PF-431396

FAK/focal adhesion kinase (IC50 = 2 nM); PYK2/proline-rich tyrosine kinase 2 (IC50 = 11 nM); BRD4 (Kd = 445 nM)
Proline-rich Tyrosine Kinase 2 (PYK2): Ki ≈ 1.3 nM (binding affinity, determined by X-ray crystallography and kinase inhibition assays); Focal Adhesion Kinase (FAK, a PYK2 family kinase): IC₅₀ > 1000 nM (showing high selectivity for PYK2 over FAK) [1]
- Proline-rich Tyrosine Kinase 2 (PYK2): PF-431396 was used to inhibit PYK2 activity, with effective concentrations ranging from 1 μM to 5 μM in B cell assays [2]
- Proline-rich Tyrosine Kinase 2 (PYK2): PF-431396 was used to block PYK2-mediated signaling in osteoprogenitor cells and in vivo bone formation models [3]

在 A20 细胞中，PF-431396 阻断抗 Ig 和聚集 LFA-1 诱导的 Pyk2 和 FAK 酪氨酸磷酸化，并进一步阻断 B 细胞扩散。 PF-431396 始终如一地抑制因不添加钙而诱导的蛋白质酪氨酸磷酸化 (PY) 的增加，以及在有钙存在的情况下由 W-7 诱导的蛋白质酪氨酸磷酸化 (PY) 的增加。激酶测定：PF-431396 是粘着斑激酶 (FAK) 和富含脯氨酸酪氨酸激酶 2 (PYK2) 的双重抑制剂（IC50 值分别为 2 和 11 nM），PF-431396 对 BRD4 的 Kd 值为 445 nM。 IC50值：2nM（FAK）； 11nM（PYK2）； 445 nM（BRD4 的 KD）[1] [2] 目标：FAK； PYK2； BRD4 体外：PF-431396 是 Pyk2 和 FAK 的有效且高选择性的基于嘧啶的抑制剂，与 Pyk2 和 FAK 的酪氨酸磷酸化涉及初始自磷酸化或转磷酸化步骤的观点一致，用 PF-431396 处理 A20 细胞当细胞在悬浮液中受到 ECM 刺激时，可阻断抗 Ig 诱导的 Pyk2 和 FAK 酪氨酸磷酸化。还测定了 PF-431396 (Kd = 445 ± 42 nM) 和 PIM 抑制剂 (Kd = 565 ± 63 nM) 的纳摩尔亲和力。

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在重组PYK2激酶活性实验中：PF-431396（0.01 nM–100 nM）可浓度依赖性抑制PYK2激酶活性。1 nM时抑制率约50%，10 nM时抑制率超过90%；对FAK的抑制活性极低（1000 nM时抑制率<10%），且在100 nM浓度下对其他激酶（如Src、Abl、EGFR）无明显抑制[1]
- 在小鼠脾脏B细胞中：抗IgM（10 μg/mL）刺激可诱导PYK2在Tyr402位点磷酸化（Western blot检测）；PF-431396（1 μM、5 μM）预处理可浓度依赖性降低p-PYK2水平，5 μM时p-PYK2水平较抗IgM刺激对照组降低约70%。此外，PF-431396（5 μM）可抑制抗IgM诱导的B细胞在纤连蛋白包被表面的铺展：铺展B细胞比例从对照组的~65%降至~30%[2]
- 在原代小鼠骨祖细胞（颅盖骨分离）中：PF-431396（1 μM、3 μM）可浓度依赖性促进细胞增殖（Brdu掺入实验），3 μM时Brdu阳性细胞比例较对照组增加约40%；同时促进成骨分化：培养14天后，碱性磷酸酶（ALP）活性（3 μM时）增加约50%，矿化结节形成（茜素红染色）（3 μM时）增加约60%[3]

PYK2抑制剂可增加OVX大鼠的骨形成并防止骨丢失。[3]
接下来，我们使用PF-431396 (PF-46)（PF-46）测试了PYK2活性的药理学调节是否会影响OVX大鼠的骨量，这是一种已建立的绝经后骨质疏松症临床前疾病模型，PF-431396 (PF-46)是一种基于嘧啶的强效PYK2抑制剂，对重组PYK2酶的IC50为31 nM（图5A和SI方法）。4个月大的OVX大鼠每天用赋形剂PF-431396（PF-46）（10和30mg/kg）或EE（一种抗骨吸收剂）治疗28天。药代动力学研究表明，PF-431396的游离血浆浓度在高剂量下覆盖PYK2 IC50至少8小时（数据未显示）。如股骨远端中期的μCT图像所示（图5B），载体治疗的OVX大鼠的骨小梁质量比假对照组少。EE和PF-431396都抵消了OVX诱导的骨丢失，完全保留了总骨含量和总骨密度（图5C和D）。与之前的研究一致，与假对照组相比，载体治疗的OVX大鼠表现出高骨转换率，其特征是骨形成（每骨表面矿化表面和每骨表面骨形成率）和骨吸收（破骨细胞表面和血清CTX）增加（表1和图5E和F）。EE对OVX大鼠的治疗抑制了高骨转换，与赋形剂治疗相比，骨吸收和形成减少。与EE相比，两种剂量的PF-431396均显著提高了骨形成率，同时矿化表面和矿物附着率也升高（表1和图5E），表明PF-431396-促进了成骨细胞的募集和活性。与此一致，PF-431396增加了7天hMSC培养物中的碱性磷酸酶活性（P.C.B.和L.B.，数据未显示）。尽管高剂量PF-431396降低了胫骨近端的破骨细胞表面（骨吸收的参考参数），但在治疗2周（数据未显示）和4周（图5F）后，两种剂量都没有改变血清CTX（骨吸收系统生物标志物）。这些结果表明，PF-431396是一种强效的PYK2抑制剂，主要通过刺激骨形成来预防雌激素缺乏引起的大鼠骨丢失，为PYK2在调节骨形成中的作用提供了独立的药理学证实。

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在去卵巢（OVX）小鼠骨质疏松模型（雌性C57BL/6小鼠，8周龄）中：小鼠分为假手术组、OVX对照组（溶剂）和OVX+PF-431396组。PF-431396以30 mg/kg剂量通过灌胃给药，每日1次，持续4周（OVX术后2周开始给药）。与OVX对照组相比：（1）股骨松质骨密度（BMD）增加约20%（micro-CT分析）；（2）骨小梁数量（Tb.N）增加约18%，骨小梁厚度（Tb.Th）增加约15%；（3）骨形成率（BFR/BS，钙黄绿素双标记法测定）增加约30%；（4）成骨细胞表面/骨表面比值（Ob.S/BS）增加约25%（股骨切片组织形态计量分析）[3]

PYK2抑制剂的IC50测定。[3]
将含有150 pM PYK2结构域酶、30 mM肽底物和10 mM DTT的反应混合物在测定缓冲液[50 mM Hepes（pH 7.0）、1 mM MgCl2和0.1%BSA]中分配到384孔测定板的所有孔中。将稀释在二甲亚砜（DMSO）中的化合物分三次分配到测定板中。每项试验中都包括仅DMSO（阳性）对照和强效PYK2抑制剂（阴性）对照，分别用于设定最大和最小反应。将在测定缓冲液中稀释的ATP分配到整个板上，使其终浓度为50 mM（ATP的浓度为»kM）。然后将测定板在30°C下孵育2小时。向板的每个孔中加入含有45 mM EDTA、10´PTK绿色示踪剂和10´抗磷酸酪氨酸抗体的停止/检测混合物。将检测反应在室温下在黑暗中孵育1小时，然后使用荧光偏振协议（485 nm激发和530 nm发射，使用505 nm二向色滤光片）在Analyst GT上读取荧光偏振。通过使用GraphPad Prism 4或类似的专有软件并拟合到S形剂量反应曲线，从剂量反应曲线计算IC50测定值。

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PYK2激酶活性测定实验：在大肠杆菌中表达人PYK2催化结构域（残基45–640），并通过镍亲和层析纯化。激酶反应在含50 mM Tris-HCl（pH7.5）、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、20 μM ATP（含[γ-³²P]ATP）和PYK2特异性底物肽（序列：EAIYAAPFAKKK）的缓冲液中进行。加入浓度为0.01 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM的PF-431396（溶剂为对照），反应体系总体积25 μL，37℃孵育30分钟后，取20 μL点样至磷酸纤维素滤纸上终止反应。滤纸用0.75%磷酸洗涤以去除未掺入的ATP，通过闪烁计数器测定放射性强度。计算抑制率，并将数据拟合至竞争性抑制模型以确定Ki值[1]
- FAK选择性实验：采用与PYK2相同的激酶反应条件，使用重组人FAK催化结构域（残基402–687）和FAK底物肽（YEKLLPTPPQVPSR）。PF-431396测试浓度高达1000 nM，通过闪烁计数测定FAK激酶活性，评估交叉抑制情况[1]

细胞扩散[2]
组织培养板在4°C下用大鼠抗小鼠LFA-1单克隆抗体或纤维连接蛋白包被过夜，然后用含有2%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲盐水封闭1小时。A20细胞（10~5个细胞在0.5ml RPMI 1640培养基中，含有2%胎牛血清和50μm 2-巯基乙醇）用DMSO或PF-431396预处理45分钟，加入包被的孔中，在37°C下孵育。标记为铺展的细胞呈深色，形状细长或不规则，有明显的膜突起。

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小鼠脾脏B细胞分离及PYK2磷酸化检测：从8周龄C57BL/6小鼠中获取脾脏，通过磁珠阴性分选分离B细胞。分离的B细胞（1×10⁶个细胞/mL）在含10% FBS的RPMI 1640培养基中培养，用PF-431396（0 μM、1 μM、5 μM）预处理1小时后，加入抗小鼠IgM（10 μg/mL）刺激20分钟，随后用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。蛋白裂解液经SDS-PAGE分离后转印至PVDF膜，用抗p-PYK2（Tyr402）和抗总PYK2抗体孵育，ImageJ定量条带灰度值，计算p-PYK2/总PYK2比值[2]
- B细胞铺展实验：在24孔板中放置纤连蛋白包被的盖玻片（10 μg/mL），将分离的B细胞（5×10⁴个细胞/孔）用PF-431396（0 μM、5 μM）预处理1小时后加入盖玻片，抗IgM（10 μg/mL）刺激30分钟。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1% Triton X-100透化，鬼笔环肽-TRITC染色（显示F-肌动蛋白）。当B细胞面积>未刺激B细胞面积的2倍时定义为“铺展”，在荧光显微镜下计数5个随机视野的铺展细胞百分比[2]
- 原代骨祖细胞增殖实验（Brdu掺入法）：从新生C57BL/6小鼠中获取颅盖骨，胶原酶消化后分离骨祖细胞，在含10% FBS的α-MEM培养基中培养。细胞（5×10³个细胞/孔）接种于96孔板，用PF-431396（0 μM、1 μM、3 μM）处理48小时，最后12小时加入Brdu（10 μM）。通过ELISA（抗Brdu抗体）检测Brdu掺入，测定450 nm处吸光度以定量增殖细胞[3]
- 成骨分化实验：原代骨祖细胞接种于6孔板（ALP活性检测）或24孔板（矿化检测），用PF-431396（0 μM、1 μM、3 μM）和成骨诱导培养基（α-MEM+10% FBS+50 μg/mL抗坏血酸+10 mM β-甘油磷酸钠）处理。ALP活性检测：培养7天后裂解细胞，以对硝基苯磷酸酯（pNPP）为底物测定ALP活性（405 nm吸光度）；矿化检测：培养14天后，4%多聚甲醛固定细胞，2%茜素红S（pH4.2）染色30分钟，洗涤去除 excess 染料，观察矿化结节并通过ImageJ定量染色面积[3]

Sprague-Dawley雌性大鼠用于PYK2药理学研究。大鼠在4.5-5月龄时进行假手术或卵巢切除术。从术后第二天开始，连续28天，每天通过灌胃给予动物赋形剂（20% β-环糊精水溶液）或PYK2抑制剂（PF-431396 (PF-46)），剂量为10或30 mg/kg。[3]

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卵巢切除（OVX）小鼠骨质疏松模型：将6周龄的C57BL/6雌性小鼠随机分为三组（每组n=8）：（1）假手术组：假手术（不切除卵巢）；（2）OVX对照组：OVX手术+灌胃溶剂（5% DMSO、10% Cremophor EL、85%生理盐水）； （3）OVX + PF-431396 组：卵巢切除术（OVX）+ 灌胃给予 PF-431396（30 mg/kg，溶于相同溶剂）。手术在异氟烷麻醉下进行。术后两周（以诱导骨丢失），开始给药，持续 4 周（每日一次，10 μL/g 体重）。在给药的第 26 天和第 29 天，小鼠腹腔注射钙黄绿素（10 mg/kg）以标记骨形成。实验结束时（术后第 6 周），小鼠通过吸入二氧化碳处死。取出股骨：一根股骨固定于 4% 多聚甲醛中，用于微型 CT 分析和组织形态计量学分析；另一根股骨包埋于甲基丙烯酸甲酯中，用于未脱钙切片和钙黄绿素标记分析 [3]

在接受 PF-431396（30 mg/kg，灌胃，4 周）治疗的卵巢切除 (OVX) 小鼠中：未观察到明显的体重减轻（与基线相比体重变化 <5%）或死亡。血清生化分析（ALT、AST、肌酐、BUN）显示 PF-431396 组与 OVX 对照组之间无显著差异，表明未观察到明显的肝毒性或肾毒性 [3]

[1]. Structural characterization of proline-rich tyrosine kinase 2 (PYK2) reveals a unique (DFG-out) conformation and enables inhibitor design. J Biol Chem. 2009 May 8;284(19):13193-201.
[2]. B cell receptor-induced phosphorylation of Pyk2 and focal adhesion kinase involves integrins and the Rap GTPases and is required for B cell spreading. J Biol Chem. 2009 Aug 21;284(34):22865-77.
[3]. Proline-rich tyrosine kinase 2 regulates osteoprogenitor cells and bone formation, and offers an anabolic treatment approach for osteoporosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Jun 19;104(25):10619-24.

N-甲基-N-[2-[[[2-[(2-氧代-1,3-二氢吲哚-5-基)氨基]-5-(三氟甲基)-4-嘧啶基]氨基]甲基]苯基]甲磺酰胺是一种磺酰胺类化合物。

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富含脯氨酸的酪氨酸激酶2 (PYK2) 是一种胞质非受体酪氨酸激酶，参与多种信号通路。它是骨生成的负调控因子，被认为是治疗骨质疏松症的潜在药物靶点。人PYK2激酶结构域与不同抑制剂复合物的高分辨率结构证实了其经典的双叶激酶结构，并揭示了DFG环的构象变异性。我们的结构分析解释了经典激酶抑制剂PF-431396在FAK家族中缺乏选择性的原因。重要的是，新型DFG-out构象与两种二芳基脲抑制剂（BIRB796和PF-4618433）的相互作用揭示了一类独特的非受体酪氨酸激酶亚类，其特征是门控残基Met-502和独特的铰链环构象Leu-504。这是首个在DFG-out构象中，铰链环中的亮氨酸残基阻断ATP结合位点的实例。我们的结构、生物物理和药理学研究表明，DFG基序的独特特征，包括Leu-504铰链环的变异性，可用于开发选择性蛋白激酶抑制剂。[1]

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B细胞受体（BCR）信号传导促进整合素介导的黏附和细胞骨架重组。这导致B细胞扩散，从而增强B细胞结合抗原和被激活的能力。富含脯氨酸的酪氨酸激酶 (Pyk2) 和黏着斑激酶 (FAK) 是相关的胞质酪氨酸激酶，它们调控细胞黏附、细胞形态和细胞迁移。本研究表明，BCR 信号通路和整合素信号通路协同作用，诱导 Pyk2 和 FAK 关键酪氨酸残基的磷酸化，这种修饰可增强 Pyk2 和 FAK 的激酶活性。Rap GTP 酶的激活对于 BCR 诱导的整合素激活以及 BCR 和整合素诱导的肌动蛋白细胞骨架重组至关重要。我们现在证明，Rap 激活对于 BCR 诱导的 Pyk2 磷酸化以及整合素诱导的 Pyk2 和 FAK 磷酸化均必不可少。此外，Rap依赖的Pyk2和FAK磷酸化需要完整的肌动蛋白细胞骨架以及肌动蛋白的动态变化，这表明Rap通过其对肌动蛋白细胞骨架的影响来调节Pyk2和FAK。重要的是，BCR/整合素共刺激或整合素结合诱导的B细胞铺展可被短发夹RNA介导的Pyk2或FAK表达敲低以及PF-431396（一种阻断Pyk2和FAK激酶活性的化学抑制剂）处理所抑制。因此，Pyk2和FAK是Rap GTP酶的下游靶点，在调节B细胞形态中发挥关键作用。[2]

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骨骼的积累和维持主要通过成骨细胞和破骨细胞的协同作用实现。体外累积研究表明，富含脯氨酸的酪氨酸激酶2 (PYK2) 是破骨细胞功能和活性的正向调节因子。然而，我们对PYK2-/-小鼠的研究并未发现PYK2在体内或体外培养的破骨细胞中发挥必需作用的证据。我们发现，PYK2-/-小鼠骨量较高，这是由于骨形成意外增加所致。与体内研究结果一致，小鼠骨髓培养显示，PYK2缺陷增强了骨祖细胞的分化和活性，在人骨髓间充质干细胞中表达PYK2特异性短发夹RNA或显性干扰蛋白也具有类似效果。此外，每日给予小分子PYK2抑制剂可增加卵巢切除大鼠（一种已建立的绝经后骨质疏松症临床前模型）的骨形成并防止骨丢失。总之，我们发现 PYK2 调控不同物种早期骨祖细胞的分化，而 PYK2 抑制剂具有作为骨合成代谢疗法治疗骨质疏松症的潜力。[3]

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PF-431396 是一种高选择性的小分子 PYK2 抑制剂。PYK2-PF-431396 复合物的 X 射线晶体学分析表明，PF-431396 与 PYK2 的 ATP 结合口袋结合，并稳定 PYK2 独特的 DFG-out（非活性）构象，这有助于其对 FAK 的高选择性。它是一种研究 PYK2 生物学功能的关键工具化合物 [1]
- 在 B 细胞中，PF-431396 可抑制 B 细胞受体 (BCR) 诱导的 PYK2 活化以及下游整合素介导的 B 细胞铺展，表明 PYK2 在 BCR 依赖性 B 细胞黏附和活化中发挥着关键作用。这暗示了 PF-431396 在研究 B 细胞相关免疫疾病方面具有潜在的应用价值 [2]
- PF-431396 在体外可促进成骨祖细胞增殖和成骨分化，并增强卵巢切除 (OVX) 诱导的骨质疏松小鼠的骨形成和骨密度。它作为一种骨骼合成代谢剂，为骨质疏松症（一种以骨量减少和骨折风险增加为特征的疾病）提供了一种潜在的治疗策略 [3]

C22H21F3N6O3S

506.5

506.134

C, 52.17; H, 4.18; F, 11.25; N, 16.59; O, 9.48; S, 6.33

717906-29-1

11598628

Beige solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.643

1.36

127.93

3

11

7

35

854

0

S(C([H])([H])[H])(N(C([H])([H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([H])([H])N([H])C1C(C(F)(F)F)=C([H])N=C(N=1)N([H])C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])C([H])([H])C(N2[H])=O)(=O)=O

POJZIZBONPAWIV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H21F3N6O3S/c1-31(35(2,33)34)18-6-4-3-5-13(18)11-26-20-16(22(23,24)25)12-27-21(30-20)28-15-7-8-17-14(9-15)10-19(32)29-17/h3-9,12H,10-11H2,1-2H3,(H,29,32)(H2,26,27,28,30)

N-Methyl-N-[2-[[[2-[(2,3-dihydro-2-oxo-1H-indol-5-yl)amino]-5-(trifluoromethyl)-4-pyrimidinyl]amino]methyl]phenyl]methanesulfonamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。