| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Unlike the full-length Abeta peptide, [Ala28]-beta Amyloid(25-35) does not have a defined pharmacological target for therapeutic intervention. Instead, it functions as a tool peptide for studying protein aggregation mechanisms. It is reported to accelerate the aggregation of firefly luciferase, an enzyme commonly used as a reporter. This is likely due to changes in surface charge and hydrophobicity resulting from the K28A mutation. The mechanism is non-specific and may involve electrostatic interactions, hydrophobic contacts, or surface-assisted aggregation. In wild-type Abeta(25-35), the positively charged lysine at position 28 influences peptide conformation and aggregation kinetics. Its replacement with uncharged alanine leads to faster aggregation kinetics.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在无细胞聚集实验中,[Ala28]-β淀粉样蛋白(25-35)促进萤火虫荧光素酶的聚集,导致其失活。这种效应呈浓度依赖性,在肽浓度为10-100 microM时即可观察到。在适当条件下,该肽本身可以形成淀粉样蛋白样原纤维,这可通过硫黄素T荧光测定。突变肽的聚集动力学比野生型Aβ(25-35)片段更快。该肽未表现出对特定受体的激动剂或拮抗剂活性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
该肽段不具有任何治疗用途。它被用作无细胞系统中研究蛋白质聚集机制的研究工具。目前尚未有关于该特定突变体的体内研究报道。然而,野生型Aβ(25-35)在体内会发生聚集并诱发神经毒性。K28A突变可能会改变这些特性,但尚未在动物模型中进行研究。
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| 酶活实验 |
进行硫黄素T (ThT) 聚集测定。将肽溶解于六氟异丙醇 (HFIP) 中,分装后用氮气吹干以除去HFIP。肽膜储存于-80℃。测定时,将肽溶解于10 mM NaOH中,配制成1 mM的浓度,然后用含有100 mM NaCl和20 uM ThT的10 mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)稀释至50 uM。将反应混合物置于底部透明的96孔黑色板中,于37℃孵育。每隔5分钟测量一次ThT荧光强度(激发波长440 nm,发射波长480 nm),每次测量之间摇动孔板。计算滞后时间、延伸速率和最终荧光强度。对于电子显微镜观察,将10 uL聚集肽(50 uM,老化24-48小时)滴加到碳膜铜网上,用2%醋酸铀酰进行负染色,然后进行观察。对于荧光素酶聚集实验,将重组萤火虫荧光素酶(50 nM)与不同浓度的[Ala28]-β淀粉样蛋白(25-35)(0-100 uM)在含有50 mM Tris-HCl(pH 7.5)、10 mM MgCl2和1 mM DTT的缓冲液中于37℃孵育2小时。分别在0、30、60、90和120分钟取样,并在发光仪中加入底物D-荧光素(0.5 mM)和ATP(1 mM)来测定荧光素酶活性。记录10秒内的发光强度。剩余活性百分比是相对于未处理的对照组计算的。
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| 细胞实验 |
对于细胞活力检测,基于细胞的荧光素酶聚集与细胞毒性研究没有直接关联。对于细胞毒性研究,在神经元细胞培养物中测试野生型Aβ(25-35)片段。将SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞或原代大鼠皮层神经元接种于96孔板(2×10⁴个细胞/孔),培养48小时。然后用1-50 uM的肽(在37℃下预聚集24-48小时)处理细胞24-48小时。采用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)法检测细胞活力。检测乳酸脱氢酶(LDH)释放以评估细胞膜损伤。使用DCFH-DA染料检测细胞内活性氧(ROS)。细胞凋亡可通过Hoechst 33342染色检测细胞核浓缩情况以及测定caspase-3活性来评估。K28A突变可能改变这些毒性特性。
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| 动物实验 |
目前尚未报道该突变体的体内毒性模型。对于野生型Aβ(25-35),将雄性Wistar大鼠(8-12周龄,250-300 g)麻醉后,双侧脑室内(ICV)注射5-10 nmol聚集肽(溶于5 μL PBS)。对照组动物注射乱序肽或溶剂。7-14天后,采用Morris水迷宫(隐藏平台)或被动回避测试评估记忆和学习能力。行为学测试后,采集海马组织,用于检测氧化应激标志物(MDA、GSH、SOD)和促炎细胞因子(IL-1β、TNF-α)。K28A突变体尚未进行体内测试。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
该肽本身(游离碱)的分子量为1003.17。其氨基酸序列为:Gly-Ser-Asn-Ala-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met (GSNAGAIIGLM)。在野生型Aβ(25-35)序列(GSNKGAIIGLM)中,该突变体中第28位的赖氨酸被丙氨酸取代。丙氨酸的取代中和了通常存在于第28位的正电荷,根据一些资料,这形成了一个带负电荷的突变肽,而另一些资料则将其描述为电中性。三氟乙酸(TFA)盐形式是合成肽的常用形式。该游离碱的CAS号为173993-86-7。该肽应在-20℃干燥保存,并避光防潮。它可溶于DMSO,超声处理后可溶于水。对于聚集研究,应将肽在适当的缓冲液中于 37°C 孵育 48 小时进行预聚集。
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| 分子式 |
C42H74N12O14S.XC2HF3O2
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| 分子量 |
1003.17 (free base)
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| 相关CAS号 |
[Ala28]-β Amyloid(25-35)
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| 序列 |
Gly-Ser-Asn-Ala-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-MetGSNAGAIIGLM
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 别名 |
β(25-35)KA TFA
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气下),避免暴露在潮湿和光照下。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。