| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Carrier-mediated transport (CMT) systems at the blood-brain barrier (BBB) - nicotinic acid (niacin) is known to be carried to the brain by nicotine receptors. The compound itself is a prodrug that delivers the monosaccharide analogue for metabolic incorporation into sialoglycoproteins. [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
- 用化合物2（50 μM，48小时）处理SH-SY5Y（人神经母细胞瘤）细胞后，通过使用丙炔酰胺-生物素试剂10进行铜催化叠氮-炔环加成生物素化和FITC-亲和素染色的流式细胞术检测，发现细胞表面唾液酸糖蛋白上表达了N-叠氮乙酰基神经氨酸。其掺入水平与非杂交母体化合物1相当。[1]
- 对用化合物2（50 μM，48小时）处理的SH-SY5Y细胞的总细胞裂解液进行远西方印迹分析，结果显示在使用试剂10进行铜催化叠氮-炔环加成后，唾液酸糖蛋白被强效生物素化，表明NeuAz的成功代谢掺入。银染确认了蛋白上样量一致。[1] - 使用MTT法对用化合物2（0-500 μM）处理的SH-SY5Y细胞进行细胞活力研究，结果显示在250 μM浓度下仍有80-85%的细胞存活。Annexin-V/碘化丙啶染色证实其活力与赋形剂对照组相似。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
- 脑组织的代谢聚糖工程： 通过尾静脉对C57BL/6J小鼠静脉注射化合物2（0.26 mmol/kg，相当于化合物1的112 mg/kg，每天一次，连续3天），结果在心脏和脑组织中均检测到携带NeuAz的唾液酸糖蛋白的强效表达（通过铜催化叠氮-炔环加成生物素化后的HRP-亲和素印迹检测）。相比之下，非杂交母体化合物1仅在心脏中表达，而在脑中无表达。在BALB/cByJ小鼠中获得了相似结果。[1]
- 剂量依赖性研究： 以三种浓度（摩尔当量分别相当于化合物1的75、115和150 mg/kg，每天一次，连续3天）静脉注射化合物2的小鼠，在脑中显示出强效表达，并呈现中度的剂量依赖性，这是可饱和的载体介导转运的特征。[1] - 给药次数的影响： 静脉注射化合物2（0.26 mmol/kg，每天一次，连续7天）的小鼠，其脑组织中的生物素化水平与3天治疗组相比显著增加，表明增加给药次数可以克服可饱和的载体介导转运。[1] - 灌注对照： 在组织收获前用PBS进行经心脏灌注，证实脑组织中观察到的NeuAz来源于脑细胞，而非污染的造血细胞。[1] |
| 酶活实验 |
- 用于检测NeuAz的铜催化叠氮-炔环加成生物素化： 将含有NeuAz标记糖蛋白的组织裂解液或细胞裂解液与丙炔酰胺-生物素试剂10进行Cu-AAC反应。反应混合物包含CuSO₄（1 mM）、抗坏血酸钠（5 mM）、THPTA配体（2 mM）和试剂10（20 μM）。反应在室温下进行2-3小时。然后沉淀生物素化蛋白，通过SDS-PAGE分离，转移到膜上，并使用HRP偶联的亲和素进行检测。[1]
- 神经氨酸酶处理： 将来自化合物2处理小鼠的脑和心脏组织裂解液与来自产气荚膜梭菌的神经氨酸酶（0、25、50和100单位）在G1反应缓冲液（50 mM柠檬酸钠，pH 6.0）中于37°C孵育12小时，然后进行Cu-AAC生物素化。神经氨酸酶处理导致生物素化水平随酶浓度增加而降低，证实了NeuAz存在于唾液酸上。[1] |
| 细胞实验 |
- 细胞表面NeuAz表达的流式细胞术： SH-SY5Y细胞用化合物2（50 μM，48小时）处理，收集、固定，用丙炔酰胺-生物素试剂10通过Cu-AAC进行生物素化，并用FITC偶联的亲和素染色。通过流式细胞术测量荧光。观察到强效的NeuAz表达，平均荧光强度与化合物1相当。[1]
- 共聚焦显微镜： 用化合物2（50 μM，48小时）处理的SH-SY5Y细胞被固定，通过Cu-AAC用试剂10生物素化，用AlexaFluor-594偶联的亲和素（红色）染色，并用DAPI（蓝色，细胞核）复染。共聚焦显微镜证实了NeuAz的细胞表面标记。[1] - 细胞裂解液的远西方印迹： 用化合物2（50 μM，48小时）处理的SH-SY5Y细胞被裂解，裂解液用试剂10进行Cu-AAC生物素化。蛋白通过SDS-PAGE分离，转移到膜上，并用HRP-亲和素检测。凝胶的银染作为上样对照。[1] - MTT细胞活力测定： SH-SY5Y细胞用浓度范围为0至500 μM的化合物2处理48小时。加入MTT试剂，在570 nm处测量甲臜吸光度。相对于赋形剂对照计算活细胞百分比。在250 μM浓度下观察到80-85%的细胞活力。[1] - Annexin-V/碘化丙啶凋亡测定： 用化合物2（100和250 μM，48小时）处理的SH-SY5Y细胞用FITC偶联的Annexin-V和碘化丙啶染色，然后通过流式细胞术分析。结果显示与赋形剂对照相比，凋亡没有显著增加。[1] |
| 动物实验 |
- 静脉注射给药： 雄性C57BL/6J或BALB/cByJ小鼠（4-6周龄）用氯胺酮/赛拉嗪（80 mg/kg和10 mg/kg，腹腔注射）麻醉。化合物2溶解在90% DMSO（DMSO:水 = 9:1）中作为储备液（50 mg/mL）。小鼠通过尾静脉注射，每天一次，连续3或7天，剂量为0.17、0.26、0.34和0.69 mmol/kg（相当于化合物1的75、115、150和300 mg/kg）。每组由4-6只小鼠组成。[1]
- 组织收获与处理： 在第4天或第8天，麻醉小鼠并通过颈椎脱臼处死。收获组织（心脏和脑），用冰冷的PBS洗涤，使用匀浆器在15,000 rpm下于PBS中匀浆，并多次洗涤以去除血液残留。沉淀在裂解缓冲液（10 mM Tris，150 mM NaCl，1.0% NP-40，蛋白酶抑制剂混合物，pH 7.4）中裂解。裂解液通过离心（16,000g，30分钟，4°C）澄清，用于蛋白定量和Cu-AAC生物素化。[1] - 经心脏灌注： 在某些实验中，在组织收获前通过经心脏灌注冰冷的PBS（20 mL，20分钟，通过心脏穿刺，经颈静脉流出）来置换血液，以消除血细胞的污染。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
研究指出，血脑屏障上的载体介导转运系统是可饱和的，并且NeuAz表达随浓度增加而适度增加支持了这一特征性机制。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
- 组织病理学： 对化合物2处理小鼠（0.26 mmol/kg，静脉注射，每天一次，连续3天，第4天收获）的肝脏切片进行的独立组织病理学分析显示，与未处理组和赋形剂处理对照组相比，没有可见的变化。[1]
- 血清生化： 用化合物2处理的小鼠血清中的肌酐水平和肝酶活性均在标准范围内。[1] - 行为观察： 在研究期间，用化合物2处理的小鼠未观察到体重减轻或异常行为等不良影响。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- 化合物2是一种碳水化合物-神经活性杂合分子，旨在利用载体介导的转运系统将非天然单糖类似物“搭载”穿过血脑屏障。选择烟酸作为神经活性载体，因为它已知通过烟碱受体被转运到大脑。[1]
- 该化合物是一种前药：全乙酰化基团在细胞内被水解，ManNAz被代谢转化为N-叠氮乙酰基神经氨酸，然后通过唾液酸生物合成途径掺入唾液酸糖蛋白中。[1] - 与在腹腔或静脉注射后在脑中无表达的非杂交母体化合物1不同，化合物2成功地将单糖类似物递送至中枢神经系统，并实现了脑组织的代谢聚糖工程。该策略代表了一种研究脑糖基化的非侵入性工具，并有可能被开发用于脑图谱绘制应用。[1] - 该化合物通过将烟酸通过酯键连接到Ac₄ManNAz的C-1位来合成。选择这个位置是为了创建一个可生物裂解的酯，该酯可以在细胞内被裂解以释放活性单糖。[1] |
| 分子式 |
C20H23N5O10
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|---|---|
| 分子量 |
493.42
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| CAS号 |
2102591-12-6
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| 别名 |
6'Nicotinate Ac4ManNAz; 6'-Nicotinate Ac4ManNAz; Compound 2
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0267 mL | 10.1334 mL | 20.2667 mL | |
| 5 mM | 0.4053 mL | 2.0267 mL | 4.0533 mL | |
| 10 mM | 0.2027 mL | 1.0133 mL | 2.0267 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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