| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Biotin-(Oaa)3-epoxomicin targets the proteasome, specifically the catalytic beta subunits that possess an N-terminal threonine residue essential for proteolytic activity. The epoxomicin warhead forms a covalent, irreversible morpholino adduct with the active site threonine (Thr1) of beta1, beta2, beta5 in the constitutive proteasome, and of LMP7 (beta5i), MECL1 (beta2i), and LMP2 (beta1i) in the immunoproteasome. The three Oaa (amino-oxyacetic acid) linkers provide a hydrophilic spacer that reduces steric hindrance and improves accessibility to the active site. The biotin moiety enables high-affinity binding to streptavidin, facilitating pull-down of labeled proteasome subunits. This probe allows researchers to study which proteasome subunits are catalytically active in a given cell type or condition. It operates within the ubiquitin-proteasome pathway and is a tool for investigating antigen presentation and proteasome biology.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，生物素-(Oaa)3-环氧霉素不具有传统的药理活性，例如IC50值；其活性取决于其特异性共价标记活性蛋白酶体亚基的能力。在0.1-10 uM的浓度下，当与细胞裂解液或纯化的20S蛋白酶体在37degC下孵育30-60分钟时，该探针可与活性亚基结合。标记的亚基可被链霉亲和素-琼脂糖珠捕获，洗脱后，可通过质谱（LC-MS/MS）或使用亚基特异性抗体的Western blot进行鉴定。该探针已被用于证明其可选择性标记经干扰素-γ处理的细胞中的免疫蛋白酶体亚基LMP7、MECL1和Z，干扰素-γ可诱导免疫蛋白酶体的表达。该探针不会标记非活性亚基或脱靶蛋白。过量的未标记环氧霉素可竞争性抑制结合，从而证实了其特异性。由于探针用于细胞裂解液中，通常不检测其细胞毒性。DMSO用作溶剂（在裂解液中的最终浓度≤0.1%）。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无生物素-(Oaa)3-环氧霉素的体内活性数据。该探针专为体外下拉实验设计，不适用于活体动物的治疗或疗效研究。虽然理论上可用于体内标记蛋白酶体，但生物素标签可能导致快速清除和非特异性结合，此类应用并非标准方法。因此，目前尚无体内动物实验方案或疗效数据。仅供研究使用。
|
| 酶活实验 |
对于非细胞（无细胞）蛋白酶体标记和下拉实验，使用纯化的20S蛋白酶体（来自人红细胞或兔肌肉）。配制50 uL反应混合物，其中包含1-5 ug蛋白酶体，溶于测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、20 mM KCl、5 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% NP-40）。从1 mM DMSO储备液中加入生物素-(Oaa)3-环氧霉素，使其最终浓度分别为0.1、0.5、1、5和10 uM（DMSO ≤1%）。于37℃孵育60分钟。然后加入10 uL链霉亲和素-琼脂糖珠（预先用测定缓冲液平衡），并在4℃旋转孵育2小时。通过离心（500×g，2分钟）收集磁珠，并用含0.1% Triton X-100的500 uL检测缓冲液洗涤4次，再用PBS洗涤2次。加入30 uL 2× SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸5分钟洗脱结合的蛋白质。将洗脱液进行12% SDS-PAGE电泳分离。检测时，可使用考马斯亮蓝染色或转移至PVDF膜，用抗蛋白酶体亚基抗体（例如，抗β5、抗LMP7、抗MECL1）进行Western blot分析。质谱鉴定时，将洗脱的蛋白质用胰蛋白酶消化，并用LC-MS/MS进行分析。阴性对照：仅含DMSO。特异性控制：在加入生物素-(Oaa)3-环氧霉素之前，先用 10 倍过量的未标记环氧霉素预孵育蛋白酶体 30 分钟。
|
| 细胞实验 |
对于体外细胞免疫沉淀实验，将细胞（例如 HeLa、B16 黑色素瘤或 293T 细胞）培养于合适的培养基中。为诱导免疫蛋白酶体的表达，可将细胞用 IFN-γ (100 U/mL) 处理 48 小时。收集细胞，用 PBS 洗涤，并在 4℃ 下用裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS、1× 蛋白酶抑制剂混合物）裂解 30 分钟。裂解液经离心（14,000×g，15 分钟，4℃）澄清。采用 BCA 法测定蛋白浓度。每次下拉实验中，将 500-1000 ug 裂解液蛋白溶于 500 uL 体系中，与浓度为 1-10 uM 的 Biotin-(Oaa)3-epoxomicin（DMSO 储备液，最终 DMSO 浓度 ≤0.1%）于 37℃ 下轻柔摇动孵育 1-2 小时。然后加入 20 uL 预先洗涤的链霉亲和素-琼脂糖珠，于 4℃ 下旋转孵育过夜。用 500 uL 裂解缓冲液洗涤珠子 5 次，再用 PBS 洗涤 2 次。用 SDS-PAGE 上样缓冲液煮沸洗脱结合的蛋白。洗脱液按上述方法进行 Western blot 或 LC-MS/MS 分析。对照样品：仅含 DMSO；与 10 倍过量的游离 epoxomicin 竞争。该方案可用于鉴定具有活性且可被探针结合的蛋白酶体亚基。
|
| 动物实验 |
不适用。生物素-(Oaa)3-环氧霉素不用于体内动物研究。它是一种体外生化探针，用于从细胞裂解液或纯化的蛋白酶体中进行下拉实验。未进行或报告任何动物给药、疗效或毒理学研究。仅供研究使用。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
不适用。生物素-(Oaa)3-环氧霉素并非候选药物；其药代动力学参数尚未测定。它仅用于试管实验。冻干粉末应在-20℃下保存，最长可达3年，并需避光防潮。该化合物可溶于DMSO（例如，10 mM）。溶解后，分装后于-80℃保存，最长可达1年，避免反复冻融。分子量：1078.45 g/mol。与生物素-环氧霉素相比，延长的Oaa连接基团提高了其亲水性。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无生物素-(Oaa)3-环氧霉素的毒性数据。在下拉实验所用的浓度（1-10 μM）下，预计不会出现急性毒性。然而，环氧霉素是一种强效的蛋白酶体抑制剂，如果被细胞内吞，则可能对细胞产生细胞毒性。生物素化形式如果用于活细胞给药，也可能抑制蛋白酶体，但这并非本产品的预期用途。应遵循标准的实验室安全预防措施：避免吸入、摄入和皮肤/眼睛接触；使用个人防护装备（手套、实验服、护目镜）；在通风橱内操作。仅供研究使用，不得用于人体。请根据当地危险废物处理法规处置废弃物。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CAS号：247068-92-4。又称化合物13。分子式：C54H95N9O11S，分子量1078.45。序列：生物素-[Oaa]-[Oaa]-[Oaa]-IIT-[Leu((2R)-2-甲基环氧乙烷基)]，其中Oaa为氨基氧乙酸。纯度：HPLC纯度通常>95%。储存：粉末，-20℃保存。溶解性：DMSO。该探针用于蛋白酶体亚基的亲和纯化，特别是免疫蛋白酶体亚基LMP7、MECL1和Z。仅供研究使用。不可用于人体。
|
| 分子式 |
C54H95N9O11S
|
|---|---|
| 分子量 |
1078.45
|
| 精确质量 |
1077.687
|
| CAS号 |
247068-92-4
|
| PubChem CID |
177746373
|
| 序列 |
Biotin-{Oaa}-{Oaa}-{Oaa}-Ile-Ile-Thr-{Leu((2R)-2-methyloxiranyl)}Biotin-{Oaa}-{Oaa}-{Oaa}-IIT-{Leu((2R)-2-methyloxiranyl)}
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
|
| tPSA |
311
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
39
|
| 重原子数目 |
75
|
| 分子复杂度/Complexity |
1880
|
| 定义原子立体中心数目 |
11
|
| SMILES |
CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)[C@]1(CO1)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)N(C)C(=O)CCCCCNC(=O)CCCCCNC(=O)CCCCCNC(=O)CCCC[C@H]2[C@@H]3[C@H](CS2)NC(=O)N3
|
| InChi Key |
TWHRMHRNYSDMAU-LLLMMZAZSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C54H95N9O11S/c1-10-35(5)45(50(70)61-46(37(7)64)51(71)58-38(31-34(3)4)49(69)54(8)33-74-54)60-52(72)48(36(6)11-2)63(9)44(68)27-17-14-22-30-56-42(66)25-15-12-20-28-55-41(65)24-16-13-21-29-57-43(67)26-19-18-23-40-47-39(32-75-40)59-53(73)62-47/h34-40,45-48,64H,10-33H2,1-9H3,(H,55,65)(H,56,66)(H,57,67)(H,58,71)(H,60,72)(H,61,70)(H2,59,62,73)/t35-,36-,37+,38-,39-,40-,45-,46-,47-,48-,54+/m0/s1
|
| 化学名 |
(2S,3S)-2-[[(2S,3S)-2-[6-[6-[6-[5-[(3aS,4S,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]hexanoylamino]hexanoylamino]hexanoyl-methylamino]-3-methylpentanoyl]amino]-N-[(2S,3R)-3-hydroxy-1-[[(2S)-4-methyl-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]-3-methylpentanamide
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 100 mg/mL (~92.73 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9273 mL | 4.6363 mL | 9.2726 mL | |
| 5 mM | 0.1855 mL | 0.9273 mL | 1.8545 mL | |
| 10 mM | 0.0927 mL | 0.4636 mL | 0.9273 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RA183
RA190-PEG1-NH2
RA183-CO-C6-NHCO-NH-Boc
Isomoreollic acid
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
