Angiotensin II/BSA

别名: Angiotensin II BSA conjugate
目录号: V103823 纯度: ≥98%
血管紧张素 II/BSA 是血管紧张素 II(血管紧张素)与牛血清白蛋白(BSA)结合的抗原佐剂结合物。
Angiotensin II/BSA 产品类别: Angiotensin Receptor
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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1mg
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产品描述
血管紧张素II/BSA是一种抗原佐剂偶联物,由血管紧张素II(血管紧张素)与牛血清白蛋白(BSA)偶联而成。通过将抗原与蛋白佐剂偶联,可以增强疫苗模型中抗原特异性抗体的产生。该偶联物不影响蛋白质折叠或破坏主要表位,并且可以增强交叉呈递和抗原特异性T细胞的生成。
血管紧张素II/BSA(Ang II/BSA,CAS号未分配,分子量约66 kDa)是一种研究级抗原佐剂偶联物,用于开发抗血管紧张素II抗体。它由八肽激素血管紧张素II(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)共价连接而成。这种偶联增强了小分子血管紧张素II半抗原的免疫原性,从而能够生产用于研究应用的高亲和力、特异性抗体。
生物活性&实验参考方法
靶点
Angiotensin II/BSA is not a drug and has no direct therapeutic target. Its molecular target is the immune system. By presenting the Angiotensin II peptide to B cells, the BSA carrier protein acts as an adjuvant to stimulate a potent adaptive immune response [8L22-L24】. The B-cell receptors specific for the Angiotensin II epitope recognize the conjugate, leading to the production of anti-Angiotensin II antibodies. These antibodies can then be used as research tools or as passive immunotherapies to block the vasoconstrictor and aldosterone-stimulating effects of Angiotensin II.
体外研究 (In Vitro)
血管紧张素II/BSA的体外活性并非直接通过酶活性测定或细胞增殖试验来测量。相反,其活性是通过其作为免疫原时产生特异性抗体的能力来评估的。在ELISA中,将血管紧张素II/BSA包被于酶标板上,然后加入免疫动物的血清。使用抗种属二抗检测与血管紧张素II表位特异性结合的抗体。所得抗血管紧张素II抗体的滴度是衡量该偶联物免疫原性的指标。该偶联物本身不进行细胞毒性或酶抑制试验的评估。
体内研究 (In Vivo)
该偶联物在体内可用作免疫原,用于在兔、山羊或其他实验动物体内生成多克隆抗体。它也可用于通过杂交瘤技术生成单克隆抗体。牛血清白蛋白(BSA)载体是一种常用且有效的免疫原,可确保针对偶联的血管紧张素II肽产生强烈的免疫反应。所得抗体是免疫测定、蛋白质印迹以及在体内生理研究中中和血管紧张素II的宝贵试剂。该偶联物本身并非治疗药物,而是用于开发潜在的基于抗体的疗法。
酶活实验
为了测定该偶联物的效力,采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)。将 96 孔板的孔用碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液中的血管紧张素 II/BSA 溶液(1-10 ug/mL)包被。用 BSA 或酪蛋白封闭后,加入免疫动物血清的系列稀释液。孵育、洗涤后,加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的二抗。最后,加入显色底物(例如 TMB),并用酸终止反应。在 450 nm 波长处读取吸光度值。抗体滴度定义为产生高于对照信号的最高稀释度。
细胞实验
标准的免疫方案包括将血管紧张素II/BSA与佐剂混合,例如首次注射使用弗氏完全佐剂(FCA),后续加强免疫使用弗氏不完全佐剂(FIA)。将100-200 ug的结合物乳化于FCA中,皮下注射到新西兰白兔的多个部位。3-4周后,注射相同剂量的结合物,并加入FIA进行加强免疫。2-3周后进行第二次加强免疫。在最后一次加强免疫后10-14天采集血液,分离血清。按照所述方法,通过ELISA测定抗体滴度。该方案是制备高滴度多克隆抗体的标准方法。
动物实验
血管紧张素II/BSA并非标准细胞检测方法中使用的试剂。它是一种免疫原,注射到动物体内以产生抗体。然而,最终产物——抗体——可用于细胞检测,以中和血管紧张素II。例如,为了检测所产生抗体的阻断能力,首先用血管紧张素II刺激血管平滑肌细胞(VSMCs)以诱导其收缩或增殖。然后将细胞与含有抗血管紧张素II抗体的血清预孵育,再用血管紧张素II刺激。最后,检测抗体阻断血管紧张素II诱导效应的能力。
药代性质 (ADME/PK)
第6部分描述了使用血管紧张素II/BSA偶联物在兔体内制备抗体的标准方案。该偶联物本身并非用于药物疗效的动物实验方案,而是用于制备研究试剂。该偶联物与弗氏佐剂配制成1:1乳剂。通常使用兔,但根据所需抗体的不同,也可以使用豚鼠、大鼠或小鼠。免疫程序通常持续8-12周。方案结束后,采集动物血液并收集血清。本研究不评估直接的治疗或毒理学终点。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
作为一种免疫原和BSA偶联肽,血管紧张素II/BSA不适用于以最终形式进行全身给药。它用于免疫动物,之后会被免疫系统处理。由于其会被抗原呈递细胞迅速吸收,因此半衰期较短。BSA载体是一种大分子蛋白(66 kDa),会被处理并清除。目前尚无该特定偶联物的药代动力学数据。为保持稳定性,用于研究的血管紧张素II/BSA应以冻干粉末或缓冲溶液的形式储存在4℃或-20℃的环境中。
参考文献

[1]. Site-specific antigen-adjuvant conjugation using cell-free protein synthesis enhances antigen presentation and CD8+ T-cell response. Sci Rep. 2021 Mar 18;11(1):6267.

其他信息
血管紧张素II/BSA的毒性主要与免疫接种过程中使用的佐剂(例如弗氏完全佐剂)有关,该佐剂可引起局部肉芽肿和无菌性脓肿。该结合物本身无毒。然而,与任何外源蛋白一样,存在发生过敏反应的风险。操作时,应遵循生物试剂操作的标准安全预防措施。这包括佩戴个人防护装备(PPE),例如手套、实验服和护目镜,以防止皮肤和眼睛接触。由于它是BSA结合物,因此应避免吸入气溶胶。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
外观&性状
Typically exists as solids at room temperature
别名
Angiotensin II BSA conjugate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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