。最后，再次用PBS洗涤细胞，然后在BD FACSCalibur上通过流式细胞术分析CD41a染色。用抗STAT5抗体通过蛋白质印迹检测STAT5的表达。 微阵列分析[2] 5×105 H929细胞用0.015%DMSO、15 nMOTS514、15µM来那度胺（LEN）或5 nM卡非佐米（CFZ）处理24小时。此外，还进行了每种活性药物组合（OTS514/LEN、OTS514/CFZ、OTS514/LEN/CFZ和LEN/CFZ）。使用Qiagen RNeasy迷你试剂盒提取来自三个独立实验（共24个样本）的RNA，并在芝加哥大学功能基因组学核心设施的两个人类HT12v4珠阵列上进行分析。使用分子特征数据库v6.1.27中的标志基因集对分位数标准化、背景减除的数据进行基因集富集分析（GSEA），28通过使用独创性途径分析生成上游调控因子分析。 细胞在补充有1×StemSpan CC100和20%胎牛血清的RPMI中培养。将细胞暴露于 OTS964（100 或 200 nM）或 OTS514（20 或 40 nM）48 小时。 PBS 洗涤并重悬于 100 毫升 PBS 后，使用 CD41a 抗体在室温下对收集的细胞染色 20 分钟。最终，细胞再进行一次 PBS 洗涤，然后进行流式细胞术分析 CD41a 染色。使用抗 STAT5 抗体，使用蛋白质印迹来测量 STAT5 表达。 |
| 动物实验 |
携带A549细胞异种移植模型的雌性BALB/cSLC-nu/nu小鼠[1]
1、2.5和5 mg/kg 静脉注射；每日一次，持续2周 体内异种移植研究[1] 将A549细胞（1 × 10⁷个细胞）或LU-99细胞（5 × 10⁶或1 × 10⁷个细胞）皮下注射到雌性BALB/cSLC-nu/nu小鼠左侧腹部。当A549异种移植瘤平均体积达到200 mm³或LU-99异种移植瘤平均体积达到150或200 mm³时，将动物随机分为6只一组。当对LU-99异种移植瘤进行较长时间（>14天）的肿瘤监测时，起始肿瘤体积设置为150 mm³，因为LU-99细胞生长速度极快，而200 mm³的起始体积会因动物伦理问题而限制观察时间（例如，接种200 mm³的LU-99肿瘤在第15天平均肿瘤体积达到约1100 mm³，而A549肿瘤在第15天达到约490 mm³）。静脉给药时，化合物配制于5%葡萄糖溶液中，经尾静脉注射。口服给药时，化合物（例如OTS514）配制于0.5%甲基纤维素溶液中，并按指定剂量和方案进行灌胃给药。两种给药途径的给药体积均为10 ml/kg体重。浓度在正文和图表中均有说明。肿瘤体积使用游标卡尺测量。通过公式“长×宽²×1/2”将结果转换为肿瘤体积（mm³）。小鼠体重在同一天测定，作为耐受性的指标。动物实验分别在KAC有限公司（A549异种移植瘤）和OncoTherapy Science公司（LU-99异种移植瘤）进行，均符合各机构的《实验动物饲养和使用指南》。肿瘤生长指数（TGI）根据公式[1 − (T − T0)/(C − C0)] × 100计算，其中T和T0分别为实验组第15天或第22天和第1天的平均肿瘤体积，C和C0分别为载体对照组的平均肿瘤体积。白细胞计数在KAC有限公司使用Sysmex XT-1800iV分析仪（Sysmex公司）或使用细胞计数板进行。血液被收集到含有 EDTA 的采血管中，以防止血液凝固并进行血细胞计数。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
TOPK（T淋巴因子激活的杀伤细胞来源蛋白激酶）在多种癌组织中，包括肺癌和三阴性乳腺癌，均被高度且频繁地激活，并在癌细胞有丝分裂中发挥着不可或缺的作用。我们报道了一种强效TOPK抑制剂OTS964 {(R)-9-(4-(1-(二甲氨基)丙-2-基)苯基)-8-羟基-6-甲基噻吩并[2,3-c]喹啉-4(5H)-酮}的开发，该抑制剂能够以高亲和力和选择性抑制TOPK激酶活性。与TOPK小干扰RNA (siRNA)的敲低作用类似，该抑制剂在体外以及人肺癌异种移植模型中均能导致细胞分裂缺陷，并最终诱导癌细胞凋亡。尽管游离化合物的给药会诱发造血系统不良反应（白细胞减少伴血小板增多），但脂质体制剂给药可有效使小鼠移植肿瘤完全消退，且未观察到任何不良反应。我们的结果表明，抑制TOPK活性可能是治疗多种人类癌症的可行治疗方案。[1]
多发性骨髓瘤（MM）目前仍被认为是无法治愈的，因此亟需研发新的药物。有丝分裂激酶T-LAK细胞来源的蛋白激酶/PDZ结合激酶（TOPK/PBK）与多种癌症的肿瘤细胞增殖、癌症干细胞的维持以及患者预后不良密切相关。在本报告中，我们首次证实了TOPK抑制剂OTS514具有显著的抗骨髓瘤作用。 OTS514 在纳摩尔浓度下即可诱导一系列人骨髓瘤细胞系 (HMCL) 发生细胞周期阻滞和凋亡，并能抑制多发性骨髓瘤 (MM) 患者外周血单核细胞中假定的 CD138+ 干细胞群的增殖。在 MM 患者的骨髓细胞中，OTS514 处理对恶性 CD138+ 浆细胞的杀伤作用强于对 CD138- 浆细胞的杀伤作用。在侵袭性小鼠异种移植模型中，每周 5 天口服 100 mg/kg 的 OTS964 耐受性良好，且与对照组相比，肿瘤体积缩小了 48%-81%，具体缩小程度取决于初始移植瘤的大小。OTS514 处理 HMCL 后，FOXO3 及其转录靶点 CDKN1A (p21) 和 CDKN1B (p27) 的表达上调，并诱导了细胞凋亡。 TOPK抑制剂还能诱导FOXM1的丢失，并破坏AKT、p38 MAPK和NF-κB信号通路。OTS514的作用与p53突变或缺失状态无关。OTS514与来那度胺联合治疗HMCL可产生协同效应，这为在现有骨髓瘤治疗方案中评估TOPK抑制剂提供了理论依据。[2] |
| CAS号 |
1338544-87-8
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|---|---|
| 相关CAS号 |
1338544-87-8 (HBr) 1338540-63-8 1338541-25-5 (s-isomer) 1338545-92-8 (S-isomer HCl) |
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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