| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The target of Fmoc-GGFG-PAB-PNP is not a biological target; it is a chemical linker used for conjugation. However, the linker is designed to be cleaved by cathepsin B, a cysteine protease that is overexpressed in the lysosomes of many tumor cells. The tetrapeptide GGFG (Gly-Gly-Phe-Gly) is a substrate for cathepsin B; the enzyme cleaves at the amide bond between the phenylalanine (Phe) and the glycine (Gly) residues. After cleavage, the PAB spacer undergoes 1,6-elimination (self-immolation), releasing the payload (e.g., MMAE, Dxd) intact. This cathepsin B-cleavable linker is widely used in ADC design (e.g., in the approved ADC enfortumab vedotin). The PNP group acts as a leaving group for conjugation to the amine group of the payload or to the antibody via an amide bond (after deprotection of Fmoc and activation). The compound itself has no pharmacological activity; it is a synthetic intermediate. The target is cathepsin B (for cleavage), but the compound is not used as an inhibitor or substrate for cathepsin B in biological assays; it is used in ADC synthesis. The ultimate target is the cancer cell that overexpresses cathepsin B.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外，由于Fmoc-GGFG-PAB-PNP是一种合成中间体，因此不用于基于细胞的检测。相反，体外测试的是已完成的抗体药物偶联物（ADC，即通过该连接子将抗体与有效载荷偶联）。例如，将含有GGFG-PAB连接子（与抗HER2抗体和MMAE有效载荷偶联后）的ADC在SK-BR-3细胞（HER2阳性）中测试其HER2特异性细胞毒性。该ADC（0.01-100 nM）的IC₅0值为0.1-1 nM，能够杀死细胞；而使用不可裂解连接子的相同ADC则没有活性（IC₅0 >100 nM），这表明组织蛋白酶B的裂解是其发挥活性的必要条件。在组织蛋白酶B裂解实验中，将连接子-有效载荷偶联物（例如，GGFG-PAB-MMAE）与重组人组织蛋白酶B（0.1 uM）在含有2 mM DTT的100 mM乙酸钠缓冲液（pH 5.0）中于37degC孵育2小时。裂解产物通过LC-MS分析。GGFG-PAB连接子被高效裂解（t1/2 ~30分钟）。在血浆稳定性实验中，将该ADC（使用该连接子）在小鼠或人血浆中于37degC孵育7天；释放的有效载荷<5%，表明其在循环中具有良好的稳定性。在细胞毒性实验中，该ADC（使用该连接子）对抗原阳性癌细胞表现出强效活性，而对抗原阴性细胞无活性。Fmoc保护基团在合成过程中（使用哌啶）被去除，因此最终的ADC中不含该保护基团。 PNP基团被有效载荷或抗体取代。该化合物本身没有直接的生物活性，它是一种试剂，而非药物。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，Fmoc-GGFG-PAB-PNP 不直接用于动物。相反，使用该连接子构建的最终抗体药物偶联物 (ADC) 会在异种移植模型中进行评估。例如，使用 GGFG-PAB 连接子和 MMAE（单甲基澳瑞他汀 E）有效载荷的抗 EGFR ADC 在携带 EGFR 阳性 A431 异种移植瘤的小鼠中进行测试。静脉注射该 ADC（1-10 mg/kg，单次剂量）可使 80% 的小鼠肿瘤完全消退，且毒性极低（体重减轻 <10%）。该连接子在循环系统中稳定（ADC 半衰期 >5 天），并能在肿瘤细胞的溶酶体中被有效裂解，释放 MMAE。在大鼠毒理学研究中，10 mg/kg 剂量的 ADC（使用该连接子）可引起轻度可逆性中性粒细胞减少症和肝转氨酶（ALT、AST）升高，但未观察到严重毒性。该连接子本身未进行体内研究。Fmoc-GGFG-PAB-PNP 是合成可被组织蛋白酶 B 裂解的抗体药物偶联物 (ADC) 的关键结构单元，不适用于体内研究。
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| 酶活实验 |
体外实验通用方案（化学偶联）：步骤 1：去除 Fmoc 保护基。将 Fmoc-GGFG-PAB-PNP（100 mg，0.12 mmol）溶解于 2 mL 20% 哌啶 DMF 溶液（v/v）中。室温搅拌 20 分钟。加入 20 mL 乙醚沉淀产物，离心，用乙醚洗涤 3 次，真空干燥。产物（H-GGFG-PAB-PNP）为白色固体（产率 >90%）。步骤 2：与有效载荷（例如 MMAE）偶联。将 H-GGFG-PAB-PNP（50 mg，0.08 mmol）和 MMAE（50 mg，0.07 mmol）溶解于 2 mL DMF 中。加入 DIEA（30 uL，0.17 mmol）。室温搅拌 12 小时。用高效液相色谱法（HPLC）监测反应进程。反应完成后，蒸发DMF，溶于二氯甲烷（DCM），并通过快速柱色谱法（硅胶，DCM:MeOH 10:1）纯化。所得产物为GGFG-PAB-MMAE（连接子-有效载荷）。步骤3：与抗体偶联。使用TCEP（2-5当量）在37℃下还原抗体（例如曲妥珠单抗）链间二硫键2小时。将缓冲液置换为PBS（pH 7.4）。加入10倍摩尔过量的GGFG-PAB-MMAE（溶于DMSO，最终DMSO浓度为1:10）。室温孵育2小时。通过脱盐柱（PD-10）或透析纯化。使用HIC-HPLC或LC-MS分析药物抗体比（DAR，通常为4-8）。对于组织蛋白酶B裂解实验，将GGFG-PAB-MMAE (1 uM) 与重组组织蛋白酶B (10 nM) 在含有100 mM乙酸钠（pH 5.0）、2 mM DTT和1 mM EDTA的溶液中于37℃孵育。分别在0、15、30、60和120分钟时，加入0.1% TFA终止反应。将样品注入LC-MS（C18色谱柱，流动相为0.1%甲酸水溶液/乙腈）。监测母离子（GGFG-PAB-MMAE的m/z）的消失和MMAE（m/z 718.5）的出现。半衰期(t1/2)通常为30-60分钟。为了评估血浆稳定性，将ADC (100 ug/mL)在人血浆中于37℃孵育0-7天。在每个时间点，使用蛋白A磁珠免疫沉淀ADC，洗脱，用DTT还原，并通过LC-MS分析释放的连接子-有效载荷或有效载荷。对于细胞毒性，用ADC（0.001-100 nM）处理HER2阳性细胞（SK-BR-3）72小时，加入CellTiter-Glo，测量发光值。ADC的IC₅0应为0.1-1 nM。对于HER2阴性细胞（MDA-MB-468），IC₅0应>100 nM。
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| 细胞实验 |
体内动物实验通用方案：为评估疗效，将A431细胞（5×10⁶）皮下注射到BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到100-150 mm3时，静脉注射ADC（使用GGFG-PAB连接子）（5 mg/kg，单次给药）。每周测量两次肿瘤体积。为评估药效学（PD），分别于给药后4、24、48和72小时收集肿瘤组织；匀浆处理；采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）法测定有效载荷（MMAE）浓度；进行磷酸化组蛋白H3（pHH3）染色以评估有丝分裂抑制情况。为评估毒性，将ADC（10 mg/kg，静脉注射，单次给药）注射到雌性SD大鼠（n=4）体内。分别于第1、3、7、14和21天采集血液样本，进行血常规和血清生化分析。连接子本身不进行给药。生物利用度评估：不适用。所有动物实验均需获得IACUC批准。
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| 动物实验 |
一般药代动力学特性：Fmoc-GGFG-PAB-PNP 是一种小分子（分子量 828.82），但目前尚未用作药物。其药代动力学尚未进行研究。最终的抗体药物偶联物（ADC，即通过该连接子将抗体与有效载荷偶联）具有典型的抗体药代动力学特征：在人体内，半衰期约为 10-20 天，分布容积约为 0.1-0.2 L/kg，清除率约为 0.3 mL/天/kg。该连接子在循环系统中稳定，并在细胞内被裂解。用于研究时，该化合物应储存在 -20℃ 的避光环境中。它可溶于 DMF 和 DMSO（浓度为 10-50 mg/mL）。储存时需干燥保存。该化合物仅供研究使用。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
总体毒性概况：Fmoc-GGFG-PAB-PNP 是一种化学中间体，在正确操作的情况下毒性较低。最终的抗体药物偶联物 (ADC) 可能由于有效载荷而非连接子而产生毒性（中性粒细胞减少症、血小板减少症、肝毒性）。连接子本身不具有遗传毒性。体外实验表明，浓度高达 10 μM 的 Fmoc-GGFG-PAB-PNP 对 HEK293 细胞无细胞毒性（MTT 细胞活力 >90%）。在小鼠急性毒性研究中，单次腹腔注射该连接子（100 mg/kg）未导致死亡；LD₅₀ >200 mg/kg。应采取标准安全防护措施（戴手套、穿实验服、使用通风橱）。该化合物并非管制物质。仅供研究使用；不得用于人类或动物治疗。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Fmoc-GGFG-PAB-PNP 也称为 Fmoc-Gly-Gly-Phe-Gly-PAB-PNP、Fmoc-GGFG-PABC-PNP 或含有 PNP 的组织蛋白酶 B 可裂解连接子。其分子式为 C44H40N₆O11，分子量为 828.82。该化合物为白色至类白色粉末，经 HPLC 检测纯度 >95%。它是合成含有组织蛋白酶 B 可裂解二肽或四肽连接子的抗体药物偶联物 (ADC) 的关键结构单元。这种连接子广泛应用于 FDA 批准的 ADC，例如恩福妥单抗 (Padcev) 和替索妥单抗 (Tivdak)。仅供研究使用，不得用于临床或治疗用途。
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| 参考文献 |
| 分子式 |
C44H40N6O11
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|---|---|
| 分子量 |
828.82
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| CAS号 |
3035272-00-2
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| 序列 |
Fmoc-Gly-Gly-Phe-Gly-PAB-PNPFmoc-GGFG-PAB-PNP
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.2065 mL | 6.0327 mL | 12.0653 mL | |
| 5 mM | 0.2413 mL | 1.2065 mL | 2.4131 mL | |
| 10 mM | 0.1207 mL | 0.6033 mL | 1.2065 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Basivarsen linker
Gly-Gly-Gly-PEG3-TCO TFA
cBu-Cit-PAB
NHS-cBu-Cit-PAB
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