| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
BRaf(V600E)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在显示超过100倍EPII的化合物中，一个分子（PLX7683）含有n -乙基甲基磺胺片段代替vemurafenib的丙基磺胺尾部。[１]
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| 酶活实验 |
生化分析和kinome选择性分析。[1]
体外RAF激酶活性是通过测量生物素化底物肽的磷酸化来确定的，如前所述25。PLX7904也在浓度为1 μM的287个激酶组中进行了测试。对抑制50%以上的激酶进行IC50测定。287个激酶代表了kinome系统发育树的所有主要分支。287种激酶的抑制筛选是根据合同在CRO公司的激酶热点服务中作为补充面板进行的。 Phospho-ERK alphasgreen试验。[1] 为了确定化合物处理对ERK1/2磷酸化的影响，将细胞置于96孔板中，在裂解前37℃用8点化合物滴定1小时。为了检测pERK，将细胞裂解液与链霉亲和素包被的alphasgreen供体珠、抗小鼠IgG alphasgreen受体珠、生物素化的抗ERK1/2兔抗体和仅在Thr202和Tyr204磷酸化时才能识别ERK1/2的小鼠抗体一起孵育。生物素化的ERK1/2抗体与链霉亲和素包被的alphasgreen供体微球和ERK1/2结合（无论其磷酸化状态如何），磷酸化的ERK1/2抗体与受体微球和Thr202/Tyr204磷酸化的ERK1/2结合。ERK1/2 Thr202/Tyr204磷酸化的增加使供体和受体alphasgreen小珠接近，产生一个可以在EnVision读取器上量化的信号。与DMSO对照相比，抑制ERK磷酸化导致信号丢失。 |
| 细胞实验 |
对于 MTT 测定，将 2×103 个细胞一式三份接种到 96 孔常规培养基（其中含有用于 PRT 系的 PLX4720）中。第二天用 PBS 洗涤细胞两次后，用指定的 RAF 抑制剂更换培养基。 48小时后更换培养基，再过48小时后，向孔中加入10μL 5mg/mL MTT试剂并孵育3小时。然后，用 0.1 M 甘氨酸（pH 10.5）在 DMSO 中的 1:10 稀释液过夜溶解甲臜晶体。然后，使用 Multiskan® Spectrum 分光光度计，在 450 nM 下对孔进行评估。显示的结果是三个独立实验的综合结果，并已标准化为 DMSO 条件。显示的误差线准确表示平均值的标准误差。
安克雷奇独立生长试验。[1] 在六孔板的每孔中镀25,000个B9细胞，底层为1%，顶层为0.4%的低熔点琼脂，含有含有10% FBS的RPMI1640培养基。对于RAF抑制剂的研究，在软琼脂中生长的B9细胞用vemurafenib、PLX4720或PLX7904（指定浓度）或0.2%终浓度的DMSO处理3周。在EGFR配体研究中，在软琼脂中生长的B9细胞分别用AREG、TGF-α或HB-EGF按指定浓度处理3周。对于vemurafinib和erlotinib联合研究，在软琼脂中生长的B9细胞用vemurafenib、erlotinib或两种化合物的组合（指定浓度）或DMSO处理3周。使用AxioVision Rel 4.8软件对≥100 μm的锚定无关菌落进行评分。[１] 微阵列基因表达分析。[1] 将B9细胞分别置于1µM vemurafenib、1µM PLX7904或0.2% DMSO对照中孵育17小时。收获细胞，分离总RNA，按照制造商的说明使用Affymetrix Mouse420_2芯片检测基因表达。Vemurafenib应答基因的鉴定要求处理样品与对照样品的比值大于1.9（上调）或小于0.54（下调）。[１] |
| 动物实验 |
在37℃下培养COLO205肿瘤细胞时，向含有10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素/链霉素和1%牛胰岛素的DMEM培养基中添加牛胰岛素。将COLO205肿瘤细胞（5×10⁶）悬浮于0.1 mL PBS与Matrigel（50:50）的混合液中，皮下注射到6-8周龄、体重约18-22 g的雌性Balb/C裸鼠右侧腹部，以检测肿瘤的生长情况。随机分配8只小鼠到每个处理组，使各组小鼠的平均体重和肿瘤大小达到平衡，此时平均肿瘤体积约为100 mm³。B9细胞的培养使用含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基。细胞经胰蛋白酶消化后，用20 mL RPMI培养基洗涤三次，然后重悬、计数，并调整体积至最终浓度为5×10⁷个细胞/mL，最后进行离心。将5×10⁶个细胞皮下注射到6至7周龄的雌性裸鼠Balb/c体内，建立B9异种移植瘤模型。当平均肿瘤体积达到50–70 mm³时，开始进行化合物给药。为了保持平均肿瘤体积和体重之间的平衡，将动物平均分配到各个治疗组（n=10）。动物分别接受赋形剂、维莫非尼 50 mg/kg 或 PLX7904 50 mg/kg，每日两次，持续 1 至 14 天；每日一次，持续 15 至 28 天。在第 3 周和第 4 周，每只小鼠的皮肤上涂抹 2 g 溶于 200 μL 丙酮的 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA)。COLO205 肿瘤细胞在添加了牛胰岛素的 DMEM 培养基（含 10% FBS、1% 青霉素/链霉素）中，于 37 °C 下培养。将6-8周龄、体重约18-22克的雌性Balb/C裸鼠，在右侧腹部皮下接种COLO205肿瘤细胞（5 × 10⁶个），接种物为0.1 ml PBS与Matrigel（50:50）的混合液，用于诱导肿瘤生长。当平均肿瘤体积达到约100 mm³时开始治疗，每组随机选取8只小鼠，以平衡各组小鼠的平均体重和肿瘤大小。B9细胞在含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中扩增。经胰蛋白酶消化后，用20 ml RPMI培养基洗涤细胞三次，最后一次离心后，将细胞重悬、计数，并按体积调整至最终浓度为5 × 10⁷个细胞/ml。将 5 × 10⁶ 个 B9 细胞皮下注射到 6 至 7 周龄的雌性裸鼠 Balb/c 体内，建立 B9 异种移植瘤模型。当肿瘤平均体积达到 50–70 mm³ 时开始给药。将动物平均分配到各治疗组（n = 10），以平衡平均肿瘤体积和体重。在第 1–14 天，每天两次口服给药；在第 15–28 天，每天一次口服给药，分别给予赋形剂、维莫非尼 50 mg/kg 或 PLX7904 50 mg/kg。在第 3 周和第 4 周，每周两次在所有小鼠皮肤上涂抹 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA)，剂量为 2 µg，溶于 200 µl 丙酮中。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
BRAF的致癌激活通过持续促进RAS非依赖性的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路信号传导来驱动肿瘤生长。因此，RAF抑制剂显著改善了转移性黑色素瘤的个体化治疗。然而，这些靶向药物也揭示了一个意想不到的后果：刺激某些癌症的生长。结构多样的ATP竞争性RAF抑制剂既可以抑制MAPK通路，也可以矛盾地激活该通路，这取决于激活是由BRAF突变还是由上游事件（例如RAS突变或受体酪氨酸激酶激活）引起的。在此，我们发现了新一代RAF抑制剂（称为“悖论打破者”），它们能够抑制BRAF突变细胞，而不会激活上游激活的细胞中的MAPK通路。在表达与接受 RAF 抑制剂治疗的鳞状细胞癌患者中常见的 HRAS 突变相同的细胞中，第一代 RAF 抑制剂维莫非尼在体外和体内均能刺激细胞生长，并诱导 MAPK 通路反应基因的表达；相比之下，悖论打破者 PLX7904 和 PLX8394 则没有这种作用。悖论打破者还能克服几种已知的对第一代 RAF 抑制剂的耐药机制。将 MAPK 通路抑制与悖论激活分离，可能比第一代 RAF 抑制剂具有更高的安全性和更持久的疗效，这一概念目前正在使用 PLX8394 进行人体临床试验评估。[1]
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| 分子式 |
C23H19CLF2N4O3S
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|---|---|
| 分子量 |
504.940
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| 精确质量 |
504.08345
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| 元素分析 |
C, 54.71; H, 3.79; Cl, 7.02; F, 7.53; N, 11.10; O, 9.51; S, 6.35
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| CAS号 |
1652573-86-8
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| SMILES |
O=S(NC1=CC(F)=C(C(C2=CNC3=NC=C(C4=CC=C(Cl)C=C4)C=C32)=O)C(F)=C1)(N(CC)C)=O
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| InChi Key |
LLAFAUCUKNMECC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H19ClF2N4O3S/c1-3-30(2)34(32,33)29-16-9-19(25)21(20(26)10-16)22(31)18-12-28-23-17(18)8-14(11-27-23)13-4-6-15(24)7-5-13/h4-12,29H,3H2,1-2H3,(H,27,28)
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| 化学名 |
Sulfamide, N'-[4-[[5-(4-chlorophenyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl]carbonyl]-3,5-difluorophenyl]-N-ethyl-N-methyl-
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| 别名 |
PLX 7683; PLX-7683; PLX7683
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9804 mL | 9.9022 mL | 19.8043 mL | |
| 5 mM | 0.3961 mL | 1.9804 mL | 3.9609 mL | |
| 10 mM | 0.1980 mL | 0.9902 mL | 1.9804 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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