PIBRENTASVIR   中文名称: 哌仑他韦

GT5a (EC50 = 1.4 pM); GT1a H77 (EC50 = 1.8 pM); GT2b (EC50 = 1.9 pM); GT4a (EC50 = 1.9 pM); GT3a (EC50 = 2.1 pM)
Pibrentasvir is a potent pan-genotypic next-generation HCV NS5A inhibitor that retains activity against common amino acid substitutions of HCV genotypes 1–6, which are known to confer resistance to NS5A inhibitors that are currently approved.[1]

Pibrentasvir 是一种有效的泛基因型下一代 HCV NS5A 抑制剂，保留了针对 HCV 基因型 1-6 常见氨基酸取代的活性，已知这些氨基酸取代会对目前批准的 NS5A 抑制剂产生耐药性。 [1]

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匹布瑞韦对包含基因型1至6 NS5A的稳定HCV亚基因组复制子表现出强效、全基因型的抗病毒活性。在0%人血浆中，50%有效浓度值在1.4至5.0 pM之间：针对基因型1a-H77为1.8 pM，1b-Con1为4.3 pM，2a-JFH-1为5.0 pM，针对包含基因型2a、2b、3a、4a、5a和6a NS5A的嵌合复制子，EC50在1.4至2.8 pM之间。
由于血浆蛋白结合，在40%人血浆存在下，匹布瑞韦的抗病毒活性减弱了35至47倍，EC50分别增加到64 pM和200 pM。
匹布瑞韦对一组包含来自HCV感染患者样本的NS5A基因的复制子显示出相似的活性，这些样本涵盖基因型1a、1b、2a、2b、3a、4a、5a和6a/e/p，中位EC50在0.50至2.7 pM之间。这些样本包括在与其他NS5A抑制剂耐药相关位点存在基线多态性的样本。
匹布瑞韦对一系列已知可导致对其他NS5A抑制剂耐药的单一位点NS5A氨基酸替换保持了完全活性，这些替换存在于基因型1至6中，EC50倍数变化通常≤7。例如，针对基因型1a的单替换：M28T， Y93H， Y93N。针对基因型3a的Y93H替换，其EC50仅增加了2.3倍。
它还保留了对包含NS3/4A蛋白酶抑制剂和NS5B聚合酶抑制剂关键耐药相关替换的复制子的活性，EC50倍数变化≤1.7，表明无交叉耐药。
匹布瑞韦对人类免疫缺陷病毒1型或乙型肝炎病毒没有可测量的抗病毒活性。
在基因型1b复制子细胞中进行的棋盘法联合研究及MacSynergy II分析表明，当匹布瑞韦与干扰素-α、利巴韦林或HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂格卡瑞韦合用时，产生轻微至中度的协同抗病毒活性。未观察到拮抗作用。 [1]

研究提到，匹布瑞韦强效的体外活性转化为在为期3天的单药治疗临床试验中强大的抗病毒活性。在感染基因型1、未经治疗的成人中，每日40至400 mg的剂量在3天结束时使HCV血浆RNA从基线平均最大下降≥4.1 log₁₀ IU/ml。选择用于3期研究的120 mg剂量实现了4.5 log₁₀ IU/ml的下降。在此单药治疗研究中，40名患者中仅有3名出现了NS5A耐药相关替换。 [1]

南方研究所开展针对 HBV 和 HIV-1 的抗病毒活性测定。 Pibrentasvir 在 HIV-1 抗病毒细胞保护试验中使用 IIIB 病毒株和 CEM-SS 细胞进行评估。简而言之，将病毒和细胞混合，并在 pibrentasvir 或齐多夫定（AZT；阳性对照）存在下孵育六天。病毒滴度是预先确定的，因此感染病毒的对照孔显示出 85% 至 95% 的细胞活力因病毒复制而丧失。因此，当化合物阻碍病毒复制时，就会观察到抗病毒作用或细胞保护作用。感染六天后，向每个孔中添加二十至二十五微升的MTS试剂，然后将微量滴定板孵育四至六小时，以测量细胞的活力。使用 Molecular Devices Vmax 或 SpectraMax Plus 读板器在 490/650 nm 处以分光光度法读取板。

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稳定HCV复制子细胞中的抗病毒活性：培养稳定的HCV亚基因组复制子细胞系。细胞在含有5%胎牛血清、有或无40%人血浆的培养基中与匹布瑞韦的系列稀释液孵育3天。通过使用发光计测量细胞裂解液中的荧光素酶报告基因活性来确定HCV复制抑制。使用非线性回归曲线拟合计算EC50。
细胞毒性实验：在Huh-7细胞、HepG2细胞和MT4细胞中评估细胞毒性。将细胞接种于96孔板中并与匹布瑞韦孵育。孵育一段时间后，使用MTT比色法测量细胞活力。计算50%细胞毒性浓度。匹布瑞韦在Huh-7细胞中的CC50 >32,000,000 pM，在HepG2和MT4细胞中>10,000,000 pM，表明治疗指数很高。
抗HIV-1和HBV活性实验：对于HIV-1，使用抗病毒细胞保护实验。CEM-SS细胞在匹布瑞韦存在下感染HIV-1，孵育6天。使用MTS试剂评估细胞活力，保护作用表明抗病毒效应。对于HBV，用匹布瑞韦处理HepG2 2.2.15细胞6天。蛋白酶处理后，通过实时定量PCR对培养上清液中的细胞外HBV DNA进行定量。根据HBV DNA水平的降低计算EC50。
耐药选择实验：将含有特定基因型NS5A的HCV稳定复制子细胞接种，并在G418和浓度为其EC50 10倍或100倍的匹布瑞韦存在下培养。每3-4天更换一次培养基，持续约3周。挑取存活克隆并扩大培养，通过RT-PCR扩增其NS5A编码区并进行测序，以鉴定耐药相关的氨基酸替换。计算克隆存活率。
突变体敏感性瞬时复制子实验：构建在NS5A、NS3或NS5B中带有特定氨基酸替换的工程化HCV复制子。将质粒线性化，转录成RNA，并转染到Huh-7细胞中。通过荧光素酶实验测量匹布瑞韦对这些HCV复制子复制的抑制。计算复制效率，表示为野生型复制的百分比。
联合研究：在基因型1b-Con1复制子细胞中，使用棋盘法将匹布瑞韦与另一种HCV抑制剂以系列2倍稀释的方式进行组合。通过荧光素酶报告基因实验确定HCV复制。使用MacSynergy II程序分析数据，计算协同/拮抗体积并确定相互作用类型。 [1]

吸收、分布和排泄
在健康受试者中，达到血浆峰浓度的时间（Tmax）约为5小时。非肝硬化HCV感染者的平均血浆峰浓度（Cmax）为110ng/mL。与空腹状态相比，进食可使哌仑他韦的吸收增加40-53%。
该药物的主要排泄途径是胆汁-粪便途径，其中96.6%的给药药物经粪便排泄，0%的药物经尿液排泄。

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代谢/代谢物
哌仑他韦不发生代谢。

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生物半衰期
消除半衰期（t1/2）约为13小时。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概要
尚未对正在接受丙型肝炎治疗的哺乳期妇女进行哌仑他韦的研究。由于其与母体血浆蛋白的结合率超过99.9%，因此母乳中的含量可能非常低。
丙型肝炎不会通过母乳传播，并且母乳已被证明可以灭活丙型肝炎病毒（HCV）。然而，美国疾病控制与预防中心建议，如果HCV感染的母亲乳头皲裂或出血，则应考虑停止母乳喂养。目前尚不清楚此警告是否适用于正在接受丙型肝炎治疗的母亲。
HCV感染母亲所生的婴儿应接受HCV感染检测；由于母体抗体在婴儿出生后的前18个月以及婴儿产生免疫反应之前均存在，因此建议进行核酸检测。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
哌仑他韦与人血浆蛋白的结合率>99.9%。血血浆比约为0.62。

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该研究提供了体外细胞毒性数据（CC50），如细胞测定部分所述，表明其细胞毒性较低。[1]

[1]. In Vitro Antiviral Activity and Resistance Profile of the Next-Generation Hepatitis C Virus NS5A Inhibitor Pibrentasvir. Antimicrob Agents Chemother. 2017 Apr 24;61(5). pii: e02558-16.

哌仑他韦是一种直接作用的抗病毒药物，也是丙型肝炎病毒 (HCV) NS5A 抑制剂，其靶向病毒 RNA 复制和病毒颗粒组装。哌仑他韦与 [DB13879] 联合使用，可有效治疗其他 NS5A 抑制剂治疗失败的患者。在细胞培养中，HCV 基因型 1a、2a 或 3a 复制子中已知与 NS5A 抑制剂耐药相关的氨基酸替换导致对哌仑他韦的敏感性降低和耐药性。这些耐药相关的氨基酸替换包括：基因型 1a 复制子中的 Q30D/缺失、Y93D/H/N 或 H58D + Y93H；基因型 2a 复制子中的 F28S + M31I 或 P29S + K30G；以及基因型 3a 复制子中的 Y93H。降低对哌仑他韦敏感性的NS5A氨基酸替换包括基因1a型复制子中的M28G或Q30D，以及基因1b型复制子中的P32缺失。哌仑他韦与[DB13879]以口服复方制剂的形式上市，商品名为Mavyret。该固定剂量复方制剂于2017年8月获得FDA批准，用于治疗无肝硬化（肝病）或轻度肝硬化的慢性丙型肝炎病毒（HCV）基因1-6型成人患者，包括中重度肾病患者和正在接受透析的患者。Mavyret也适用于既往接受过含NS5A抑制剂或NS3/4A蛋白酶抑制剂（但未同时接受过两者）治疗的HCV基因1型感染患者。丙型肝炎病毒感染常导致肝功能下降，进而发展为肝衰竭，严重影响患者的生活质量。联合治疗的最终目标是实现持续病毒学应答（SVR），治愈患者。临床试验表明，该联合疗法在1a、2a、3a、4、5和6型基因型中均实现了≥93%的SVR12率，即治疗结束后12周或更长时间内检测不到丙型肝炎病毒。
哌仑他韦是一种丙型肝炎病毒NS5A抑制剂。哌仑他韦的作用机制是作为P-糖蛋白抑制剂、乳腺癌耐药蛋白抑制剂、有机阴离子转运多肽1B1抑制剂、有机阴离子转运多肽1B3抑制剂、细胞色素P450 3A抑制剂、细胞色素P450 1A2抑制剂和UGT1A1抑制剂。

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药物适应症
适用于治疗无肝硬化或代偿性肝硬化（Child-Pugh A级）的慢性丙型肝炎病毒（HCV）基因型1、2、3、4、5或6型感染的成年患者。 MAVYRET 还适用于治疗既往接受过含 HCV NS5A 抑制剂或 NS3/4A 蛋白酶抑制剂 (PI) 的方案治疗，但未同时接受过两者治疗的 HCV 基因 1 型感染成人患者。
FDA 标签

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作用机制
NS5A 是一种磷蛋白，在感染性病毒蛋白的复制、组装和成熟过程中发挥着至关重要的作用。NS5A 的基础磷酸化形式由 C 端丝氨酸簇维持，是确保其与病毒衣壳蛋白（即核心蛋白）相互作用的关键。哌仑他韦通过阻断这种相互作用，抑制蛋白质的组装和成熟 HCV 颗粒的产生。NS5A 还与病毒和细胞蛋白相互作用形成 HCV 复制酶复合物，并支持 HCV RNA 的复制。

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药效学
哌仑他韦是一种泛基因型药物。根据HCV复制子检测，哌仑他韦对亚型1a、1b、2a、2b、3a、4a、4d、5a和6a的实验室和临床分离株的EC50值范围为0.08-4.6 nM，或对亚型1a、1b、2a、2b、3a、4a、4b、4d、5a、6a、6e和6p的实验室和临床分离株的EC50值范围为0.5-4.3 pM。它对HCV基因型1至6中常见的耐药性突变有效，这些突变会导致对其他NS5A抑制剂的耐药性和治疗反应降低，包括NS5A的第24、28、30、31、58、92或93位氨基酸突变。在一项QT间期研究中，哌仑他韦并未显示会延长QTc间期。

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哌仑他韦是一种新型的下一代HCV NS5A抑制剂，其化学名称已在“材料与方法”部分提供。
其作用机制是抑制HCV NS5A蛋白，该蛋白在病毒RNA复制和病毒颗粒组装中发挥着多种关键作用。
该研究强调了哌仑他韦具有很高的耐药遗传屏障，这体现在体外低克隆选择频率和短期单药治疗临床试验中低耐药率。
在临床研究中，哌仑他韦已与格卡瑞韦（一种HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂）联合用药。该联合疗法在初治的非肝硬化HCV基因1-6型感染患者以及既往直接抗病毒治疗失败的基因1型感染患者中均取得了较高的持续病毒学应答率。[1]

C57H65F5N10O8

1113.2

1112.49

C, 61.50; H, 5.89; F, 8.53; N, 12.58; O, 11.50

1353900-92-1

1821461-48-6 (butanamine hydrate);1353900-92-1 (free);

58031952

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.614

8.71

199.58

4

17

17

80

2000

8

FC1C=C2C(=CC=1[C@H]1CCC(C3=C(C=C4C(=C3)NC([C@@H]3CCCN3C([C@H]([C@@H](C)OC)NC(=O)OC)=O)=N4)F)N1C1C=C(C(=C(C=1)F)N1CCC(C3C=CC(=CC=3)F)CC1)F)NC([C@@H]1CCCN1C([C@H]([C@@H](C)OC)NC(=O)OC)=O)=N2

VJYSBPDEJWLKKJ-NLIMODCCSA-N

InChI=1S/C57H65F5N10O8/c1-29(77-3)49(67-56(75)79-5)54(73)70-19-7-9-47(70)52-63-41-25-35(37(59)27-43(41)65-52)45-15-16-46(72(45)34-23-39(61)51(40(62)24-34)69-21-17-32(18-22-69)31-11-13-33(58)14-12-31)36-26-42-44(28-38(36)60)66-53(64-42)48-10-8-20-71(48)55(74)50(30(2)78-4)68-57(76)80-6/h11-14,23-30,32,45-50H,7-10,15-22H2,1-6H3,(H,63,65)(H,64,66)(H,67,75)(H,68,76)/t29-,30-,45-,46-,47+,48+,49+,50+/m1/s1

methyl N-[(2S,3R)-1-[(2S)-2-[6-[(2R,5R)-1-[3,5-difluoro-4-[4-(4-fluorophenyl)piperidin-1-yl]phenyl]-5-[6-fluoro-2-[(2S)-1-[(2S,3R)-3-methoxy-2-(methoxycarbonylamino)butanoyl]pyrrolidin-2-yl]-3H-benzimidazol-5-yl]pyrrolidin-2-yl]-5-fluoro-1H-benzimidazol-2-yl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-1-oxobutan-2-yl]carbamate

ABT-530; ABT 530; ABT530; A-1325912; A1325912; A 1325912; A 1325912.0; A1325912.0; A-1325912.0; Pibrentasvir

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。