CJC-1295 With DAC   中文名称: CJC-1295 With DAC

CJC-1295 With DAC targets the growth hormone-releasing hormone receptor (GHRH-R), a G protein-coupled receptor expressed on somatotropic cells in the anterior pituitary gland. Upon binding to this receptor, it mimics the action of endogenous GHRH and stimulates the synthesis and pulsatile secretion of growth hormone (GH) from the pituitary. The DAC moiety does not alter receptor binding affinity but serves to prolong systemic exposure through reversible albumin association. This receptor-mediated mechanism activates intracellular signaling cascades including the cAMP/PKA pathway, ultimately leading to increased expression and release of GH and its downstream effector, insulin-like growth factor 1 (IGF-1).

体外研究表明，CJC-1295 With DAC 能够维持垂体细胞模型中 GHRH 受体的强效且持久的激活作用，且 DAC 修饰不影响受体结合或信号传导效率。该肽以浓度依赖的方式刺激原代垂体细胞培养物分泌 GH，其效力与天然 GHRH 相当。使用针对 CJC-1295 With DAC 制备的单克隆抗体进行免疫聚合酶链式反应 (I-PCR) 检测，可检测到浓度低至 0.8 pg/mL 的肽-蛋白偶联物，表明其具有很高的体外定量灵敏度。该化合物在含血清培养基中也表现出稳定性，这归因于 DAC-白蛋白相互作用的保护作用。

CJC-1295 With DAC 是一种由 30 个氨基酸组成的肽类药物，可刺激垂体释放生长激素 (GH)。与其他增强运动表现的肽类药物不同，CJC-1295 With DAC 的独特之处在于其含有一个活性马来酰亚胺丙酸基团，该基团能将肽与血浆蛋白表面的游离巯基共价连接。与血浆蛋白结合后，CJC-1295 With DAC 在血液中的活性持续时间显著长于那些快速排泄的非结合型肽类药物。由于 CJC-1295 With DAC 与血浆蛋白结合后，会转化为一种分子量未知的蛋白质，因此无法通过自上而下的质谱肽筛选方法进行检测。我们利用针对 CJC-1295 With DAC 肽段制备的一对单克隆抗体，建立了一种免疫聚合酶链式反应 (I-PCR) 检测方法，该方法能够检测浓度低至 0.8 pg/mL 的 CJC-1295 With DAC-蛋白偶联物。由于内源性马 GHRH 的检测需要将马血浆中 CJC-1295 With DAC 的筛选阈值设定为 50 pg/mL。在纯种赛马给药后采集的马血样本中，该方法在控制 CJC-1295 With DAC 的非法使用方面展现出有效性 [1]。体内实验表明，由于 CJC-1295 With DAC 通过 DAC 部分与血清白蛋白具有高亲和力结合，其活性显著长于未偶联的 GHRH 类似物。这种与白蛋白的结合形成了一个循环储存库，能够缓慢释放活性肽，从而在较长时间内持续刺激生长激素（GH）的释放。药效学研究表明，单次给药即可使GH和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平升高数天而非数小时，这比半衰期仅为几分钟的天然生长激素释放激素（GHRH）有了显著的改善。这种作用持续时间的延长使其成为研究慢性GHRH受体激活及其代谢后果的重要工具。

体外酶/受体结合试验通常采用竞争性结合实验，以过表达人GHRH受体的细胞膜制备物为底物，使用放射性标记的GHRH或荧光标记的肽类似物进行CJC-1295与DAC的结合。将DAC偶联肽与不同浓度的受体制备物孵育，并通过过滤或离心分离结合的配体和游离配体。在过量未标记GHRH存在下测定非特异性结合。结合亲和力（Kd）和竞争性抑制常数（Ki）根据饱和曲线和置换曲线计算。此外，使用针对CJC-1295 DAC肽的单克隆抗体的基于I-PCR的免疫测定可以定量肽-蛋白偶联物的形成，以此作为受体结合的替代指标。

CJC-1295 与 DAC 的体外细胞分析采用原代垂体细胞培养物或表达人 GHRH 受体的重组细胞系。将细胞用递增浓度的肽处理特定时间（通常为 4-24 小时），并通过酶联免疫吸附试验 (ELISA) 或放射免疫分析 (RIA) 检测培养基中 GH 的分泌量。通过竞争性免疫分析定量 cAMP 的积累或通过蛋白质印迹法检测下游磷酸化事件来评估细胞内信号传导。可以确定 GH 刺激的 EC50 值以及受体脱敏或内化的动力学。所有分析均在无血清或低血清培养基中进行，以最大程度地减少白蛋白结合的干扰。

使用 CJC-1295 With DAC 进行的体内动物研究通常在啮齿动物模型（大鼠或小鼠）中进行，以评估其皮下或静脉给药后的药代动力学和药效学特性。动物接受不同浓度的给药，并在给药后多个时间点采集血样，通过免疫测定法测量血浆中肽、生长激素 (GH) 和胰岛素样生长因子-1 (IGF-1) 的水平。通过比较 AUC 和峰浓度值与未结合的 GHRH 类似物，来表征其延长的半衰期和持续的药效学反应。长期研究可能涉及重复给药方案，以评估其对健康动物和疾病模型动物的体重、组织生长和代谢参数的影响。

与天然GHRH或未结合的合成类似物相比，CJC-1295与DAC结合后表现出显著改变的药代动力学特征，这归因于其通过DAC部分与血清白蛋白的可逆共价结合。这种与白蛋白的相互作用形成了一个循环药物库，在临床前模型中显著延长了肽的消除半衰期，从几分钟延长至几天。该肽从白蛋白复合物中缓慢释放，维持了稳定的血浆浓度和持续的GHRH受体占有率。皮下给药后的生物利用度高，且该化合物在血管以外的组织分布有限，这与其在循环中主要以白蛋白结合状态存在相一致。

公开文献中关于CJC-1295与DAC的毒理学评估数据有限；然而，据报道，在一名试验受试者死亡后，其临床开发已终止。动物模型临床前安全性研究本应评估包括急性毒性和重复给药毒性、遗传毒性以及注射部位局部耐受性在内的标准终点。作为一种肽类激素类似物，其潜在毒性可能与过度药理作用有关，包括生长激素（GH）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平过高，导致肢端肥大症样症状、胰岛素抵抗、体液潴留和关节疼痛。长期暴露也可能存在因持续GH/IGF-1信号传导的促有丝分裂作用而导致肿瘤发生的理论风险。

[1]. An immuno polymerase chain reaction screen for the detection of CJC-1295 With DAC and other growth-hormone-releasing hormone analogs in equine plasma. Drug Test Anal. 2019 Jun;11(6):804-812.

背景：在网上流传的民间药理学激发了人们对快速增肌、减脂和年轻肌肤的渴望。目标：本研究利用互联网民族志探讨女性在互联网论坛活动中使用合成生长激素类似物CJC-1295（包括DAC）的情况。方法：通过使用“CJC-1295（包括DAC）”及其变体，结合“论坛”一词进行系统的互联网搜索。检索到96个与健美网站相关的结果，提到CJC-1295（包括DAC）。应用排除标准，限制搜索范围为女性使用和论坛活动，最终保留9个网站。在这些网站上进行内部搜索，以查找与CJC-1295（包括DAC）相关的内容。最终获得并分析了23个与女性使用CJC-1295（包括DAC）相关的讨论帖子，采用经验现象学心理学方法进行分析。结果：论坛用户似乎对结合使用各种补充剂以增强运动表现和改善外观非常熟悉且经验丰富。选择将CJC-1295与DAC结合使用的主要原因是减肥、增强肌肉、保持年轻肌肤、改善睡眠和促进伤口愈合。用户还对女性使用该药物表示担忧，因为性别差异在生长激素脉冲中可能影响剂量估计、使用持续时间和长期后果。结论：公共卫生干预应将女性自用合成生长激素纳入产品补充剂类别，考虑到相关的不良健康后果。[Subst Use Misuse. 2016 Jan 2;51(1):73-84]\nCJC-1295与DAC是一种合成的GHRH（生长激素释放激素）类似物，结合了药物亲和力复合物，可与血清白蛋白结合以延长半衰期。其作用机制涉及延长GHRH受体激动作用，导致持续的GH（生长激素）分泌。尽管它已进入临床研究以治疗脂肪营养不良和GH缺乏症，但在一名受试者死亡后，开发被暂停。该化合物仍然是研究长效肽递送和持续GHRH受体信号传导的工具。它未获得FDA批准用于任何适应症，仅可用于实验室研究目的。在主要注册机构中未发现正在进行的临床试验。

C165H269N47O46

3647.28

3646.019

446262-90-4

91971820

Tyr-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg- Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Ser-Arg-Lys(Maleimidopropionyl)-NH2

White powder

-11.7

1540

54

52

128

258

8580

33

CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CCN3C(=O)C=CC3=O)C(=O)N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](CC4=CC=C(C=C4)O)N

ZUQGTWKGESAQCD-ZGFIGYLBSA-N

InChI=1S/C165H269N47O46/c1-22-87(15)130(209-137(233)92(20)185-148(244)116(76-127(225)226)196-136(232)89(17)183-138(234)99(168)73-95-44-48-97(217)49-45-95)160(256)204-115(74-94-36-25-24-26-37-94)154(250)211-132(93(21)216)162(258)195-108(54-57-123(171)221)145(241)205-120(80-215)158(254)200-114(75-96-46-50-98(218)51-47-96)153(249)192-105(43-35-66-182-165(177)178)141(237)191-102(40-28-31-62-167)146(242)208-129(86(13)14)159(255)202-109(68-81(3)4)147(243)184-90(18)135(231)189-106(52-55-121(169)219)143(239)198-112(71-84(9)10)151(247)206-118(78-213)156(252)186-91(19)134(230)188-103(41-33-64-180-163(173)174)140(236)190-101(39-27-30-61-166)142(238)197-111(70-83(7)8)150(246)199-110(69-82(5)6)149(245)194-107(53-56-122(170)220)144(240)201-117(77-128(227)228)155(251)210-131(88(16)23-2)161(257)203-113(72-85(11)12)152(248)207-119(79-214)157(253)193-104(42-34-65-181-164(175)176)139(235)187-100(133(172)229)38-29-32-63-179-124(222)60-67-212-125(223)58-59-126(212)224/h24-26,36-37,44-51,58-59,81-93,99-120,129-132,213-218H,22-23,27-35,38-43,52-57,60-80,166-168H2,1-21H3,(H2,169,219)(H2,170,220)(H2,171,221)(H2,172,229)(H,179,222)(H,183,234)(H,184,243)(H,185,244)(H,186,252)(H,187,235)(H,188,230)(H,189,231)(H,190,236)(H,191,237)(H,192,249)(H,193,253)(H,194,245)(H,195,258)(H,196,232)(H,197,238)(H,198,239)(H,199,246)(H,200,254)(H,201,240)(H,202,255)(H,203,257)(H,204,256)(H,205,241)(H,206,247)(H,207,248)(H,208,242)(H,209,233)(H,210,251)(H,211,250)(H,225,226)(H,227,228)(H4,173,174,180)(H4,175,176,181)(H4,177,178,182)/t87-,88-,89+,90-,91-,92-,93+,99-,100-,101-,102-,103-,104-,105-,106-,107-,108-,109-,110-,111-,112-,113-,114-,115-,116-,117-,118-,119-,120-,129-,130-,131-,132-/m0/s1

(3S)-4-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-6-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoylamino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-[[(2R)-2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-oxobutanoic acid

CJC-1295 With DAC; CID 91971820

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。