ADC Control Human IgG1-sulfo-SPDB-DM4

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ADC Control Human IgG1-sulfo-SPDB-DM4 是一种抗体药物偶联物 (ADC),可抑制微管蛋白聚合。
ADC Control Human IgG1-sulfo-SPDB-DM4 产品类别: ADCs
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产品描述
ADC Control Human IgG1-sulfo-SPDB-DM4 是一种抗体药物偶联物 (ADC),可抑制微管蛋白聚合。抗体部分为同型对照人 IgG1 kappa 抗体,ADC 毒性分子和连接子部分为 sulfo-SPDB-DM4。
ADC对照品人IgG1-sulfo-SPDB-DM4是一种抗体药物偶联物(ADC),用作研究应用中的同型对照。它由非靶向人IgG1 kappa同型抗体通过可还原的sulfo-SPDB连接子(N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯)与美登素类有效载荷DM4偶联而成。抗体部分不与任何特定靶抗原结合。该对照ADC用于区分抗原特异性抗肿瘤活性与非特异性效应(例如,Fc介导的摄取或连接子不稳定)。它是一种用于ADC开发和验证的研究试剂。
生物活性&实验参考方法
靶点
The control ADC does not have a specific antigen target. The antibody moiety is a human IgG1 kappa isotype control selected to have minimal or no binding to human or mouse tissues. The drug‑linker component (sulfo‑SPDB‑DM4) targets tubulin. DM4 is a potent maytansinoid that binds to tubulin at the rhizoxin binding site, inhibiting microtubule polymerization and causing G2/M cell cycle arrest and apoptosis. The sulfo‑SPDB linker is a reducible disulfide linker designed to release DM4 inside target cells after internalization. However, the lack of targeting means that any activity is non‑specific.
体外研究 (In Vitro)
在体外,ADC对照人IgG1-sulfo-SPDB-DM4用作靶向特异性ADC的阴性对照。在使用抗原阳性癌细胞(例如,表达CanAg的细胞)的细胞毒性试验中,对照ADC(0.01-10 ug/mL)应无显著细胞毒活性,而实验ADC(靶向抗原)则具有高度细胞毒性(IC₅0在ng/mL范围内)。在使用HepG2细胞的MTT试验中,对照ADC在高浓度(>10 ug/mL)下可能由于非特异性摄取(胞饮作用)而显示出一定的毒性,但其效力应显著低于实验ADC。它不用于评估有效载荷的生物活性,而是用作比较剂。
体内研究 (In Vivo)
在体内,对照ADC用作小鼠异种移植模型中的阴性对照。在表达靶抗原的肿瘤异种移植模型中,与载体对照组相比,对照ADC(3-10 mg/kg,静脉注射)应不影响肿瘤生长(TGI<20%)。实验性ADC应显示出显著的抗肿瘤活性(TGI>50%)。这表明实验性ADC的抗肿瘤活性依赖于靶点,而非由连接子-有效载荷的非特异性毒性引起。对照ADC还有助于评估非特异性毒性,例如体重减轻或肝毒性。
酶活实验
体外细胞活力检测(CellTiter-Glo):将抗原阳性癌细胞以 5×103 个细胞/孔的密度接种于 96 孔白色板中。24 小时后,用系列稀释的 ADC 对照人 IgG1-sulfo-SPDB-DM4(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10 ug/mL)处理 96 小时。加入 CellTiter-Glo 试剂并测量发光值。对照 ADC 的 IC₅0 应 >1 ug/mL(或未达到)。与实验性 ADC(靶向特异性)进行比较,其 IC₅0 应 <0.1 ug/mL。对于流式细胞术结合实验,将靶细胞与对照 ADC(1-10 ug/mL)在冰上孵育 30 分钟,洗涤后用抗人 IgG-FITC 染色。对照ADC应不显示结合(MFI值与二抗相似)。实验ADC应显示强结合。
细胞实验
体外稳定性试验:将 ADC 对照品人 IgG1-sulfo-SPDB-DM4 (1 mg/mL) 在 37℃ 下于人血浆中孵育 0、24、48、72 和 96 小时。在每个时间点收集样品,进行 ADC 免疫沉淀,并通过尺寸排阻 HPLC 分析以监测聚集情况。此外,用 DTT 还原后,通过 LC-MS 测定 DM4 的释放量。对照 ADC 在血浆中应至少稳定 72 小时(游离 DM4 释放量 <5%)。体内稳定性试验:将对照 ADC 注射到小鼠体内,并测定血浆 DM4 水平;低水平表明连接子稳定。
动物实验
同型对照验证的一般体内实验方案:将抗原阳性肿瘤细胞皮下接种到雌性NCr nu/nu小鼠(每组n=8)体内。当肿瘤体积达到150-200 mm³时,静脉注射ADC对照人IgG1-sulfo-SPDB-DM4(3或10 mg/kg,单次给药)。对照组注射溶剂(PBS或组氨酸缓冲液)和实验用ADC(3 mg/kg)。每周测量两次肿瘤体积,持续28天。对照ADC应无显著的肿瘤生长抑制(TGI<20%)。实验结束时,收集肿瘤和主要器官进行组织病理学检查。应未观察到显著的毒性反应。对照ADC也不应引起显著的体重下降。
药代性质 (ADME/PK)
ADC对照品人IgG1-sulfo-SPDB-DM4是一种完整的ADC分子(分子量约150 kDa),用于体内研究,需静脉注射给药。其药代动力学(PK)预计与任何人IgG1抗体相似,在小鼠体内的半衰期为4-7天。sulfo-SPDB连接子的设计使其在循环系统中稳定,但在细胞内环境中可被还原。然而,作为对照品,其药代动力学并非主要研究方向。用于研究的对照ADC以PBS无菌溶液的形式提供,短期使用储存于4℃,长期储存于-80℃。避免反复冻融。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
该对照抗体药物偶联物(ADC)毒性可控。在治疗剂量(3-10 mg/kg)下,耐受性良好。较高剂量(>30 mg/kg)可能因DM4有效载荷而引起毒性(例如,体重减轻、骨髓抑制)。该药物无基因毒性。作为研究试剂使用时,只需采取处理生物材料的标准安全防护措施(戴手套、穿实验服)即可。
参考文献

[1]. Discovery and Optimization of HKT288, a Cadherin-6-Targeting ADC for the Treatment of Ovarian and Renal Cancers. Cancer Discov. 2017 Sep;7(9):1030-1045.

其他信息
背景:本品为抗体药物偶联物(ADC)的同型对照,采用磺基-SPDB-DM4连接子-有效载荷。它对于解读ADC疗效研究至关重要,能够帮助研究人员区分特异性的、靶点依赖性效应与非特异性的、Fc介导的或连接子介导的效应。磺基-SPDB连接子是一种可还原的二硫键连接子,在被细胞内吞后(通过硫醇交换)释放DM4。该同型对照抗体为人IgG1 kappa抗体。本品仅供研究使用,不得用于人体治疗。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
外观&性状
Colorless to light yellow liquid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: 本产品在运输和储存过程中需避光(避免光照)。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们