Sodium Channels (Naᵥ1.3, Naᵥ1.7, Naᵥ1.8): Ralfinamide blocks Na⁺ currents in depolarized, hyperexcitable rat primary afferent neurons. Affinity for inactivated channels: Ki = 5-10 μM. [1]
Calcium Channels (Caᵥ2.2): Ralfinamide inhibits Ca⁺⁺ currents in DRG neurons, including Caᵥ2.2, with similar potency to Na⁺ channel blockade (Ki = 10 μM, unpublished data cited). [1]
NMDA Receptors (polyamine binding site): Ralfinamide antagonizes NMDA receptors, inhibiting NMDA-evoked currents with IC50 = 8 μM. [1]

P物质释放抑制：拉非尼酰胺在体外可抑制脊髓突触体释放P物质。[1]
神经保护：拉非尼酰胺可保护培养的皮层神经元免受NMDA诱导的兴奋性毒性损伤。[1]

术前使用拉非尼酰胺（80 mg/kg；口服；每日两次；持续7天）可抑制神经性疼痛[1]。

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自发性神经性疼痛（自残模型）：在后爪去神经支配（坐骨神经和隐神经切断）的大鼠中，长期口服拉非尼酰胺可显著抑制自残行为（自残去神经支配的爪子），这是一种自发性神经性疼痛模型。[1]
预防性镇痛作用：术前给予拉非尼酰胺（80 mg/kg，神经切断前每日两次，持续7天）可显著延迟自残行为的发生（P = 0.009），并在药物清除期（第43-63天）抑制自残评分（P = 0.01），表明其具有持久镇痛作用。 [1]
术后镇痛效果：术后给予拉非尼酰胺（30 或 60 mg/kg，每日两次，神经切断后持续 42 天）可显著降低治疗期间的自残评分（AUC d0-42：30 mg/kg 组 P = 0.02，60 mg/kg 组 P = 0.01），且起效较慢（60 mg/kg 组 P = 0.006）。较高剂量（60 mg/kg）还可显著降低第 42 天高自残评分的发生率（P = 0.02）。 [1]
术前术后联合治疗效果：联合治疗（术前 80 mg/kg + 术后 30 或 60 mg/kg）显著降低了治疗期间的自残评分（30 mg/kg 组 P = 0.008，60 mg/kg 组 P = 0.01），并降低了第 42 天的高自残发生率（30 mg/kg 组 P = 0.007，60 mg/kg 组 P = 0.001）。然而，单药治疗所观察到的起效延迟在联合治疗组中消失了。 [1]
持久镇痛：所有拉非尼酰胺治疗组（仅术前、仅术后、联合用药）在治疗停止后（第43-63天）均维持了显著的自残评分抑制，P值范围为0.001至0.02，并在第63天显著降低了高位自残的发生率（P = 0.007至0.04）。[1]
最佳方案：术前和术后联合用药，并采用较高的术后剂量（R/R2：术前80 mg/kg + 术后60 mg/kg），可获得最佳的总体镇痛效果，在治疗期间镇痛评分受到抑制，在第42天高位自残的发生率最低（P = 0.001），并在停药后仍保持镇痛效果。 [1]
无镇静作用：在所用剂量（30-80 mg/kg，每日两次）下，拉芬酰胺未产生镇静作用。大鼠行为正常，梳理毛发，体重增长速度也正常。较高剂量（80 mg/kg）不到影响大鼠在转棒试验中运动能力的剂量（TD50 = 470 mg/kg，口服）的13%。在小鼠中，口服剂量高达60 mg/kg时，与溶媒组相比，在旷场试验中，小鼠的活动能力或刻板行为活性均无显著差异。[1]

为了评估拉芬酰胺的神经保护作用，研究人员在培养的皮层神经元中研究了NMDA诱发的电流。该药物以8 µM的IC50值抑制了这些电流，并保护神经元免受NMDA诱导的兴奋性毒性[2]。研究人员在大鼠初级传入神经元中研究了Na⁺电流。拉芬酰胺在10-20 µM的浓度下阻断了去极化、高兴奋性神经元中的这些电流。测定其对失活通道的亲和力为Ki = 5-10 µM[2]。研究人员在背根神经节神经元中研究了Ca⁺电流，包括通过CaV2.2通道的电流。拉芬酰胺以约10 µM的Ki值抑制了这些电流[2]。研究人员使用脊髓突触体研究了P物质的释放。拉非尼酰胺在体外抑制了这种释放[2]。

动物/疾病模型： 81只成年雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠（260-460克）[1]
剂量： 术前7天80毫克/千克，术后30毫克/千克、60毫克/千克，每日两次；直至术后第42天。
实验结果： 神经性疼痛得到抑制。

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动物：** 成年雄性Sprague-Dawley大鼠（260-460克，Harlan，加拿大），单独饲养以防止社交互动影响自残行为。饲料中不含酪蛋白（已知酪蛋白会影响自残行为）。光照/黑暗周期：7:00-19:00开灯。[1]
* **手术（神经瘤模型）：** 大鼠使用异氟烷进行深度麻醉。在无菌条件下，单侧暴露坐骨神经，在三叉分支近端用5-0丝线紧密结扎，并在结扎线远端1 mm处切断。切除约3 mm的胫神经、腓肠神经和腓总神经分支以防止再生。随后暴露膝关节内侧的隐神经，将其切断，并切除2 mm的神经节段以防止再生。伤口用4-0丝线和Michel夹分层缝合。术后给予抗生素粉剂和结晶青霉素（5000 U，肌注）。[1]
* **给药方案：** 拉非尼酰胺或赋形剂（蒸馏水，1 mL）通过灌胃法每日两次（bid）给药，分别在9:00-11:00和17:00-19:00之间。术前治疗：术前7天，剂量为80 mg/kg。术后治疗：术后42天，剂量为30或60 mg/kg。分组：NV/V（术前无治疗/术前给予载体，术后给予载体），R/V（术前给予80 mg/kg，术后给予载体），V/R1（术前给予载体，术后给予30 mg/kg），V/R2（术前给予载体，术后给予60 mg/kg），R/R1（术前给予80 mg/kg，术后给予30 mg/kg），R/R2（术前给予80 mg/kg，术后给予60 mg/kg）。[1]
* **行为学测试（自残行为）：** 从手术当天至术后第63天，由一位不知晓分组情况的实验人员每日观察大鼠。自残行为采用 11 分制评分：至少移除两个趾甲计 1 分，每半个趾甲受伤加 1 分（最高 11 分 = 五个趾甲全部受伤）。评分达到 11 分的大鼠采用二氧化碳吸入法安乐死，并保留其评分用于分析。终点参数：自残行为发生日（AOD，至少两个趾甲首次出现损伤迹象）、治疗期（d0-42）和洗脱期（d43-63）评分曲线下面积（AUC），以及 d42 和 d63 时高自残行为（评分 9-11 分）的发生率。[1] * **去神经支配验证：** d42，用带齿镊子捏取双爪足底/足背皮肤以测试感觉状态。去神经支配爪无反应证实完全去神经支配。安乐死后，暴露神经并在立体显微镜（25倍）下检查，以确认切断端。[1]
* **数据分析：** AOD 和 AUC 的组均值采用 ANOVA + Dunnett 事后检验或 t 检验（双尾）进行比较。高自残发生率采用 Fisher 精确检验进行比较。使用错误发现率控制 I 类错误（q < 0.05）。P ≤ 0.05 被认为具有统计学意义。[1]

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动物：成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠（260-460 g，Harlan，加拿大），单独饲养以防止社交互动影响自残行为。饲料中不含酪蛋白（已知酪蛋白会影响自残行为）。光照/黑暗周期：7:00-19:00 开灯。[1]
手术（神经瘤模型）：大鼠使用异氟烷深度麻醉。在无菌条件下，单侧暴露坐骨神经，在三叉分支近端用5-0丝线紧密结扎，并在结扎线远端1 mm处切断。切除约3 mm的胫神经、腓肠神经和腓总神经分支以防止再生。随后暴露膝关节内侧的隐神经，将其切断，并切除2 mm的神经节段以防止再生。伤口用4-0丝线和Michel夹分层缝合。术后给予抗生素粉剂和结晶青霉素（5000 U，肌注）。[1]
给药：拉非尼酰胺或赋形剂（蒸馏水，1 mL）每日两次（bid）灌胃给药，分别在9:00-11:00和17:00-19:00之间。术前治疗：术前7天，剂量为80 mg/kg。术后治疗：术后42天，剂量为30或60 mg/kg。分组：NV/V（术前未治疗/术前给予载体，术后也给予载体），R/V（术前给予80 mg/kg，术后也给予载体），V/R1（术前给予载体，术后给予30 mg/kg），V/R2（术前给予载体，术后给予60 mg/kg），R/R1（术前给予80 mg/kg，术后给予30 mg/kg），R/R2（术前给予80 mg/kg，术后给予60 mg/kg）。[1]
行为学测试（自残行为）：从手术当天到术后第63天，由一位不知晓分组情况的实验人员每天观察大鼠。自残行为采用11分制评分：至少移除两个趾甲计1分，每损伤半个趾甲再加1分（最高11分=五个趾甲全部损伤）。评分达到 11 分的大鼠采用二氧化碳吸入法安乐死，并保留其评分用于分析。终点参数：自残发生日（AOD，至少两个指甲出现损伤的首次迹象）、治疗期（d0-42）和洗脱期（d43-63）评分的曲线下面积（AUC），以及 d42 和 d63 时高自残率（评分 9-11 分）的发生率。[1]
去神经支配验证：d42，用带齿镊子捏取双爪足底/足背皮肤以测试感觉状态。去神经支配爪无反应证实完全去神经支配。安乐死后，暴露神经并在立体显微镜（25 倍）下检查以确认切断端。[1]
数据分析：AOD 和 AUC 的组均值采用 ANOVA + Dunnett 事后检验或 t 检验（双尾）进行比较。与 Fisher 精确检验相比，高自截发生率。采用错误发现率控制 I 类错误（q < 0.05）。P ≤ 0.05 被认为具有统计学意义。[1]

人体药代动力学：在健康男性志愿者（每剂量组 n=6）中，单次口服 40、80、160 和 320 mg 拉非酰胺后，血浆浓度呈良好的线性关系。Cmax 和 AUC 随剂量呈比例增加（图 2A、B）。分别于基线、给药后 20、40 分钟、1、2、4、6、8、12、16、24、36 和 48 小时采集血样。采用经验证的 LC-MS/MS 方法分析血浆（定量限 20 ng/mL）。[1]
大鼠药代动力学：在雄性 SD 大鼠（每剂量组 n=3）中，单次口服 30、100 和 200 mg/kg 拉非酰胺后，血浆浓度呈良好的线性关系。Cmax 和 AUC 随剂量呈比例增加（图 2A、B）。分别于给药后 15、30、60 分钟、2、4、6、8 和 12 小时从尾静脉采集血样。采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 分析血浆。药代动力学参数采用 WinNonLin 5.1 软件进行处理。[1]
研究剂量下的血浆浓度：行为学研究中使用的剂量（30、60、80 mg/kg）产生的血浆浓度与临床试验中人体剂量（40-320 mg）所达到的血浆浓度相似。大鼠单次给药后，血浆峰浓度范围为 2-5 μM，接近通道阻滞的 Ki 值（5-10 μM）和 NMDA 受体拮抗的 IC50 值（8 μM）。[1]
半衰期：本研究中使用的剂量下，拉非尼酰胺的半衰期约为 2.5 小时。 [1]
脑渗透性：拉非尼酰胺具有良好的脑渗透能力。口服剂量为 30 mg/kg 时，大鼠脑内浓度可达约 15 μM，该浓度范围足以阻断其通道靶点。[1]

安全范围：本研究中使用的较高剂量（80 mg/kg）小于影响大鼠在旋转杆试验中运动能力的剂量（TD50 = 470 mg/kg，口服）的13%。[1]
死亡率：在初步实验中，SD大鼠连续42天每日两次服用60 mg/kg拉非尼酰胺，未出现死亡。[1]
无镇静作用：拉非尼酰胺治疗的动物未表现出镇静迹象，行为正常，梳理毛发，体重增长速度正常。在小鼠中，口服剂量高达60 mg/kg的拉非尼酰胺与溶媒组相比，在旷场试验中未观察到活动能力或刻板运动活性的显著差异（n=8-10/组）。[1]
高剂量心脏毒性：在电生理学研究中，全身拉非尼酰胺剂量超过抑制自发性神经瘤放电的剂量，导致动物在阻断动作电位起始或神经传导之前因心脏骤停而死亡。[1]

[1]. Ralfinamide administered orally before hindpaw neurectomy or postoperatively provided long-lasting suppression of spontaneous neuropathic pain-related behavior in the rat. Pain. 2008 Oct 15;139(2):293-305.

[2]. Effects of ralfinamide in models of nerve injury and chemotherapy-induced neuropathic pain. Eur J Pharmacol. 2018 Mar 15;823:27-34.

药物适应症
本药已用于治疗疼痛（急性或慢性）。

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背景：拉非酰胺（曾用名NW-1029）是一种α-氨基酰胺衍生物，具有多个作用位点，可用于抑制慢性疼痛。在本文发表时，该药正处于神经性疼痛的临床开发阶段。[1]
作用机制概述：拉非酰胺的作用机制广泛，包括：(1)阻断初级传入神经元中的Na⁺电流（Naᵥ1.3、1.7、1.8亚型）；(2)阻断Ca⁺电流（包括Caᵥ2.2）；(3)拮抗NMDA受体的多胺结合位点；以及(4)抑制脊髓突触体释放P物质。 [1]
预防性镇痛概念：该研究表明，术前服用拉非尼酰胺可以预防或减轻慢性疼痛的发生，其机制可能是通过抑制“损伤放电”（即新近受损神经产生的一系列冲动）或保护中枢神经系统神经元免受兴奋性毒性损伤。这是首次证实拉非尼酰胺对自发性（非诱发性）慢性疼痛具有镇痛作用。[1]
临床意义：在大鼠中产生镇痛作用的剂量所达到的血浆浓度与在临床试验中引起人类疼痛患者镇痛作用的剂量相似（患者每日两次服用40-320毫克拉非尼酰胺）。[1]
持久疗效：所有治疗方案产生的镇痛作用均持续至少3周，提示其具有疾病改善或神经保护作用，而不仅仅是缓解症状。[1]

C17H19FN2O2

302.3494

302.143

133865-88-0

Ralfinamide mesylate;202825-45-4

5745207

White to off-white solid powder

1.189

479ºC at 760mmHg

243.5ºC

2.46E-09mmHg at 25°C

1.569

3.415

55.56

2

4

7

22

346

1

C[C@@H](C(=O)N)NCC1=CC=C(C=C1)OCC2=CC=CC=C2F

BHJIBOFHEFDSAU-LBPRGKRZSA-N

InChI=1S/C17H19FN2O2/c1-12(17(19)21)20-10-13-6-8-15(9-7-13)22-11-14-4-2-3-5-16(14)18/h2-9,12,20H,10-11H2,1H3,(H2,19,21)/t12-/m0/s1

(2S)-2-[[4-[(2-fluorophenyl)methoxy]phenyl]methylamino]propanamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 125 mg/mL (~413.44 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。