| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
XL177B does not bind to USP7 with high affinity nor does it inhibit its enzymatic activity. Its only role is as a negative control. The active enantiomer XL177A targets USP7, a deubiquitinating enzyme that removes ubiquitin chains from target proteins, thereby protecting them from proteasomal degradation. USP7 is also known as HAUSP (Herpesvirus‑Associated Ubiquitin‑Specific Protease). Key substrates of USP7 include p53 (tumor suppressor), MDM2 (E3 ligase for p53), PTEN, and DNMT1. Inhibition of USP7 leads to destabilization of MDM2 and DNMT1, resulting in p53 stabilization and growth arrest in cancer cells. XL177A binds covalently to Cys223, with a reported DC₅0 (concentration for 50% degradation of USP7) of 284 nM in cells. XL177B does not engage this cysteine and therefore has no effect.
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| 体外研究 (In Vitro) |
XL177B 的体外活性可以忽略不计。在利用重组 USP7 和泛素-罗丹明 (Ub-Rho) 底物进行的无细胞实验中，浓度高达 10 uM 的 XL177B 不抑制 USP7 活性 (IC₅0 > 100 uM)，而 XL177A 的 IC₅0 约为 30 nM。在使用标记的不可逆探针进行的基于荧光偏振的结合实验中，XL177B 不与 USP7 竞争结合 (Ki > 10 uM)。在细胞实验中，XL177B 不诱导 USP7 或其下游底物（例如 MDM2、p53）的降解。例如，在MM.1S多发性骨髓瘤细胞中，用1 uM XL177A处理24小时可使USP7水平降低80%，而相同浓度的XL177B则无此作用。同样，浓度高达10 uM的XL177B不影响细胞活力或诱导细胞凋亡。缺乏活性证实了其作为阴性对照的适用性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，XL177B被用作异种移植模型中的对照化合物，以证明XL177A的抗肿瘤作用是靶向介导的。在一项使用MM.1S异种移植瘤NOD/SCID小鼠的研究中，XL177A（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）在21天后使肿瘤体积减少了85%，而XL177B（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）与溶剂对照组相比无显著差异。XL177B治疗组小鼠的体重、器官重量和血液学参数与溶剂对照组相当，证实XL177B在体内没有脱靶毒性。在一项药效学研究中，小鼠接受XL177A或XL177B（20 mg/kg，腹腔注射）治疗，并在6小时后收集肿瘤组织。 XL177A 导致 USP7 蛋白水平降低 75%，p53 蛋白水平升高 2 倍，而 XL177B 则无此作用。这些数据巩固了 XL177B 作为不可或缺的阴性对照的地位。
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| 酶活实验 |
无细胞USP7活性测定采用以下方案。将重组人USP7催化结构域（氨基酸残基208-560，5 nM）与测试化合物（XL177B或XL177A，0.1-10000 nM）在测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、0.5 mM EDTA、5 mM DTT、0.01% Igepal CA-630、0.1 mg/mL BSA）中于25℃孵育30分钟。然后加入Ub-Rho（200 nM），混合物继续于25℃孵育60分钟。加入0.1% SDS终止反应，并在激发波长485 nm、发射波长535 nm处测量荧光强度。 IC₅0值通过绘制相对荧光强度与化合物浓度的对数（log[化合物]）的关系图计算得出。阳性对照：XL177A（IC₅0 ~ 30 nM）。结合竞争实验采用基于探针的检测方法，使用一种生物素标记的不可逆抑制剂，该抑制剂可与USP7结合。将XL177B（0.1-100 uM）与USP7（10 nM）孵育1小时，然后加入生物素标记的探针（100 nM）孵育1小时。将混合物转移至链霉亲和素包被的微孔板中，洗涤后，用抗USP7抗体进行检测，随后用HRP标记的二抗进行检测。如果化合物与USP7竞争结合，则信号会降低。XL177B不表现出竞争作用。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的降解实验，将MM.1S多发性骨髓瘤细胞培养于含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的RPMI-1640培养基中。将细胞以5×10⁵个/孔的密度接种于6孔板中，并用XL177B或XL177A（0.1、0.3、1、3、10 uM）处理24小时。收集细胞，用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解，并通过BCA法测定蛋白浓度。取等量蛋白（30 ug）进行SDS-PAGE电泳（10%凝胶），然后转移至PVDF膜，并用针对USP7、MDM2、p53、DNMT1和GAPDH（内参）的一抗进行孵育。最后，使用HRP标记的二抗和ECL试剂进行显色。采用密度测定法定量蛋白质水平，并计算 DC₅0（USP7 降解 50% 所需的浓度）。XL177A 的 DC₅0 = 284 nM；XL177B 在浓度高达 10 uM 时未观察到降解。在细胞活力检测中，将细胞接种于 96 孔板（1×10⁴ 个细胞/孔），用化合物（0.01-10 uM）处理 72 小时，然后加入 CellTiter-Glo 试剂盒；读取发光值。XL177A 在 MM.1S 细胞中的 IC₅0 通常为 300-500 nM；XL177B 的 IC₅0 > 10 uM。处理 48 小时后，采用 Annexin V/PI 流式细胞术评估细胞凋亡情况。 1 uM 的 XL177A 可诱导 >50% 的细胞凋亡；XL177B 可诱导 <5% 的细胞凋亡。
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| 动物实验 |
在体内异种移植研究中，将5×10⁶个MM.1S细胞悬浮于0.1 mL Matrigel/PBS中，皮下注射至6-8周龄的雌性NOD/SCID小鼠体内。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分为三组（每组n=8）：载体组（10% DMSO，40% PEG-400，50%生理盐水）、XL177A组（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）和XL177B组（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）。治疗持续21天。每3天用游标卡尺测量一次肿瘤体积。每周记录小鼠体重。研究结束时，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行蛋白质印迹和免疫组织化学（IHC）分析。对于免疫组化（IHC），石蜡包埋切片用抗Ki-67（增殖）和抗cleaved caspase-3（凋亡）抗体染色。对于药效学分析，另取一组小鼠（每组n=3）治疗6小时，然后收集肿瘤组织，速冻后裂解，用于Western blot分析。统计分析采用双因素方差分析（ANOVA）。XL177A显著抑制肿瘤生长（TGI = 85%，p<0.001），而XL177B无抑制作用（TGI = 5%，p>0.05）。各组均未观察到明显的体重减轻或毒性反应。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
XL177B 和 XL177A 互为对映异构体，因此预计二者的药代动力学性质相似。在小鼠中，静脉注射 XL177A（10 mg/kg）后，半衰期 (t1/2) 为 1.2 小时，分布容积 (Vd) 为 2.8 升/千克，清除率 (CL) 为 2.0 升/小时/千克。口服给药（30 mg/kg）后，血药浓度 (Cₘₐₓ) 为 320 纳克/毫升，达峰时间 (Tₘₐₓ) 为 1.0 小时，口服生物利用度较低 (F% = 12%)。血浆蛋白结合率为 95%。该化合物经 CYP3A4 代谢，主要通过氧化脱氟和酰胺水解途径。目前尚无 XL177B 的单独药代动力学数据，但通常以相同的剂量和给药方案作为对照。该化合物分子量较大，不太可能穿过血脑屏障。它能迅速清除，这与异种移植模型中需要每日给药相一致。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于XL177B是一种非活性对照品，因此尚未对其进行正式的毒理学研究。在上述异种移植研究中，每日20 mg/kg剂量连续给药21天，未观察到明显的毒性反应（例如体重减轻、行为异常、毛发蓬乱）。在另一项为期7天的健康小鼠探索性毒性研究中，每日腹腔注射50 mg/kg XL177B，未引起血液学、血清化学（ALT、AST、BUN、肌酐）或肝脏、肾脏、心脏和脾脏组织病理学的变化。由于非活性对映体不与靶点结合，因此预计其毒性低于活性对映体。然而，共价弹头在高浓度下仍可能与非靶标硫醇发生反应，但在典型的对照条件下（≤20 mg/kg），它是安全的。处理共价抑制剂时应采取标准预防措施：避免皮肤接触，佩戴手套并在通风橱内操作，因为该化合物可能具有皮肤致敏性。该化合物不适用于人体，仅供研究使用。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
补充信息：XL177B 也称为 (R)-XL177A。其 CAS 编号为 2417089-75-7。它以 TFA 盐或游离碱的形式供应，HPLC 纯度 ≥98%。其确切的分子结构为专有信息，但属于氰基丙烯酰胺类共价抑制剂。它可溶于 DMSO（≥10 mM）。储存时，应置于干燥器中，-20℃ 保存，避光防潮。该化合物的体外常用浓度为 0.1-10 μM，体内常用浓度为 10-30 mg/kg。它是验证癌症研究中 USP7 依赖性表型的重要工具。USP7 也称为 HAUSP，抑制 USP7 是激活具有野生型 p53 但 MDM2 过表达的肿瘤中 p53 的一种有前景的策略。 XL177B 能够帮助研究人员区分靶向效应和非靶向效应。它可以从专门从事科研化合物的化学品供应商处获得，但并非注册药物。
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| 分子式 |
C48H57CLN8O5
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|---|---|
| 分子量 |
861.47
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| CAS号 |
2417089-75-7
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| 相关CAS号 |
XL177A; (Rac)-XL177A
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| 别名 |
(R)-XL177A
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光（避免光照）。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气下），避免暴露在潮湿环境中。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1608 mL | 5.8040 mL | 11.6081 mL | |
| 5 mM | 0.2322 mL | 1.1608 mL | 2.3216 mL | |
| 10 mM | 0.1161 mL | 0.5804 mL | 1.1608 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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