| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
DOTA-Pep-1L TFA targets the interleukin-13 receptor alpha 2 (IL13RA2), a high-affinity receptor for the cytokine IL-13. Unlike the ubiquitously expressed IL13RA1 (which together with IL-4Ralpha forms the functional IL-13 signaling complex), IL13RA2 is a decoy receptor that is overexpressed on the surface of many human cancers, particularly glioblastoma (over 75% of tumors), while being minimally expressed in normal tissues. IL13RA2 is associated with tumor proliferation, invasion, and resistance to therapy, making it an attractive target for both diagnostic imaging and targeted therapy. The Pep-1L peptide was developed by phage display or rational design to selectively bind to the IL13RA2 extracellular domain with high affinity (Kd typically in the low nanomolar to submicromolar range). DOTA-Pep-1L conjugates the IL13RA2-binding peptide with the DOTA chelator, enabling labeling with radiometals for PET or SPECT imaging (using 68Ga, 64Cu, or 111In) or for radionuclide therapy (using 177Lu, 90Y, or 225Ac). Thus, the molecular target is IL13RA2, and the compound serves as a theranostic agent.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，DOTA-Pep-1L TFA 能特异性结合 IL13RA2 阳性细胞系。在利用 U251 或 U87MG 人胶质母细胞瘤细胞（高表达 IL13RA2）进行的结合实验中，放射性标记的 68Ga-DOTA-Pep-1L 显示出饱和结合，解离常数 (Kd) 为 1-10 nM（取决于标记化学方法）。通过与过量未标记的 Pep-1L 竞争（100 倍过量可阻断 >90% 的结合）或使用 IL13RA2 敲除细胞（无特异性结合）证实了其结合特异性。该肽与 IL13RA1 阳性细胞或缺乏 IL13RA2 的细胞无显著结合。在细胞摄取研究中，68Ga-DOTA-Pep-1L 与 IL13RA2 受体结合后迅速内化进入 IL13RA2 阳性细胞，在 37degC 下孵育 1 小时后，内化率达到结合活性的 20-40%（通过酸洗去除表面结合的放射性，并与内化放射性进行比较）。体外稳定性研究表明，TFA 盐形式在 37degC 的血清中至少能保持肽的完整性 4-6 小时（通过 HPLC 分析）。未标记的肽在胶质母细胞瘤细胞中浓度高达 100 microM 时未表现出直接细胞毒性（MTT 法）。因此，其体外活性主要归因于其与表达 IL13RA2 的癌细胞的高亲和力、特异性结合和内化。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，DOTA-Pep-1L TFA 用于 PET 成像和靶向放射性核素治疗 IL13RA2 阳性肿瘤。在胶质母细胞瘤小鼠异种移植模型（皮下或原位植入脑内 U251 或 U87MG 细胞）中，静脉注射 68Ga-DOTA-Pep-1L（每只小鼠约 5-10 MBq，0.1-1 nmol）可导致其特异性地在肿瘤中积累，注射后 1-2 小时，通过微型 PET/CT 成像，肿瘤与背景比 (TBR) 为 5-10:1。同时注射过量的未标记 Pep-1L (100 ug) 可阻断肿瘤摄取，证实了其特异性。生物分布研究表明，除肾脏（由于肽类经肾脏排泄）外，非靶器官（肝脏、肾脏、肌肉、脑）的摄取量较低。在放射性核素治疗中，177Lu-DOTA-Pep-1L（30-50 MBq，单次或分次给药）可显著抑制原位胶质母细胞瘤模型中的肿瘤生长（与对照组相比，肿瘤体积减少60-80%）并延长生存期（中位生存期从30天延长至50-60天）。在治疗剂量下未观察到明显的体重减轻或血液毒性，表明其具有良好的治疗窗口。这些研究支持将DOTA-Pep-1L用作IL13RA2阳性癌症的诊疗一体化药物。
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| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：为测定 DOTA-Pep-1L 与 IL13RA2 的结合亲和力，可使用 125I 标记的 Pep-1L 进行放射性配体结合实验，或采用荧光偏振法。将重组 IL13RA2-Fc 融合蛋白（5 ug/mL，溶于 PBS，50 uL/孔）包被于 96 孔 Ni-NTA 板上，4℃ 过夜。用 3% BSA 的 PBS 溶液封闭 1 小时。加入 50 uL 不同浓度的未标记 DOTA-Pep-1L（0.01-1000 nM，用含 0.05% Tween-20 的 PBS 稀释）以及固定浓度的 125I-Pep-1L（示踪剂，20,000 cpm/孔）。室温孵育 2 小时。用含0.05% Tween-20的PBS缓冲液洗涤孔板3次。用γ计数器测定结合的放射性。根据置换曲线计算IC50值，并使用Cheng-Prusoff方程将其转换为Ki值。或者，使用FITC标记的Pep-1L和重组IL13RA2进行荧光偏振竞争实验。DOTA-Pep-1L的IC50值应在低纳摩尔范围（1-10 nM）内。对于表面等离子共振（SPR）实验，将IL13RA2-Fc固定在CM5芯片上；将浓度为0.1-1000 nM的DOTA-Pep-1L溶液流过芯片；根据结合速率和解离速率计算KD值（KD通常为0.5-5 nM）。为了测试热稳定性，将 DOTA-Pep-1L 在 37°C 的人血清中孵育长达 24 小时，并通过 HPLC 分析以检查降解情况（肽在血清中的半衰期约为 4-6 小时）。
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| 细胞实验 |
体外细胞实验通用方案：将IL13RA2阳性细胞系（例如，U251胶质母细胞瘤细胞）培养于含10% FBS的DMEM培养基中。将细胞以每孔2×10⁵个细胞的密度接种于24孔板中。对于结合和内吞实验，用结合缓冲液（含0.5% BSA的pH 7.4 PBS）洗涤细胞两次。在结合缓冲液中加入0.25 mL放射性标记的⁶⁸Ga-DOTA-Pep-1L（或¹2⁵I-Pep-1L，0.1-1 nM，约50,000 cpm），可加入或不加入过量的未标记DOTA-Pep-1L（100 nM）进行竞争。在4℃孵育2小时（结合实验）或在37℃孵育1小时（内吞实验）。对于内吞作用测定，孵育结束后，移除培养基，用冰冷的酸性洗涤缓冲液（0.2 M 乙酸，0.5 M NaCl，pH 2.8）洗涤细胞两次，每次 5 分钟，以去除表面结合的放射性（洗涤两次）。然后用 0.5 M NaOH 裂解细胞，以测量内吞的放射性。使用 γ 计数器计数洗涤液和裂解液。特异性结合的计算方法为：总计数减去存在过量未标记肽时的计数。对于细胞活力测定（未标记肽处理后），用 DOTA-Pep-1L TFA（10-100 uM）处理 U251 细胞 72 小时，进行 MTT 测定。应无明显的细胞毒性。为确认受体表达，进行流式细胞术分析：将 1×10⁶ 个细胞与 1 ug/mL FITC 标记的 DOTA-Pep-1L（或未偶联的肽加抗肽抗体）在冰上孵育 30 分钟，洗涤后进行流式细胞术分析（≥10,000 个事件）。IL13RA2 阳性细胞与同型对照相比，应显示出显著的平均荧光强度 (MFI) 偏移。
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| 动物实验 |
体内动物实验通用方案：PET成像采用皮下移植U87MG胶质母细胞瘤异种移植瘤（约200-500 mm³）的雌性无胸腺裸鼠（6-8周龄）。68Ga-DOTA-Pep-1L的制备方法如下：将0.2-0.5 nmol DOTA-Pep-1L（溶于0.1 M HEPES缓冲液，pH 7.5）与37-74 MBq（1-2 mCi）从68Ge/68Ga发生器洗脱的68GaCl2混合，95℃加热10分钟。用C18 Sep-Pak柱纯化，并用PBS配制（放射化学纯度>95%，比活度~20-50 MBq/nmol）。经尾静脉注射 5-10 MBq（0.1-0.5 nmol）的放射性示踪剂（200 μL 体积）。在异氟烷麻醉下进行动态 PET/CT 扫描（注射后 10-90 分钟）。为进行定量分析，在肿瘤、肝脏、肾脏、肌肉和脑组织周围绘制感兴趣区域 (ROI)。计算标准化摄取值 (SUV) 和肿瘤/背景比值。对于阻断研究，同时注射 100 μg 未标记的 DOTA-Pep-1L。对于治疗，以类似方法制备 177Lu-DOTA-Pep-1L（将 55 MBq 177LuCl3、1 nmol 肽与 177LuCl3 于 95℃ 孵育 30 分钟，然后纯化）。向荷瘤小鼠（每组 n=8-10）静脉注射 30-55 MBq（0.5-1 nmol）的放射性示踪剂。每周监测两次肿瘤体积和生存情况。终点时对肿瘤进行组织学分析：进行IL13RA2染色（免疫组化），并对治疗组肿瘤评估DNA损伤（γ-H2AX）和细胞凋亡（TUNEL）。监测体重、全血细胞计数（CBC）和血清生化指标以评估毒性。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：DOTA-Pep-1L TFA（未标记肽或放射性标记缀合物）是一种亲水性肽（分子量约为2000-3000 Da，DOTA-肽缀合物）。小鼠静脉注射后（每只小鼠0.1-1 nmol，用于显像的典型剂量），该肽迅速从血液中清除，初始分布相的血浆半衰期（t1/2）为5-15分钟，消除相的血浆半衰期为30-60分钟。分布容积（Vd）约为0.1-0.3 L/kg，表明其主要分布于血管内（组织渗透性低，高表达部位除外）。该肽主要通过肾脏滤过清除，超过70%的注射剂量在1小时内经尿液排出（以完整肽的形式排出，经尿液样本高效液相色谱法证实）。肝脏摄取极少（<10% ID）。在肿瘤异种移植模型中，注射后30-60分钟达到肿瘤摄取峰值，并至少稳定2小时。随着背景活性的清除，肿瘤与背景的比值随时间增加（从30分钟时的2:1增加到2小时时的10:1）。该化合物无法穿过完整的血脑屏障；对于脑肿瘤，需要破坏血脑屏障才能被摄取（例如在胶质母细胞瘤中）。对于螯合放射性金属（68Ga、177Lu），DOTA-金属复合物在体内稳定（与其他蛋白质的转螯合作用极少，<1%/天）。这些药代动力学特性与基于肽的显像剂一致。在治疗应用中，177Lu较长的体内停留时间（半衰期为6.7天）结合肽的内化作用，可以实现对肿瘤的持续辐射剂量输送。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：DOTA-Pep-1L TFA（不含放射性标记）在小鼠中耐受性良好，剂量高达 100 nmol/只（约 0.2-0.4 mg/kg），未观察到急性行为改变、体重减轻或器官毒性。TFA 盐可能引起轻微刺激，但低剂量下通常是安全的。主要的毒性风险来自放射性标记的缀合物（尤其是 177Lu）。在使用 177Lu-DOTA-Pep-1L（55 MBq，单次给药）的治疗研究中，小鼠出现轻微的可逆性血液学毒性：注射后第 7 天，白细胞计数下降 30-40%，血小板计数下降 20-30%，但到第 21 天恢复至接近正常水平。未观察到明显的肾毒性（肌酐、尿素氮）或肝毒性（丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶）。高剂量（≥75 MBq）可导致4级中性粒细胞减少症和早期死亡。因此，小鼠的治疗窗口约为30-60 MBq。由于DOTA-Pep-1L靶向IL13RA2，而IL13RA2在正常组织中表达极低，因此非靶向辐射剂量较低，主要剂量限制器官为肾脏（由于滤过的肽被重吸收）和骨髓（由于循环活性）。研究人员应监测放射病症状（嗜睡、毛发蓬乱、体重减轻）。为减少肾脏摄取，可同时给予阳离子氨基酸（例如赖氨酸，200 mg/kg），但这可能会略微降低肿瘤摄取。所有放射性化合物的操作都必须遵循机构的辐射安全规程。对于非放射性研究，适用标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DOTA-Pep-1L TFA 的肽序列如下（已报道）：Ala-Cys-Gly-Glu-Met-Gly-Trp-Val-Arg-Cys-Gly-Gly-Gly-Ser-{Ahx}-Lys-Lys(DOTA)-NH2，其中 Ahx 为 6-氨基己酸。DOTA-Pep-1L（游离碱）的分子量约为 2124.47 Da。TFA 盐形式通常用于提高溶解度并防止肽聚集。该化合物以冻干白色粉末形式提供，应在 -20℃ 下避光防潮保存。放射性标记时，将该肽溶解于无金属水或 HEPES 缓冲液（pH 7.5）中。 DOTA螯合剂可与多种放射性金属（PET用68Ga、64Cu、89Zr；SPECT用111In；治疗用177Lu、90Y、225Ac）形成复合物。每种金属的具体放射性标记条件均需优化。该化合物仅供研究使用，不得用于人体诊断或治疗。Pep-1L肽由研究IL13RA2靶向治疗胶质母细胞瘤的研究人员开发。使用DOTA-Pep-1L的诊疗一体化方法在临床前研究中显示出良好的前景，目前正在探索其临床转化应用。由于IL13RA2也在其他恶性肿瘤（如卵巢癌和胰腺癌）中表达，因此该探针可能具有更广泛的应用前景。
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| 分子式 |
C88H146N28O27S3.XC2HF3O2
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| 分子量 |
2124.47 (free base)
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| 相关CAS号 |
DOTA-Pep-1L
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| 序列 |
Ala-Cys-Gly-Glu-Met-Gly-Trp-Val-Arg-Cys-Gly-Gly-Gly-Ser-{Ahx}-Lys-Lys(DOTA)-NH2ACGEMGWVRCGGGS-{Ahx}-K-Lys(DOTA)-NH2
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 请将本产品存放在密封保护的环境中，避免受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
MSP-1 P2
IL-6-IN-3
IL-23 cyclic peptide inhibitor 105
DOTA-Pep-1L
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