[Ala28]-β Amyloid(25-35) TFA

别名: β(25-35)KA TFA
目录号: V114718
[Ala28]-β淀粉样蛋白(25-35) (β(25-35)KA) TFA 是 Aβ(25-35) 的电负性突变肽,可加速萤火虫荧光素酶的聚集。
[Ala28]-β Amyloid(25-35) TFA 产品类别: Beta Amyloid
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
[Ala28]-β淀粉样蛋白(25-35) (β(25-35)KA) TFA 是 Aβ(25-35) 的电负性突变肽,可加速萤火虫荧光素酶的聚集。
[Ala28]-beta淀粉样蛋白(25-35) TFA,也称为beta(25-35)KA TFA,是一种合成突变肽,来源于beta-淀粉样蛋白(Abeta) 25-35片段。在该突变体中,第28位赖氨酸残基(K28)被丙氨酸(A28)取代。Abeta(25-35)是保留了全长Abeta聚集特性和神经毒性作用的最短Abeta片段。野生型片段是一个功能域,与阿尔茨海默病中的神经营养和神经毒性作用均有关。第28位的丙氨酸取代使突变肽带负电荷。该突变体已被证明可以加速萤火虫荧光素酶的聚集,并被用于蛋白质聚集的研究。
生物活性&实验参考方法
靶点
Unlike the full-length Abeta peptide, [Ala28]-beta Amyloid(25-35) does not have a defined pharmacological target for therapeutic intervention. Instead, it functions as a tool peptide for studying protein aggregation mechanisms. It is reported to accelerate the aggregation of firefly luciferase, an enzyme commonly used as a reporter. This is likely due to changes in surface charge and hydrophobicity resulting from the K28A mutation. The mechanism is non-specific and may involve electrostatic interactions, hydrophobic contacts, or surface-assisted aggregation. In wild-type Abeta(25-35), the positively charged lysine at position 28 influences peptide conformation and aggregation kinetics. Its replacement with uncharged alanine leads to faster aggregation kinetics.
体外研究 (In Vitro)
在无细胞聚集实验中,[Ala28]-β淀粉样蛋白(25-35)促进萤火虫荧光素酶的聚集,导致其失活。这种效应呈浓度依赖性,在肽浓度为10-100 microM时即可观察到。在适当条件下,该肽本身可以形成淀粉样蛋白样原纤维,这可通过硫黄素T荧光测定。突变肽的聚集动力学比野生型Aβ(25-35)片段更快。该肽未表现出对特定受体的激动剂或拮抗剂活性。
体内研究 (In Vivo)
该肽段不具有任何治疗用途。它被用作无细胞系统中研究蛋白质聚集机制的研究工具。目前尚未有关于该特定突变体的体内研究报道。然而,野生型Aβ(25-35)在体内会发生聚集并诱发神经毒性。K28A突变可能会改变这些特性,但尚未在动物模型中进行研究。
酶活实验
进行硫黄素T (ThT) 聚集测定。将肽溶解于六氟异丙醇 (HFIP) 中,分装后用氮气吹干以除去HFIP。肽膜储存于-80℃。测定时,将肽溶解于10 mM NaOH中,配制成1 mM的浓度,然后用含有100 mM NaCl和20 uM ThT的10 mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)稀释至50 uM。将反应混合物置于底部透明的96孔黑色板中,于37℃孵育。每隔5分钟测量一次ThT荧光强度(激发波长440 nm,发射波长480 nm),每次测量之间摇动孔板。计算滞后时间、延伸速率和最终荧光强度。对于电子显微镜观察,将10 uL聚集肽(50 uM,老化24-48小时)滴加到碳膜铜网上,用2%醋酸铀酰进行负染色,然后进行观察。对于荧光素酶聚集实验,将重组萤火虫荧光素酶(50 nM)与不同浓度的[Ala28]-β淀粉样蛋白(25-35)(0-100 uM)在含有50 mM Tris-HCl(pH 7.5)、10 mM MgCl2和1 mM DTT的缓冲液中于37℃孵育2小时。分别在0、30、60、90和120分钟取样,并在发光仪中加入底物D-荧光素(0.5 mM)和ATP(1 mM)来测定荧光素酶活性。记录10秒内的发光强度。剩余活性百分比是相对于未处理的对照组计算的。
细胞实验
对于细胞活力检测,基于细胞的荧光素酶聚集与细胞毒性研究没有直接关联。对于细胞毒性研究,在神经元细胞培养物中测试野生型Aβ(25-35)片段。将SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞或原代大鼠皮层神经元接种于96孔板(2×10⁴个细胞/孔),培养48小时。然后用1-50 uM的肽(在37℃下预聚集24-48小时)处理细胞24-48小时。采用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)法检测细胞活力。检测乳酸脱氢酶(LDH)释放以评估细胞膜损伤。使用DCFH-DA染料检测细胞内活性氧(ROS)。细胞凋亡可通过Hoechst 33342染色检测细胞核浓缩情况以及测定caspase-3活性来评估。K28A突变可能改变这些毒性特性。
动物实验
目前尚未报道该突变体的体内毒性模型。对于野生型Aβ(25-35),将雄性Wistar大鼠(8-12周龄,250-300 g)麻醉后,双侧脑室内(ICV)注射5-10 nmol聚集肽(溶于5 μL PBS)。对照组动物注射乱序肽或溶剂。7-14天后,采用Morris水迷宫(隐藏平台)或被动回避测试评估记忆和学习能力。行为学测试后,采集海马组织,用于检测氧化应激标志物(MDA、GSH、SOD)和促炎细胞因子(IL-1β、TNF-α)。K28A突变体尚未进行体内测试。
参考文献

[1]. T Konno. Amyloid-induced aggregation and precipitation of soluble proteins: an electrostatic contribution of the Alzheimer's beta(25-35) amyloid fibril. Biochemistry. 2001 Feb 20;40(7):2148-54.

其他信息
该肽本身(游离碱)的分子量为1003.17。其氨基酸序列为:Gly-Ser-Asn-Ala-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met (GSNAGAIIGLM)。在野生型Aβ(25-35)序列(GSNKGAIIGLM)中,该突变体中第28位的赖氨酸被丙氨酸取代。丙氨酸的取代中和了通常存在于第28位的正电荷,根据一些资料,这形成了一个带负电荷的突变肽,而另一些资料则将其描述为电中性。三氟乙酸(TFA)盐形式是合成肽的常用形式。该游离碱的CAS号为173993-86-7。该肽应在-20℃干燥保存,并避光防潮。它可溶于DMSO,超声处理后可溶于水。对于聚集研究,应将肽在适当的缓冲液中于 37°C 孵育 48 小时进行预聚集。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C42H74N12O14S.XC2HF3O2
分子量
1003.17 (free base)
相关CAS号
[Ala28]-β Amyloid(25-35)
序列
Gly-Ser-Asn-Ala-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-MetGSNAGAIIGLM
外观&性状
White to off-white solid powder
别名
β(25-35)KA TFA
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气下),避免暴露在潮湿和光照下。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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