| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 体外研究 (In Vitro) |
- 立体选择性细胞毒性： (R)-ACE-OH 在 ACE 敏感 (A549) 和不敏感 (DLD-1) 的细胞系中，无论是否存在 IFNγ，均无活性。与 (S)-ACE-OH 形成鲜明对比，它没有显示出干扰素增强的细胞毒性 [1]。
- 无法诱导蛋白质降解： 在 IFNγ 预刺激的 A549 细胞中，(R)-ACE-OH (10 µM) 处理 8 小时未触发核孔蛋白 NUP35、SMPD4 和 GLE1 的降解，而 (S)-ACE-OH 则可以 [1]。 |
|---|---|
| 酶活实验 |
- 等温滴定量热法 (ITC) 测定结合亲和力： ITC 实验在 25°C 下使用 MicroCal PEAQ-ITC 进行。将纯化的 TRIM21D355A 的 PRYSPRY 结构域透析后（缓冲液：20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0.5 mM TCEP， pH 8.0, 1% DMSO）以 20-25 µM 的浓度加入样品池中。将 (R)-ACE-OH 从 100 mM DMSO 母液中稀释至 300-500 µM（最终 DMSO 浓度为 1%）。滴定程序包括一次 0.4 µL 的初始注射和 18 次 2 µL 的注射，搅拌速度为 1000 rpm。测得 (R)-ACE-OH 与 PRYSPRY 结构域的结合亲和力（Kd）为 9.11 µM [1]。
- ITC 测定三元复合物形成： 为探究三元复合物的形成，将 NUP98APD (注射器中 200 µM) 滴定到含有预孵育了 (R)-ACE-OH (100 µM) 的全长 His-Lipoyl-TRIM21D355A (50 µM) 的样品池中。实验结果显示，尽管观察到 NUP98APD 与 TRIM21D355A;(R)-ACE-OH 复合物的结合，但其亲和力 (Kd = 57.2 µM，置信区间: 38.2-76.2 µM) 比与 (S)-ACE-OH 形成的复合物低 17 倍 [1]。 - GST Pull-Down 实验： 将 His-Lipoyl-TRIM21 (WT 或 D355A) 与 GST-NUP98APD 按 1:1 摩尔比在 pull-down 实验缓冲液中混合。向蛋白混合物中加入 DMSO、(S)-ACE-OH 或 (R)-ACE-OH。冰上孵育后，将混合物与谷胱甘肽琼脂糖珠一起孵育。通过 SDS-PAGE 和考马斯亮蓝染色分析结合蛋白。实验表明，在 (R)-ACE-OH 存在下，GST-NUP98APD 不能有效拉下 His-Lipoyl-TRIM21，这与 (S)-ACE-OH 的效果相反 [1]。 - CEBIT（基于冷凝物的试管内生物分子相互作用富集）实验： 形成 SmF-EGFP-SH3-NUP98APD 和 SmF-EGFP-PRM 冷凝物。将含有 TRIM21D355A-3xFLAG 的细胞裂解液或纯化的 TRIM21D355A-3xFLAG 蛋白与不同浓度的 (R)-ACE-OH 一起孵育。通过离心沉淀冷凝物，并用蛋白质印迹法进行分析。该实验证明，(R)-ACE-OH 未能像 (S)-ACE-OH 那样以剂量依赖的方式富集冷凝物中的 TRIM21 [1]。 - 体外泛素化实验： 在含有 ATP 的缓冲液中，混合纯化的 TRIM21D355A-3xFLAG、SmF-EGFP-PRM、SmF-EGFP-SH3-NUP98APD、UBA1 (E1)、七种 E2 酶的混合物以及泛素，进行体外泛素化反应。在加入酶之前 30 分钟加入 (R)-ACE-OH。结果显示，用抗泛素和抗 GFP 抗体检测，(R)-ACE-OH 未能诱导 SmF-EGFP-SH3-NUP98APD 和 SmF-EGFP-PRM 的多聚泛素化 [1]。 |
| 细胞实验 |
- 细胞活力测定： 为获得浓度-反应曲线，将细胞（如 A549, DLD-1）接种在 96 孔板中，并使用数字分配器加入梯度稀释的 (R)-ACE-OH。三天后，按照制造商说明使用发光法细胞活力检测试剂盒测量细胞存活率。该实验证实，无论是否存在 IFNγ，(R)-ACE-OH 在这两种细胞系中均无活性 [1]。
- 检测蛋白质降解的蛋白质印迹法： A549 细胞先用 IFNγ 预处理，再用 (R)-ACE-OH 或 (S)-ACE-OH 处理 8 小时。细胞在含有苯并酶和蛋白酶抑制剂的 SDS 裂解缓冲液中裂解。蛋白裂解液经 SDS-PAGE 分离，转移到硝酸纤维素膜上，然后用靶蛋白（如 NUP35, SMPD4, GLE1）和内参（β-actin）的一抗进行孵育。这证实了 (R)-ACE-OH 与 (S)-ACE-OH 不同，不能诱导特定核孔蛋白的降解 [1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- 无活性对映体： (R)-ACE-OH 作为关键的阴性对照，证明了依赖于 TRIM21 的降解和细胞毒性的分子胶活性完全取决于 (S) 对映体的构型。通过化学衍生化和 X 射线衍射确定了两种对映体的绝对构型 [1]。
- 结构比较： TRIM21 PRYSPRY 结构域与 (R)-ACE-OH 的共晶体结构（分辨率 1.74 Å）显示，虽然三环吩噻嗪环同样占据疏水口袋，但其脂肪链的取向不同。(R)-ACE-OH 的胺基延伸到口袋外部，这与 (S)-ACE-OH 的胺基与 E389 和 Q395 形成极性相互作用的构型不同，为其无活性提供了结构基础 [1]。 |
| 分子式 |
C19H24N2OS
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|---|---|
| 分子量 |
328.47
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| 精确质量 |
328.1609345
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| CAS号 |
3095569-90-4
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| 相关CAS号 |
(S)-ACE-OH
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| 别名 |
(R)-ACE-OH； (R)-ACE OH
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0444 mL | 15.2221 mL | 30.4442 mL | |
| 5 mM | 0.6089 mL | 3.0444 mL | 6.0888 mL | |
| 10 mM | 0.3044 mL | 1.5222 mL | 3.0444 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ent-DMPC
ent-DHEA Sulfate sodium
ent-25-Hydroxycholesterol
ent-DOPC
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