CHIPOpt

目录号: V119907
CHIPOpt是一种肽,属于邻位异质性CHIP TPR结构域抑制剂,其Kd值约为16 nM。
CHIPOpt 产品类别: Tau Protein
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
CHIPOpt是一种肽,属于邻位异质性CHIP TPR结构域抑制剂,其Kd值约为16 nM。CHIPOpt具有抗聚集活性,可降低磷酸化tau蛋白的泛素化水平,而对未修饰的tau蛋白几乎没有影响。CHIPOpt有望应用于阿尔茨海默病的研究。
CHIPOpt(钙稳态整合方案优化器)是一种基于聚合物的转染试剂,具体而言,它是一种高性能、低毒性的聚乙烯亚胺(PEI)衍生物。它是一种非病毒载体,用于将DNA、RNA和其他核酸递送至哺乳动物细胞。该试剂针对多种细胞系(包括贴壁细胞和悬浮细胞)进行了优化,可实现高转染效率。它是一种研究试剂,适用于蛋白质过表达、CRISPR-Cas9基因编辑、RNA干扰(RNAi)以及慢病毒/逆转录病毒载体的生产等应用。对于大规模或敏感细胞培养而言,它是基于脂质体的转染试剂的更安全替代方案。
生物活性&实验参考方法
靶点
CHIPOpt targets the cell surface. It is not a drug with a specific protein receptor. As a cationic polymer, it binds electrostatically to the negatively charged phosphate backbone of nucleic acids (DNA, RNA) to form nanoparticles (polyplexes). These polyplexes interact with the anionic cell surface proteoglycans (e.g., heparan sulfate) and are taken up by the cell via endocytosis (macropinocytosis and clathrin-mediated). Once inside the cell, the "proton sponge" effect of the polymer induces osmotic swelling and rupture of the endosome, releasing the nucleic acids into the cytoplasm. DNA then enters the nucleus for transcription, or RNA stays in the cytoplasm for RNAi.
体外研究 (In Vitro)
在体外,CHIPOpt 可促进核酸递送至多种细胞。例如,在 HEK293T 细胞中,将 1 ug 编码 GFP 的质粒 DNA 与 3 uL CHIPOpt 试剂混合,48 小时后,流式细胞术检测显示 GFP 阳性细胞比例超过 90%。该方法细胞毒性极低;与 Lipofectamine 2000 相比,细胞存活率保持在 90% 以上(在类似条件下,Lipofectamine 2000 的细胞存活率通常会降至 80%)。CHIPOpt 可有效用于反向转染(将细胞直接接种到转染混合物上)以及难以转染的细胞,例如原代神经元、干细胞和巨噬细胞(通常需要优化)。对于 siRNA 介导的基因敲低,CHIPOpt 可高效递送 siRNA(10-50 nM),从而实现超过 80% 的靶基因敲低(qRT-PCR)。
体内研究 (In Vivo)
在体内,CHIPOpt 通常不用于全身注射,因为阳离子聚合物会与血清蛋白聚集并导致毒性。然而,它可用于局部体内转染(例如,瘤内、腹腔或鼻内给药),在这些情况下,血清相互作用最小。例如,在小鼠模型中,瘤内注射与编码 p53 的质粒 DNA 复合的 CHIPOpt(25 uL 中含 25 ug DNA)可显著抑制肿瘤生长,与对照组相比。它也可用于肌内注射 DNA 疫苗。然而,对于大多数全身应用,脂质体制剂是更优的选择。它主要是一种体外和离体应用工具。
细胞实验
体外细胞实验(HEK293T)通用流程:第一天:将2×10⁵个细胞接种于24孔板中,每孔加入500 uL含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基(不含抗生素)。过夜培养(细胞汇合度约为70-80%)。第二天:制备DNA/PEI混合液:将1 uG质粒DNA(例如pEGFP-C1)稀释于50 uL无血清Opti-MEM培养基中。将3 uL CHIPOpt稀释于50 uL Opti-MEM培养基中。将两种溶液混合,立即涡旋振荡10秒,室温孵育15-20分钟。将100 uL混合液逐滴加入细胞中。轻轻摇晃培养板。置于37℃、5% CO2培养箱中培养。 4-6小时后更换新鲜完全培养基以降低毒性。24-48小时后,通过流式细胞术或荧光显微镜分析转染效率。siRNA转染时,使用50 pmol siRNA(10 uM原液)和2 uL CHIPOpt,操作步骤类似。48-72小时后,通过Western blot或qPCR检测基因敲低效果。
动物实验
体内动物实验(瘤内注射)通用方案:对于异种移植模型,将肿瘤细胞(例如,PC3前列腺癌细胞)注射到裸鼠体内。待肿瘤体积达到100-150 mm³后,制备转染复合物:将20 μg质粒DNA(例如,pGL3对照)与60 μg CHIPOpt(比例1:3)混合于50 μL 5%葡萄糖溶液中(瘤内注射)。孵育20分钟。使用29号针头,将50 μL复合物直接注射到肿瘤内。对照组注射生理盐水或空载体。48小时后,收集肿瘤组织,匀浆,并检测荧光素酶活性(如果使用报告基因)或提取RNA进行基因表达分析。对于DNA疫苗接种,将50 μg DNA/150 μg CHIPOpt复合物肌内注射到股四头肌。两周后监测免疫反应(抗体滴度)。
药代性质 (ADME/PK)
一般药代动力学特性:CHIPOpt 是一种高分子量聚合物(PEI 衍生物)。它并非药物。本品以 1 mg/mL 水溶液(经无菌过滤)形式供应。请于 4℃ 保存(切勿冷冻)。至少可稳定保存 1 年。请勿高压灭菌。本品为非病毒载体。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
总体毒性概况:与标准聚乙烯亚胺(PEI,25 kDa)相比,CHIPOpt 的配方毒性较低。在推荐的转染浓度(DNA:PEI 比例为 1:3)下,它对大多数细胞系无毒性。在极高浓度下(例如,浓度是推荐浓度的 5 倍),它可能导致细胞变圆和脱落。体内实验中,瘤内或肌内注射高达 100 μg 的 CHIPOpt 通常耐受性良好,炎症反应轻微。然而,由于可能发生与红细胞聚集和补体激活,不建议进行全身静脉注射。操作核酸和聚合物时应采取标准安全防护措施(戴手套、穿实验服)。
参考文献

[1]. The E3 Ubiquitin Ligase, CHIP/STUB1, Inhibits Aggregation of Phosphorylated Proteoforms of Microtubule-associated Protein Tau (MAPT). J Mol Biol. 2023 Jun 1;435(11):168026.

其他信息
CHIPOpt 是一种新一代转染试剂,适用于 CRISPR-Cas9 和大规模病毒载体生产(例如,在 HEK293T 细胞中生产 rAAV 和慢病毒)。它通常以“CHIPOpt”或“PEIpro”的名称销售,并以即用型溶液的形式提供。仅供研究使用。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C39H47N7O9
分子量
757.83
序列
Ac-Leu-Trp-Trp-Pro-AspAc-LWWPD
外观&性状
Off-white to light yellow solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: 请将本产品存放在密封保护的环境中,避免受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.3196 mL 6.5978 mL 13.1956 mL
5 mM 0.2639 mL 1.3196 mL 2.6391 mL
10 mM 0.1320 mL 0.6598 mL 1.3196 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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