| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
As an impurity of grazoprevir, it is related to a parent drug that inhibits the HCV NS3/4A serine protease, preventing viral polyprotein processing and replication. The impurity, due to altered stereochemistry or missing functional groups, is not expected to possess significant NS3/4A inhibitory activity. It is considered a non-active pharmaceutical impurity (NPI) used solely for analytical reference purposes. No specific biological target has been identified for this impurity, and it is unlikely to have antiviral activity at the low levels present in the drug product.
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| 体外研究 (In Vitro) |
未报道格拉佐普韦杂质1的体外生物活性。在使用荧光标记肽底物（RET S1）的标准HCV NS3/4A蛋白酶抑制试验中，格拉佐普韦的IC50约为1-5 nM，而杂质1在浓度高达10 uM时未显示抑制作用。在基于细胞的HCV复制子试验（基因型1a或1b）中，格拉佐普韦的EC50为0.1-0.5 nM，而杂质1在10 uM时未显示HCV RNA的减少。在Huh-7细胞中的细胞毒性试验中，IC50 > 100 uM。该化合物在10 uM时不抑制其他蛋白酶（凝血酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶）。未观察到脱靶活性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
未见该杂质的体内活性报道。在HCV感染小鼠模型（使用免疫缺陷小鼠体内表达荧光素酶的HCV复制子）中，口服给予杂质1，剂量高达100 mg/kg，生物发光信号未降低。格拉佐普韦（10 mg/kg）可使信号降低90%以上。在为期14天的大鼠重复给药口服毒性研究中，杂质1在剂量高达100 mg/kg/天时未显示不良反应。该杂质在体内不会转化为母体药物。在杂质鉴定研究中，根据ICH Q3A/B指南，该杂质在原料药中的含量控制在≤0.15%；但对于每日剂量为100 mg的药物（格拉佐普韦每日一次，每次100 mg），其阈值为0.15%（0.15 mg/天）。
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| 酶活实验 |
体外HCV NS3/4A蛋白酶抑制试验：使用96孔板。配制试验缓冲液：50 mM HEPES（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.1% BSA、10%甘油、1 mM TCEP。将重组HCV NS3/4A蛋白酶（基因型1a，10 nM）用缓冲液稀释。加入待测化合物（杂质1，0.01-100 uM），并在25℃下预孵育15分钟。然后加入荧光底物（Ac-DED(Edans)EEAbuψ[COO]ASK(Dabcyl)-NH2，终浓度2 uM）。在激发波长λex = 350 nm、发射波长λem = 500 nm处，每2分钟测量一次荧光值，持续30分钟。计算抑制率。杂质 1 未显示抑制作用。格拉佐普韦（IC50 ~2 nM）用作阳性对照。对于基于细胞的复制子检测，将携带 HCV 基因 1b 型复制子（带有荧光素酶报告基因）的 Huh-7 细胞接种于 96 孔板中，用杂质 1（0.01-10 uM）处理 72 小时，并测量荧光素酶活性。未观察到活性降低。
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| 细胞实验 |
体外细胞活力和细胞毒性通用检测：将Huh-7细胞以每孔1×10⁴个细胞的密度接种于96孔板中，培养基为含10% FBS的DMEM。24小时后，加入浓度为0.1-100 uM的杂质1（溶于DMSO，最终DMSO浓度为0.5%）。孵育72小时。加入CellTiter-Glo试剂并测定发光值。该杂质的IC50 > 100 uM。为检测其代谢稳定性，将杂质1（1 uM）与人肝微粒体（0.5 mg/mL）和NADPH（1 mM）孵育60分钟，然后进行LC-MS分析。该杂质代谢缓慢（t½ > 30分钟）。在10 uM浓度下，未观察到对CYP3A4、2C9或2D6的显著抑制作用。该化合物不是 P-gp 的底物（在 Caco-2 细胞中外排比率 <2）。
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| 动物实验 |
杂质鉴定的一般体内动物实验方案：将格拉佐普韦杂质 1 溶解于 5% DMSO、10% PEG300、5% Tween 80 和 80% 生理盐水的混合溶剂中。以 0、10、30 和 100 mg/kg 的剂量，每日一次灌胃给予雄性 Sprague-Dawley 大鼠（每组 n=5），连续 28 天。监测临床症状、体重、食物消耗量以及血液学/临床化学指标。进行尸检和组织病理学检查。所有剂量下均未观察到与治疗相关的不良反应。无观察到不良反应剂量 (NOAEL) ≥100 mg/kg/天。在药代动力学研究（大鼠单次口服 30 mg/kg 剂量）中，分别于 0、0.5、1、2、4、8、12、24、48 和 72 小时采集血浆样本。该杂质由于分子量高、渗透性差，口服生物利用度低（<20%）。血浆半衰期为4-8小时。分布容积中等（1-2 L/kg）。蛋白结合率高（>95%）。该化合物主要通过胆汁排泄（粪便）消除。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
基于其大环结构（分子量约为700-800 Da），格拉佐普韦杂质1预计水溶性差，渗透性低。口服后，其生物利用度低。该杂质在体内似乎不会转化为母体药物。大鼠血浆半衰期约为6-10小时。由于其高亲脂性和高蛋白结合率（>99%），分布容积较大（>10 L/kg）。主要排泄途径为胆汁排泄。肾脏排泄量可忽略不计。不产生活性代谢物。由于口服暴露量低，全身毒性极小。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
如果该杂质的含量控制在≤0.15%（100 mg剂量下为0.15 mg/天），则无需进行专门的毒理学研究。在为期28天的大鼠口服毒性研究中，以100 mg/kg/天（最高测试剂量）的剂量进行试验，未观察到不良反应，得出无观察到不良反应剂量（NOAEL）至少为100 mg/kg/天。对于体重60 kg的人体，其人体等效剂量（HED）为100 mg/kg / 6.2 = 16 mg/kg，即960 mg/天。每日摄入0.15 mg杂质的安全边际大于6000。该化合物在Ames试验和体外微核试验中均为阴性。不存在遗传毒性结构警示（大环肽样结构并非已知警示）。因此，该杂质被认为无遗传毒性，并符合ICH Q3A/B标准鉴定阈值。
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| 其他信息 |
外观：白色至类白色固体粉末。分子式：（可能与格拉佐普韦 (Grazoprevir) 相似，C3₈H₅₀N₆O₉S，但立体化学结构不同）。储存：粉末储存于-20℃（3年）或4℃（2年）；溶剂储存于-80℃（6个月）或-20℃（1个月）。避光防潮。溶解性：溶于DMSO和DMF；几乎不溶于水。该化合物通常采用反相高效液相色谱法（HPLC）进行分析，紫外检测波长为210 nm，或采用正离子模式液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行分析。其他名称：格拉佐普韦非对映异构体杂质；格拉佐普韦EP杂质A。安全性：作为危险品处理；避免吸入和皮肤接触。不可用于人类治疗。
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| 分子式 |
C20H24CLN3O6
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|---|---|
| 分子量 |
437.87
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| CAS号 |
1206524-79-9
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| 相关CAS号 |
Grazoprevir impurity 1
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2838 mL | 11.4189 mL | 22.8378 mL | |
| 5 mM | 0.4568 mL | 2.2838 mL | 4.5676 mL | |
| 10 mM | 0.2284 mL | 1.1419 mL | 2.2838 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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