| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ac-KQKLR-AMC TFA targets the active site of Cathepsin S, a cysteine protease belonging to the papain family. Cathepsin S is primarily located in lysosomes and is highly expressed in antigen-presenting cells (dendritic cells, macrophages, B cells). The peptide sequence KQKLR (Lys-Gln-Lys-Leu-Arg) is specifically recognized and cleaved by Cathepsin S between the leucine and arginine residues (Leu-Arg bond). The acetyl group at the N-terminus enhances stability against exopeptidases. Cathepsin S has optimal activity at acidic pH (5.0-6.0), matching the lysosomal environment. The substrate can also be used to measure activity of other cysteine proteases (e.g., Cathepsin L, Cathepsin K) but with lower efficiency; it is considered a selective Cathepsin S substrate.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外，Ac-KQKLR-AMC TFA 可用于酶动力学和抑制剂筛选实验中测定组织蛋白酶 S 的活性。重组人组织蛋白酶 S（经 DTT 激活）可裂解该底物，Km 值为 5-20 microM，kcat 值为 0.5-2 s-¹。荧光强度（激发/发射波长 354/442 nm）随时间和酶浓度呈线性增加。该底物在酸性缓冲液中稳定，不会发生自水解。在强效组织蛋白酶 S 抑制剂（IC50 值低至亚纳摩尔级）存在下，荧光信号呈浓度依赖性降低。该底物还可用于测定细胞裂解液或组织匀浆中的组织蛋白酶 S 活性。它已被用于炎症性疾病、癌症侵袭和疼痛的研究中，在这些疾病中，组织蛋白酶 S 的活性均上调。未观察到该底物本身具有直接细胞毒性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，Ac-KQKLR-AMC TFA 通常不作为药物用于动物；它是一种用于体外活性测定的实验室试剂。然而，使用该底物测定的组织蛋白酶 S 活性与小鼠模型中的疾病进展相关。在慢性疼痛小鼠模型（脊神经结扎）中，使用 Ac-KQKLR-AMC TFA 测定的脊髓提取物中的组织蛋白酶 S 活性升高，而使用组织蛋白酶 S 抑制剂治疗可减轻疼痛行为。在动脉粥样硬化小鼠模型（ApoE-/- 小鼠）中，主动脉组织中的组织蛋白酶 S 活性增加，与斑块不稳定性相关。该底物经修饰后也可用于体内成像（但不能与 AMC 结合使用，因为 AMC 不适用于深层组织成像）。对于体外应用，在处死动物后，将组织匀浆化并使用该底物进行测定。因此，该化合物可作为评估体内组织蛋白酶 S 抑制剂靶点结合情况的工具。
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| 酶活实验 |
Ac-KQKLR-AMC TFA 的无细胞酶活性测定在 96 孔或 384 孔黑色板中进行。重组人组织蛋白酶 S（活性位点滴定）在激活缓冲液中激活：50 mM 乙酸钠（pH 5.5）、150 mM NaCl、2.5 mM DTT、2 mM EDTA。将酶在激活缓冲液中于室温预孵育 15-30 分钟。底物 Ac-KQKLR-AMC TFA 溶解于 DMSO 中（10 mM 储备液），并用测定缓冲液（100 mM MES，pH 5.5、2 mM DTT、0.01% Brij-35）稀释至工作浓度（0.5-200 uM）。在 96 孔板中，混合 50 uL 激活的组织蛋白酶 S（终浓度 0.1-10 nM）和 40 uL 测定缓冲液。加入 10 uL 底物（终浓度 10-20 uM）。对于抑制实验，加入 5 uL 抑制剂（系列稀释），并在加入底物前预孵育 10-15 分钟。最终反应体积为 100 uL。在 37℃ 下孵育 30-60 分钟。使用微孔板读数仪在激发/发射波长 354/442 nm 处测量荧光强度。每分钟相对荧光单位 (RFU) 的增加量与酶活性成正比。通过将初始反应速率与底物浓度的关系拟合到米氏方程来确定 Km 值。对于抑制剂 IC50 的测定，计算抑制百分比并将其拟合到四参数逻辑曲线。对照孔：无酶（背景）和无抑制剂（完全活性）。Z' 因子 >0.7 表明该检测方法适用于高通量筛选 (HTS)。该检测方法稳定可靠，可以小型化为 384 孔板形式。
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| 细胞实验 |
细胞组织蛋白酶S活性检测中，细胞接种于6孔板或96孔板中。可使用人细胞系（例如THP-1巨噬细胞、A549细胞、HeLa细胞）或原代细胞（人树突状细胞、小鼠巨噬细胞）。对于巨噬细胞，THP-1细胞需用PMA（100 ng/mL，48小时）诱导分化。为检测组织蛋白酶S的上调，细胞可用IFN-γ（50 ng/mL）或LPS（100 ng/mL）刺激24-48小时。用抑制剂（例如，组织蛋白酶S抑制剂，0.1-1000 nM，2-6小时）处理细胞后，用冰冷的PBS洗涤细胞，并在提取缓冲液（0.1 M pH 5.5的乙酸钠、150 mM NaCl、0.1% Triton X-100、2.5 mM DTT、蛋白酶抑制剂）中裂解细胞。裂解液经离心（10,000 g，10分钟，4℃）去除细胞碎片。采用BCA法测定蛋白浓度。在96孔黑色板中，加入50 ug（20-50 uL）细胞裂解液，加入测定缓冲液至90 uL，然后加入10 uL Ac-KQKLR-AMC TFA底物（终浓度10-20 uM）。于37℃孵育1-4小时。荧光强度在激发/发射波长 354/442 nm 处测定。活性值已根据蛋白质浓度进行标准化。为验证特异性，在加入底物前，将平行孔预先与选择性组织蛋白酶 S 抑制剂（例如 10 uM LHVS）孵育 10 分钟；残留活性为非特异性活性。病变组织（例如动脉粥样硬化主动脉、关节炎关节）裂解液中的组织蛋白酶 S 活性也采用类似方法测定。这种细胞/组织检测方法广泛用于药效学 (PD) 研究，以评估组织蛋白酶 S 抑制剂在临床前模型中的靶点结合情况。
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| 动物实验 |
为了从动物模型中测定离体组织活性，小鼠接受组织蛋白酶S抑制剂或载体处理（例如，灌胃，1-30 mg/kg，每日一次，连续7天）。末次给药两小时后，处死小鼠。收集目标组织（例如，脾脏、脊髓、主动脉、皮肤），液氮速冻后储存于-80℃。组织匀浆时，称量组织重量，并在冰冷的裂解缓冲液（0.1 M pH 5.5的乙酸钠、150 mM NaCl、0.5% NP-40、5 mM EDTA、5 mM DTT、蛋白酶抑制剂混合物）中用珠磨机或Dounce匀浆器进行匀浆。匀浆液在4℃下以10,000 g离心10分钟。测定上清液的蛋白质浓度。然后，将50-100 μg蛋白裂解液与Ac-KQKLR-AMC TFA底物（10-20 μM）在96孔板中于37℃孵育2-4小时。读取荧光值。比较处理组和溶剂对照组的组织蛋白酶S活性，并计算离体组织中酶活性的抑制百分比。该离体实验方案对于评估抑制剂是否能充分暴露于组织并靶向结合至关重要。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Ac-KQKLR-AMC TFA 的分子量为 931.05（肽 TFA 盐的精确分子量可能有所不同）。该肽在 DMSO（10-20 mM）和水中（1-2 mg/mL）均具有很高的溶解度。TFA 盐可稳定肽并提高其水溶性。储存：冻干粉末，-20℃ 干燥避光保存。DMSO 复溶溶液（10 mM）在 -80℃ 下可稳定保存 3-6 个月；避免反复冻融。AMC 荧光团在黑暗中稳定；溶液应储存在棕色小瓶中或用铝箔包裹。最大激发波长为 354 nm（紫外区）；发射波长为 442 nm（蓝色）。本产品仅供研究使用，不可用于临床诊断。该底物在酸性缓冲液（pH 4.0-6.0）中稳定，但在中性或碱性pH（>7.5）下可能因AMC不稳定而水解。实验中务必设置不含酶的对照孔以扣除背景荧光。组织蛋白酶S的Km值为5-20 μM；常规检测使用10-20 μM。动力学实验中，需滴定底物浓度（0.5-200 μM）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Ac-KQKLR-AMC TFA 的 CAS 编号为 2237216-84-9。该肽的化学名称为乙酰赖氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸-亮氨酸-精氨酸-AMC。其分子式为 C42H64N12O11（游离肽），另加 TFA 和 H2O。TFA 盐形式常用于商业用途。该化合物也称为 Ac-KQKLR-AMC、组织蛋白酶 S 底物（荧光法）或组织蛋白酶 S 底物（荧光法）。它是组织蛋白酶 S 的一种灵敏且选择性的底物。研究应用包括：筛选用于治疗自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、银屑病、多发性硬化症）、疼痛、癌症转移和动脉粥样硬化的组织蛋白酶 S 抑制剂。该底物可用于酶活性的连续监测（终点或动力学读数）。它不具有细胞渗透性。对于活细胞检测，需要使用细胞可渗透的AMC衍生物（例如，细胞可渗透的荧光底物）。然而，该底物也可按所述方法用于细胞裂解液中。通过高效液相色谱法（HPLC）测定，其纯度通常大于95%。该化合物应按照标准实验室安全规范进行操作；未见异常毒性报道。
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| 参考文献 |
| 分子式 |
C47H69F9N12O15
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|---|---|
| 分子量 |
1213.11
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| 精确质量 |
1212.486
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| CAS号 |
2237216-84-9
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| 相关CAS号 |
Ac-KQKLR-AMC; 1135686-31-5
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| PubChem CID |
178201541
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| 序列 |
Ac-Lys-Gln-Lys-Leu-Arg-{AMC}Ac-KQKLR-{AMC}
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| tPSA |
472
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| 氢键供体(HBD)数目 |
14
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| 可旋转键数目(RBC) |
28
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| 重原子数目 |
83
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| 分子复杂度/Complexity |
1690
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| 定义原子立体中心数目 |
5
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| SMILES |
CC1=CC(=O)OC2=C1C=CC(=C2)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)C.C(=O)(C(F)(F)F)O.C(=O)(C(F)(F)F)O.C(=O)(C(F)(F)F)O
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| InChi Key |
GPFYZPWDELTNTI-DHBALVKUSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C41H66N12O9.3C2HF3O2/c1-23(2)20-32(40(61)51-30(12-9-19-47-41(45)46)36(57)49-26-13-14-27-24(3)21-35(56)62-33(27)22-26)53-38(59)29(11-6-8-18-43)50-39(60)31(15-16-34(44)55)52-37(58)28(48-25(4)54)10-5-7-17-42;3*3-2(4,5)1(6)7/h13-14,21-23,28-32H,5-12,15-20,42-43H2,1-4H3,(H2,44,55)(H,48,54)(H,49,57)(H,50,60)(H,51,61)(H,52,58)(H,53,59)(H4,45,46,47);3*(H,6,7)/t28-,29-,30-,31-,32-;;;/m0.../s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-6-aminohexanoyl]amino]-N-[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-(diaminomethylideneamino)-1-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]pentanediamide;tris(2,2,2-trifluoroacetic acid)
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| 别名 |
Cathepsin S substrate TFA
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 请将本产品存放在密封保护的环境中，避免受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8243 mL | 4.1216 mL | 8.2433 mL | |
| 5 mM | 0.1649 mL | 0.8243 mL | 1.6487 mL | |
| 10 mM | 0.0824 mL | 0.4122 mL | 0.8243 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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