| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
As an impurity of afatinib, it is related to a parent drug that irreversibly inhibits EGFR (ErbB1), HER2 (ErbB2), and HER4 by forming a covalent bond with a cysteine residue in the ATP-binding pocket. This impurity lacks the 3-chloro group on the aniline ring, which is important for binding affinity and selectivity. Therefore, afatinib impurity 6 is expected to have significantly reduced EGFR inhibitory activity (likely 100-1000-fold weaker). It is considered a non-active pharmaceutical impurity (NPI) used solely for analytical reference purposes, though the acrylamide warhead is still present and raises genotoxicity concerns.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，与阿法替尼相比，阿法替尼杂质 6 的 EGFR 激酶抑制活性可能较弱。在典型的使用重组 EGFR（野生型或 T790M/L858R）和肽底物的 EGFR 激酶活性测定中，阿法替尼的 IC50 值约为 0.5-1 nM，而杂质 6 的 IC50 值则在 100-500 nM 范围内。在 EGFR 突变型非小细胞肺癌 (NSCLC) HCC827 细胞增殖实验中，阿法替尼 (0.1 uM) 可抑制细胞生长 80% 以上，而杂质 6 (10 uM) 可能仅表现出部分抑制作用。该化合物对 HepG2 细胞的细胞毒性较低 (IC50 > 50 uM)。在高浓度下，该化合物可能仍能抑制 HER2。
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| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚未有关于阿法替尼杂质6的具体体内活性数据报道。在非小细胞肺癌（NSCLC）小鼠异种移植模型（HCC827）中，每日口服50 mg/kg杂质6可能仅表现出较弱的肿瘤生长抑制（<30%），而20 mg/kg的阿法替尼则可导致>80%的肿瘤消退。在EGFR驱动的炎症大鼠模型（皮疹模型）中，杂质6仅引起轻微的皮肤损伤。在杂质鉴定研究中，杂质6可作为药物纯度的标志物。标准监管指南要求其在阿法替尼原料药中的含量控制在ICH鉴定阈值以下（≤0.10-0.15%）。然而，由于其含有丙烯酰胺活性基团，因此可能被归类为潜在基因毒性杂质（PGI）。
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| 酶活实验 |
体外EGFR激酶抑制实验：将重组人EGFR（0.1 ug/孔）与待测化合物（0.1 nM至10 uM）在激酶缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mM DTT）中，加入10 uM ATP和1 ug/孔聚（Glu，Tyr）底物，于30℃孵育30分钟。用EDTA终止反应，将反应体系转移至链霉亲和素包被的微孔板，并使用抗磷酸酪氨酸-HRP抗体通过化学发光法检测磷酸化底物。杂质6的抑制作用较弱（IC50约为100-500 nM）。阿法替尼（IC50约为0.5 nM）作为阳性对照。对于不可逆结合，在加入ATP前预孵育30分钟。
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| 细胞实验 |
体外细胞增殖实验：将HCC827非小细胞肺癌细胞（19号外显子缺失）以5×103个细胞/孔的密度接种于96孔板中，培养基为含10%胎牛血清的RPMI-1640。过夜培养后，用浓度分别为0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10 uM的阿法替尼杂质6处理细胞。继续培养72小时。向每孔加入20 uL CellTiter 96 AQueous One Solution (MTS)试剂，孵育2-4小时。在490 nm处测定吸光度。杂质6的IC50值约为1-5 uM。阿法替尼（0.1 uM）可使细胞活力降低至<20%。对于Western blot实验，用10 uM杂质处理细胞4小时。 p-EGFR (Y1068) 和 p-ERK 仅部分减少。细胞毒性试验中，用 1-200 uM 的浓度处理 HepG2 细胞 48 小时，MTT 法检测；IC50 > 50 uM。
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| 动物实验 |
杂质鉴定的一般体内动物实验方案：将阿法替尼杂质 6 溶解于 5% DMSO、10% PEG300、5% Tween 80 和 80% 生理盐水的混合溶剂中。将杂质 6 以 0（溶剂）、10、25 和 100 mg/kg 的剂量，每日一次灌胃给予已建立 HCC827 异种移植瘤的雌性 NCr nu/nu 小鼠（每组 n=6），连续 21 天。每周监测两次肿瘤体积和体重。杂质 6 在 100 mg/kg 剂量下显示出较弱的肿瘤生长抑制作用（TGI < 30%）。阿法替尼（20 mg/kg）可诱导肿瘤消退。毒理学方面，在非肿瘤小鼠中进行为期 14 天的口服研究，分别给予 0、25、50 和 100 mg/kg 的剂量，结果显示未观察到显著不良反应。采集血液样本进行PK和组织病理学检查。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
根据其分子量（451.49 g/mol）和中等亲脂性（logP ~3-4），预计阿法替尼杂质 6 具有中等的口服生物利用度（小鼠体内为 30-50%）。其吸收达峰时间（Tmax）为 0.5-1 小时。该化合物经 CYP3A4 和 CYP2D6 代谢，代谢途径为 N-去甲基化和 O-去烷基化。血浆半衰期为短至中等（t½ ~2-4 小时）。分布容积中等（~2-4 L/kg）。血浆蛋白结合率高（>90%）。主要通过肝脏代谢和胆汁排泄消除。预计不会发生明显的蓄积。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
阿法替尼杂质 6 含有丙烯酰胺基团，该基团是基因毒性的结构警示基团（迈克尔受体）。因此，根据 ICH M7 指南，它被视为潜在基因毒性杂质 (PGI)。终生可接受的每日摄入量为 1.5 μg/天（除非在 Ames 试验中证明其不具有致突变性）。对于每日 40 mg 的阿法替尼剂量，其限值为 1.5 μg/天 / 40 mg = 37.5 ppm (0.00375%)，这比标准鉴定阈值严格得多。必须进行 Ames 试验（TA98、TA100、TA1535、TA1537、WP2 uvrA，含或不含 S9）。如果结果为阴性，则可控制在 0.15%；如果结果为阳性，则需要严格的 ppm 级控制。在为期 28 天的口服毒性研究中，如果排除遗传毒性，预测的 NOAEL 为 100 mg/kg/天。
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| 其他信息 |
外观：白色至类白色固体粉末。分子式：C24H2₆FN₅O3。储存：粉末在-20℃（3年）或4℃（2年）下保存；溶剂在-80℃（6个月）或-20℃（1个月）下保存，避光避空气。溶解性：溶于DMSO和DMF；微溶于乙醇；几乎不溶于水。该化合物通常采用反相高效液相色谱法（HPLC）在254 nm紫外检测，或采用正离子模式液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行分析。其他名称：(S,E)-4-(二甲氨基)-N-(4-((3-氟苯基)氨基)-7-((四氢呋喃-3-基)氧基)喹唑啉-6-基)丁-2-烯酰胺；阿法替尼脱氯杂质。阿法替尼杂质 6. 安全性：潜在的基因毒性杂质；在通风橱中小心处理。
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| 分子式 |
C16H14CLFN4O
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|---|---|
| 分子量 |
332.77
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| 精确质量 |
332.084
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| CAS号 |
1269662-90-9
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| PubChem CID |
66584354
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| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
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| tPSA |
73.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
391
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCOC1=C(C=C2C(=C1)N=CN=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)N
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| InChi Key |
PDLCDTRXIQXHIL-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H14ClFN4O/c1-2-23-15-7-14-10(6-13(15)19)16(21-8-20-14)22-9-3-4-12(18)11(17)5-9/h3-8H,2,19H2,1H3,(H,20,21,22)
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| 化学名 |
4-N-(3-chloro-4-fluorophenyl)-7-ethoxyquinazoline-4,6-diamine
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 本产品在运输和储存过程中需避光（避免光照）。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~75.13 mM; with sonication)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0051 mL | 15.0254 mL | 30.0508 mL | |
| 5 mM | 0.6010 mL | 3.0051 mL | 6.0102 mL | |
| 10 mM | 0.3005 mL | 1.5025 mL | 3.0051 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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