COX-3

非那西丁在抑制COX-3方面比对乙酰氨基酚更有效。在30μM的底物条件下，非那西丁抑制COX-3的IC50值为102μM，而在类似条件下测试的对乙酰氨基酚为460μM。与对乙酰氨基酚一样，非那西丁优先抑制COX-3[1]。

表2显示了长期吸烟对非那西丁在大鼠体内的药代动力学特征的影响。吸烟组和对照组非那西丁的平均血浆浓度-时间曲线如图1A所示。结果表明，经过长期吸烟预处理后，吸烟组非那西丁的AUC（0-∞）、t1/2和Cmax与对照组相比分别显著降低了32%、64%和27%（P<0.05），非那西汀的CL显著增加了35%（P<0.05）。这表明CYP1A2活性是由长期吸烟引起的。[2]

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动物实验结果表明，黄芩苷（450mg/kg，静脉注射）显著降低了非那西丁的Cmax和CL，增加了C（60min）、t1/2、Vd和AUC（P<0.05）。在11只大鼠中，非那西丁的C（60分钟）、t1/2、CL、AUC的控制百分比与黄芩苷的Cmax之间存在显著相关性（P<0.05）。体外蛋白结合实验表明，黄芩苷（0-2000mg/L）使未结合的非那西丁从14.5%增加到28.3%。综上所述，黄芩苷可以抑制HLMs中CYP1A2的活性，并表现出与基因多态性无关的较大个体间差异。黄芩苷可以改变非那西丁在大鼠体内的药代动力学。[3]

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黄芩苷治疗对非那西丁药代动力学的影响非那西汀的药代动力学：药代动力学研究中获得的非那西坦血药浓度与时间曲线如图3A所示。这清楚地表明，在对照组中，非那西丁的浓度太低，在给药后90分钟无法检测到，而在用黄芩苷治疗的大鼠中，其浓度仍为（0.12±0.02）mg·L-1。如表4所示，黄芩苷（450mg/kg，静脉注射）可显著降低非那西丁的Cmax和CL，并增加C60 min、t1/2、Vd和AUC（P<0.05）。对照组非那西丁的AUC和C60 min分别为（140.2±14.7）mg/L·min和（0.27±0.14）mg/L，而黄芩苷（450 mg/kg）治疗的大鼠分别为（162.8±21.1）mg/L•min和（0.55±0.17）mg/L。联合使用黄芩苷使非那西丁的平均AUC增加了16%，非那西汀的平均C60分钟增加了104%[3]。

药物抑制试验。[1]
Sf9细胞感染高滴度病毒原液（moi=3）并培养48小时。细胞在25°C下与药物预孵育30分钟，然后加入花生四烯酸（100μl，终浓度5或30μM）在37°C下再孵育10分钟。通过放射免疫分析法测定上清液中PGE2的COX活性。检测进行了多次，一式三份。构建抑制曲线，并使用PRISM 3.0测定IC50值。

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非那西丁体外大鼠血浆蛋白结合的测定[3]
体外测定黄芩苷对新鲜大鼠血浆（n=5）中非那西丁蛋白结合的影响。 血浆样本中非那西丁的最终浓度为7 mg/L，黄芩苷的浓度在0至2000 mg·L-1之间变化。将样品在37°C下孵育30分钟，然后放入超滤管中。将样品以4500rpm离心15分钟。滤液中非那西丁的浓度通过上述方法测定。

血浆中药物浓度的测量[2]
使用安捷伦1200 HPLC系统进行色谱分析，该系统配备有四元泵、脱气器、自动进样器、恒温柱室和API 4000三重四极仪器（AB/MDSSciex，Ontario，Canada）。 在30°C下，在150 mm×2.1 mm、3.5µm的Agilent Zorbax SB-C18柱上实现了分离。流动相由0.1%甲酸水溶液和乙腈（45:55，v:v）（Merck KGaA，德国）的混合物组成，流速为0.4 mL/min。典型的注射体积为10µL。 通过峰面积法进行定量。目标离子的测定在SIM模式（非那西丁m/z 180，甲磺丁脲m/z 271，氯唑沙宗m/z 167，咪达唑仑m/z 327，IS m/z 237）和正离子电喷雾电离界面下进行。干燥气体流量设置为6 L/min，温度设置为350°C。将系统的雾化器压力和毛细管电压分别调节至20psi和3500V。非那西丁、甲磺丁脲、氯唑沙宗和咪达唑仑的定量限分别为10、20、15和8 ng/mL。[2]

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测定了个体HLM中CYP1A2的动力学参数和黄芩苷对CYP1A2作用的IC50。此外，还估计了合并HLM中的Ki值。通过探针底物非那西丁形成对乙酰氨基酚来评估CYP1A2活性。孵育混合物含有不同浓度的HLMs（0.3mg/ml）、100mM磷酸盐缓冲液（pH7.4）、非那西丁和黄芩苷以及NADPH（1mM）。混合物在37°C下预孵育5分钟，最佳孵育时间为30分钟。[3]
对于生物转化，在以下范围内检查了八种底物浓度：非那西丁为6.25至800µM。通过非线性回归分析确定每个HLM的Km和Vmax值。为了估算Ki值，在合并的HLM中使用了不同浓度的非那西丁（12.5、25、50、100、200µM）和黄芩苷（0、10、20、40、80µM）（n=9）。根据CYP1A2基因型和28个HLM的Km值，选择9个HLM。从Lineweaver–Burk图中以图形方式估计了抑制机制。Ki值是通过Lineweaver–Burk图与抑制剂浓度的第二个斜率图计算得出的。此外，底物浓度选择接近Km，并测定黄芩苷对每个HLM中CYP1A2的IC50。[3]
通过加入冰冷的乙腈终止酶反应。非那西丁代谢产物对乙酰氨基酚的测定方法如下。将培养管涡旋并离心，然后将80µl澄清上清液注入HPLC系统。流动相由甲醇和0.05 M乙酸铵（20∶80，v/v）组成，流速为1 ml·min-1。紫外检测波长为257nm。

黄芩苷对大鼠体内非那西汀药代动力学的影响[3]
本实验选用Sprague-Dawley大鼠，经尾静脉给药。研究采用随机、两周期交叉设计，间隔4天。11只大鼠随机分为两组，第1组6只，第2组5只。第一阶段，第1组大鼠注射生理盐水（对照组），第2组大鼠注射黄芩苷（450 mg/kg，静脉注射）。随后立即静脉注射非那西汀（5 mg/kg）。分别于给药前及给药后0、5、15、30、60、90和120分钟，通过肝素化毛细管进行眼眶采血。0分钟的血样为静脉注射非那西汀后立即采集。将血液以 4000 rpm 离心 10 分钟分离血浆，并储存于 -30°C 直至分析。经过 4 天的洗脱期后，两组受试者交叉接受另一种药物。

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血浆中非那西汀和黄芩苷浓度的测定[3]
采用高效液相色谱-紫外检测法 (HPLC-UV) 测定血浆中非那西汀的浓度。取 0.1 ml 血浆样品，加入 1 ml 乙醚，涡旋振荡 2 分钟。离心后，在氮气流下将有机相蒸干。将残余物用 100 µl 流动相复溶，取 50 µl 注入高效液相色谱系统。流动相为甲醇和水 (51∶49, v/v)，流速为 1 ml·min−1。紫外检测波长为 247 nm。血浆黄芩苷浓度的测定方法已在文献[3]中报道。建模完成后，将含有非那西汀（20 mg/kg）、甲苯磺丁脲（5 mg/kg）、氯唑沙宗（20 mg/kg）和咪达唑仑（10 mg/kg）的混合溶液（溶于羧甲基纤维素钠溶液）以5 mL/kg的剂量灌胃给各组大鼠。分别于给药前（0 h）以及给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24和48 h经尾静脉采集每只大鼠的血液样本，并立即以13,000 rpm离心10 min分离血浆。每只动物的采血总量不超过2.2 mL。将100 µL血浆样本转移至新的试管中，并于−80 °C冷冻保存直至分析。吸烟组和对照组大鼠（n=4）被处死。迅速取出每只大鼠的肝脏样本，并于−80 °C保存[2]。

吸收、分布和排泄
……非那西汀的口服吸收显著受制剂颗粒大小的影响，因此非那西汀和对乙酰氨基酚的血浆浓度也相应变化较大。
血浆中非那西汀的峰值浓度通常在约1小时出现，而由此衍生的对乙酰氨基酚的峰值浓度则在1-2小时内出现。
口服后吸收迅速……作用持续时间约为4小时。
口服[乙酰基-(14)C]非那西汀的大鼠，16小时尿液中回收的(14)C高达45%，粪便中回收的(14)C高达1%。
有关非那西汀（共9种）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
在体内代谢为对乙酰氨基酚。
对乙酰氨基酚和非那西汀主要由肝微粒体酶代谢。……在正常人体内，75%至80%的服用非那西汀会迅速代谢为对乙酰氨基酚。
……非那西汀至少会转化为十几种其他代谢物，包括通过N-脱乙酰化生成对苯二酚丁胺，以及通过羟基化和非那西汀及对苯二酚丁胺的进一步代谢。一种未知的代谢物，但是一种氧化剂，是导致高铁血红蛋白形成和红细胞溶血的原因……。
非那西汀代谢为对乙酰氨基酚，后者以葡萄糖醛酸苷和硫酸盐结合物的形式排出体外……。
……N-羟基非那西汀已被鉴定为……人体内的代谢物。
有关非那西汀（共15种）的更多代谢/代谢物（完整）数据，请访问HSDB记录页面。
非那西汀已知的人体代谢物包括N-羟基非那西汀和对乙酰氨基酚。
在体内代谢为对乙酰氨基酚。

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生物半衰期
消除半衰期(t1/2)β为37至74分钟。

毒性概述：非那西汀的镇痛作用源于其对脊髓感觉通路的作用。此外，非那西汀对心脏具有抑制作用，表现为负性肌力药物。它是一种解热药，作用于大脑降低体温调节点。它还用于治疗类风湿性关节炎（亚急性型）和肋间神经痛。毒性数据：急性经口毒性（LD50）：866 mg/kg [小鼠]。毒素和毒素靶点数据库 (T3DB) 12.1.6 相互作用：3-羟基-4-碘-2-萘甲酸钠和1-羟基-4-溴萘甲酸钠抑制大鼠肠道对非那西汀的吸收。同时经口给予非那西汀和其中一种后，大鼠血液、脑和肾脏中的非那西汀浓度降低，而肝脏中的浓度升高。在兔体内，非那西汀的血液浓度会因两种药物而降低，但会因1-羟基-2-萘甲酸钠、四氢-1-羟基-2-萘甲酸钠和四氢-3-羟基-2-萘甲酸钠而升高。所有测试的衍生物均能降低大鼠或兔肝片对非那西汀的体外代谢。Niwa H 等；东北药科大学研究年报 18: 1 (1971) 危险物质数据库 (HSDB) 用咖啡因或安替比林处理的大鼠肝脏中，乙酰非那西汀向N-乙酰-对氨基苯酚的转化增加。肺和肠道也能代谢乙酰非那西汀生成该代谢物，而暴露于香烟烟雾会增强这一代谢途径。在对人体受试者进行乙酰苯胺试验剂量后，吸烟者血浆中乙酰苯胺的浓度低于非吸烟者。因此，除了肝脏外，肺和肠道也可能在乙酰苯胺的代谢中发挥重要作用。

[1]. COX-3, a cyclooxygenase-1 variant inhibited by acetaminophen and other analgesic/antipyretic drugs: cloning, structure, and expression. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Oct 15;99(21):13926-31.
[2]. Effects of long-term smoking on the activity and mRNA expression of CYP isozymes in rats. J Thorac Dis. 2015 Oct; 7(10): 1725–1731.
[3]. Inhibition of Baicalin on Metabolism of Phenacetin, a Probe of CYP1A2, in Human Liver Microsomes and in Rats. PLoS One. 2014; 9(2): e89752.
[4]. https://en.wikipedia.org/wiki/Phenacetin

根据加州劳动法，非那西汀可能致癌。
非那西汀是一种无臭的白色细结晶固体，略带苦味。用作镇痛药。
非那西汀属于乙酰胺类化合物，其结构为乙酰胺分子中与氮原子相连的氢原子被4-乙氧基苯基取代。它是一种非麻醉性镇痛药、周围神经系统药物和环氧合酶3抑制剂。它属于乙酰胺类化合物和芳香醚类化合物。它在功能上与N-苯基乙酰胺、4-乙氧基苯胺和对乙酰氨基酚相关。
由于担心肾病（肾脏损伤或疾病），非那西汀于1973年6月从加拿大市场撤出。
非那西汀是一种合成的白色结晶固体，微溶于水和苯，溶于丙酮，极易溶于嘧啶。在研究中，它被用作体外检测CYP1A2抑制潜力的首选标记物。人类摄入非那西汀会导致皮肤因血液缺氧而呈蓝色（紫绀），并伴有头晕和呼吸抑制。它被合理地预期为人类致癌物。 （NCI05）
由于担心肾病（肾脏损伤或疾病），非那西汀于1973年6月从加拿大市场撤出。
非那西汀是一种苯乙酰胺类药物，曾用于镇痛，但由于其会引起肾病和高铁血红蛋白血症，最终被撤出市场。（引自Smith和Reynard，《药理学教科书》，1991年，第431页）
另见：阿司匹林；布他比妥；咖啡因（注释已移至此处）。

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药物适应症
主要用作镇痛药。

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作用机制
本研究旨在检验旧镇痛药非那西汀及其代谢物对苯乙啶（具有高肾毒性）对环氧合酶（COX）-1/COX-2的选择性。对乙酰氨基酚（扑热息痛）是非那西汀的主要代谢产物，肾毒性较低，本研究选择其和吲哚美辛作为参考化合物。胶原刺激的血小板血栓素B2 (TxB2) 生成和佛波醇酯 (PMA) 诱导的中性粒细胞前列腺素E2 (PGE2) 合成分别作为COX-1和COX-2活性的指标。非那西汀抑制TxB2和PGE2生成的能力甚至弱于对乙酰氨基酚，且未观察到对两种COX酶的明显偏好。对苯乙啶在纳摩尔浓度下即可有效抑制这些前列腺素的合成，其抑制作用强于吲哚美辛，并且对COX-2抑制表现出一定的偏好性。浓度稍高（微摩尔级）的对苯乙啶也能降低中性粒细胞中COX-2的表达。我们认为，对苯乙啶对 PGE2 合成的强效抑制作用，以及 COX-2 表达的降低，可能解释了苯乙啶肾中出现的肾乳头坏死。
镇痛药肾病是一种独特的药物性肾脏疾病，其病理特征为肾乳头坏死和慢性间质性肾炎，是过量服用复方解热镇痛药的结果。该病的临床表现主要包括肾乳头坏死、肾绞痛和梗阻性尿路疾病，少数患者会发展为慢性肾功能衰竭。临床表现存在显著的地域差异，这可能与镇痛药组合的不同有关。该病的发病机制部分与肾脏在肾乳头中浓缩药物的能力有关。以下事件序列为该病的进展提供了一种合理的解释。如果同时摄入非那西汀和阿司匹林，会发生以下步骤。非那西汀在肠道和肝脏中经首过代谢转化为对乙酰氨基酚。对乙酰氨基酚随后被肾脏吸收并排出体外。在排泄过程中，由于生理性抗利尿作用，对乙酰氨基酚会在肾乳头中浓缩，其浓度可达其他组织细胞内浓度的五倍。对乙酰氨基酚经前列腺素H合酶氧化代谢为活性醌亚胺，该醌亚胺与谷胱甘肽结合。如果仅摄入对乙酰氨基酚，肾乳头中产生的谷胱甘肽足以解毒该活性中间体。如果同时摄入对乙酰氨基酚和阿司匹林，阿司匹林会转化为水杨酸，水杨酸会在肾皮质和肾乳头中高度浓缩。水杨酸是谷胱甘肽的强效消耗剂。其机制尚未完全阐明；然而，戊糖途径对NADPH生成的影响可能是一种解释。当细胞内谷胱甘肽耗竭时，对乙酰氨基酚的活性代谢产物会产生脂质过氧化物并导致组织蛋白芳基化，最终导致乳头坏死。
镇痛作用机制尚未完全明确。对乙酰氨基酚可能主要通过抑制中枢神经系统（CNS）中前列腺素的合成发挥作用，其次通过外周作用阻断疼痛冲动的产生。外周作用也可能是由于抑制其他对机械或化学刺激敏感的疼痛感受器的合成或作用所致。/对乙酰氨基酚/
对乙酰氨基酚可能通过作用于下丘脑体温调节中枢，引起外周血管扩张，从而增加皮肤血流量、促进出汗和散热，进而产生解热作用。其主要作用机制可能涉及抑制下丘脑中前列腺素的合成。/对乙酰氨基酚/

C10H13NO2

179.22

179.094

C, 67.02; H, 7.31; N, 7.82; O, 17.85

62-44-2

Phenacetin;62-44-2

4754

White to off-white solid powder

1.0±0.1 g/cm3

323.6±44.0 °C at 760 mmHg

133-136 °C(lit.)

149.5±28.4 °C

0.0±0.7 mmHg at 25°C

1.506

2.01

38.33

1

2

3

13

162

0

CPJSUEIXXCENMM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C10H13NO2/c1-3-13-10-6-4-9(5-7-10)11-8(2)12/h4-7H,3H2,1-2H3,(H,11,12)

N-(4-Ethoxyphenyl)acetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。