| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Caspase-8
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| 体外研究 (In Vitro) |
通过使用荧光探针连接的caspase-8底物(Z-IETD-R110),在少数分离的胰腺腺泡细胞中显示了显著的caspase-8激活。Menadione (30 μM)诱导15±2%的腺泡细胞荧光显著增加(P < 0.00018)(图1B)。与对照细胞相比,凋亡阳性细胞显示出高荧光增加(~ 10.9±0.8倍)(图2A)。caspase-8底物在使用甲萘醌后30分钟内荧光增强(图2B)。这些数据表明caspase-8在甲萘醌诱导的氧化应激反应中被激活。共聚焦显微镜图像(图2C)显示荧光在整个细胞中均匀分布,表明活化的caspase-8主要定位于细胞质。[1]
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| 细胞实验 |
半胱天冬酶激活。[1]
将分离的胰腺腺泡细胞洗涤并悬浮在无钙缓冲液中(140 mM NaCl, 1.13 mM MgCl2, 4.7 mM KCl, 10 mM葡萄糖,0.1 M EDTA和10 mM HEPES, pH 7.2)。然后将细胞加载荧光指示剂连接的底物,用于活化的Caspase -2 (10 μM z - vdd - r110)、Caspase -8 (10 μM Z-IETD-R110)、Caspase -9 (10 μM Z-LEHD-R110)或一般Caspase (10 μM r110 -天冬氨酸酰胺),室温下20分钟或Caspase -10 (50 μM AEVD-AFC)或Caspase -12 (50 μM ATAD-AFC),在37℃下1小时。据报道,本研究中使用的Caspase底物(除一般底物外)是针对相关的Caspase启动物特异性的。为了避免刽子手半胱天冬酶激活底物,所有实验严格限制在甲萘醌诱导细胞凋亡后的前30分钟。上样后,清洗细胞,用无钙缓冲液重悬。将分离的细胞置于徕卡SP2共聚焦显微镜上,随时间进行荧光成像(caspase-2、-8、-9或一般caspase底物激发488nm,发射505 - 543nm;激发405 nm,发射475-600 nm (caspase-10和-12底物)。然后用30 μM的甲萘醌处理细胞。为了检测caspase激活的共定位和线粒体的位置,细胞也分别在37°C下加载MitoTracker Deep Red 633 (50 nM,激发633 nM,发射<650 nM)或四甲基罗丹明甲酯(100 nM,激发543 nM,发射bb0 600 nM) 15或20分钟。然后将细胞洗涤并在标准缓冲溶液中重悬。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
尽管实验性胰腺炎的严重程度与细胞凋亡与坏死的比例有关,但病理条件下胰腺中执行的细胞死亡程序仍未完全阐明。我们阐明了氧化应激剂甲萘醌诱导胰腺腺泡细胞凋亡的机制。对起始半胱天冬酶活性的实时监测显示,甲萘醌给药后30分钟内,66%的细胞激活了半胱天冬酶-9,15%的细胞激活了半胱天冬酶-8,但未检测到半胱天冬酶-2、-10或-12的激活。有趣的是,当抑制半胱天冬酶-9的激活时,半胱天冬酶-8的激活反而增加。 caspase-9 的半数最大激活 (t0.5) 发生在约 2 分钟内,并定位于线粒体或其附近;而 caspase-8 的 t0.5 发生在甲萘醌作用后约 26 分钟,并均匀分布于整个细胞内。钙螯合剂 BAPTA 或线粒体通透性转换孔抑制剂邦克列酸可完全阻断 caspase-9 的激活,但对 caspase-8 的激活没有影响。相反,溶酶体的破坏(用组织蛋白酶C底物Gly-Phe β-萘酰胺预孵育)、溶酶体酸性的丧失(巴弗洛霉素A1)或组织蛋白酶L或D的抑制均可阻断caspase-8的激活,但caspase-9的激活则不受影响。我们使用胃蛋白酶抑制剂A-BODIPY FL偶联物证实了在甲萘醌的作用下,组织蛋白酶D会从溶酶体中转位出来。我们得出结论,氧化应激剂甲萘醌在胰腺腺泡细胞内诱导两条独立的凋亡途径:一条是经典的线粒体钙依赖性途径,该途径在大多数细胞中迅速启动;另一条是较慢的、由caspase-8介导的途径,该途径依赖于组织蛋白酶的溶酶体活性,并在caspase-9途径被抑制时启动。[1]
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| 分子式 |
C74H86N10O25
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|---|---|
| 分子量 |
1515.53
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| 精确质量 |
1514.576558
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| PubChem CID |
171713852
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| 序列 |
(Z-Ile-Glu-Thr-Asp)2-Rhodamine 110
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| 短序列 |
(Z-IETD)2-Rhodamine 110
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| tPSA |
540 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
16
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| 氢键受体(HBA)数目 |
24
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| 可旋转键数目(RBC) |
41
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| 重原子数目 |
109
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| 分子复杂度/Complexity |
2960
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| 定义原子立体中心数目 |
12
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| SMILES |
CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NC1=CC2=C(C=C1)C(=C3C=CC(=CC3=[O+]2)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)OCC4=CC=CC=C4)C5=CC=CC=C5C(=O)[O-])NC(=O)OCC6=CC=CC=C6
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| InChi Key |
DSMSOMVESVLVDG-TVEQXDRTSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C74H86N10O25/c1-7-37(3)60(83-73(105)107-35-41-17-11-9-12-18-41)68(99)77-49(27-29-55(87)88)64(95)81-62(39(5)85)70(101)79-51(33-57(91)92)66(97)75-43-23-25-47-53(31-43)109-54-32-44(24-26-48(54)59(47)45-21-15-16-22-46(45)72(103)104)76-67(98)52(34-58(93)94)80-71(102)63(40(6)86)82-65(96)50(28-30-56(89)90)78-69(100)61(38(4)8-2)84-74(106)108-36-42-19-13-10-14-20-42/h9-26,31-32,37-40,49-52,60-63,85-86H,7-8,27-30,33-36H2,1-6H3,(H14-,75,76,77,78,79,80,81,82,83,84,87,88,89,90,91,92,93,94,95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106)/t37-,38-,39+,40+,49-,50-,51-,52-,60-,61-,62-,63-/m0/s1
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| 化学名 |
2-[3,6-bis[[(2S)-3-carboxy-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-4-carboxy-2-[[(2S,3S)-3-methyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoyl]amino]butanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]xanthen-10-ium-9-yl]benzoate
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| 别名 |
Z-IETD-R110; Z-IETD R110;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.6598 mL | 3.2992 mL | 6.5984 mL | |
| 5 mM | 0.1320 mL | 0.6598 mL | 1.3197 mL | |
| 10 mM | 0.0660 mL | 0.3299 mL | 0.6598 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。