| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 靶点 |
The primary molecular target of SARS-CoV-2 3CLpro-IN-20 is the SARS-CoV-2 3-chymotrypsin-like protease (3CLpro), also known as the main protease (Mpro). 3CLpro is a cysteine protease that plays a critical role in the life cycle of the SARS-CoV-2 virus. It is responsible for cleaving the viral polyproteins (pp1a and pp1ab) at 11 different sites, producing functional non-structural proteins that are essential for viral replication and transcription. The protease is highly conserved among coronaviruses, making it an attractive target for broad-spectrum antiviral drug development. SARS-CoV-2 3CLpro-IN-20 is a covalent inhibitor that binds irreversibly or reversibly to the active site cysteine residue (Cys145) of the protease, forming a covalent bond that inhibits the enzyme's catalytic activity. By inhibiting 3CLpro, the compound prevents the processing of viral polyproteins and blocks viral replication.
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| 体外研究 (In Vitro) |
SARS-CoV-2 3CLpro-IN-20 的体外活性特征在于其对 SARS-CoV-2 3CLpro 的强效抑制作用。在酶抑制试验中，该化合物的 IC50 值为 0.43 μM，Ki 值约为 0.33 μM。这些数值表明该化合物是一种强效的蛋白酶抑制剂，其效力达到纳摩尔至亚微摩尔级别。共价结合机制是该化合物发挥高效抑制作用的关键因素，即使在相对较低的浓度下也能实现有效抑制。在基于细胞的抗病毒试验中，该化合物有望抑制 SARS-CoV-2 在感染细胞中的复制，其 EC50 值可能与生化 IC50 值处于同一范围内。由于活性位点的保守性，该化合物也可能对其他具有类似 3CL 蛋白酶的冠状病毒表现出活性。该化合物对病毒蛋白酶相对于人类蛋白酶的选择性是其治疗潜力的重要考虑因素，尽管现有文献中没有提供具体的选择性数据。
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| 体内研究 (In Vivo) |
SARS-CoV-2 3CLpro-IN-20 的体内活性在现有文献中报道较少，因为该化合物主要用作蛋白酶靶向研究的工具。然而，基于其作为 3CLpro 抑制剂的体外活性，如果该化合物具有合适的药代动力学特性，则有望在 SARS-CoV-2 感染的动物模型中显示出抗病毒功效。在 SARS-CoV-2 感染的小鼠模型（例如，hACE2 转基因小鼠或小鼠适应性 SARS-CoV-2）中，以适当剂量给药有望降低肺部病毒载量、减轻肺部病理损伤并提高生存率。共价结合机制可能延长靶点结合时间，并有可能减少给药频率。然而，该化合物的体内疗效将取决于其药代动力学特性，特别是其口服生物利用度、组织分布和代谢稳定性。需要进行全面的体内研究来评估该化合物的治疗潜力。
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| 酶活实验 |
对于使用 SARS-CoV-2 3CLpro-IN-20 进行的体外 3CLpro 抑制试验，采用以下方案：重组 SARS-CoV-2 3CLpro 在大肠杆菌中表达，并通过亲和层析纯化。使用荧光底物（通常为肽底物，例如 Dabcyl-KTSAVLQSGFRKME-Edans）测定蛋白酶活性，该底物可被蛋白酶切割产生荧光信号。试验在含有 1 mM EDTA 和 2 mM DTT 的 50 mM Tris-HCl 缓冲液（pH 7.3）中进行，温度为 25-37°C。将测试化合物溶解于 DMSO 中，并用试验缓冲液进行系列稀释，最终浓度范围为 0.001 至 100 μM。将酶（10-50 nM）与化合物预孵育 10-30 分钟，以使其共价结合。然后加入底物（10-50 μM），并连续监测荧光（激发波长 320 nm，发射波长 420 nm）10-60 分钟。反应的初始速率由反应进程曲线的线性部分计算得出。IC50 值通过非线性回归从剂量-反应曲线计算得出。Ki 值可通过 Morrison 方程（针对紧密结合抑制剂）或通过改变底物和抑制剂浓度来确定。
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| 细胞实验 |
对于使用 SARS-CoV-2 3CLpro-IN-20 进行的体外细胞抗病毒试验，通常采用以下方案：将 Vero E6 或 A549-ACE2 细胞在含 10% FBS 和抗生素的 DMEM 培养基中，于 37°C、5% CO₂ 条件下培养。将细胞以每孔 2-4 × 10⁴ 个细胞的密度接种于 96 孔板中，并使其过夜贴壁。将测试化合物溶解于 DMSO 中，并用培养基进行系列稀释，最终浓度范围为 0.01 至 100 μM。将 SARS-CoV-2（例如，分离株 USA-WA1/2020）稀释至 100 TCID₅₀，并与化合物一起加入细胞中。吸附 1-2 小时后，移除病毒-化合物混合物，并更换为含有相同浓度化合物的新鲜培养基。细胞培养48-72小时后，通过qRT-PCR检测病毒RNA、免疫荧光染色检测病毒核衣壳蛋白或细胞病变效应（CPE）降低试验评估病毒复制情况。EC50（抑制病毒复制50%的有效浓度）由剂量反应曲线计算得出。同时，采用MTT法平行评估细胞毒性，计算CC50和选择性指数（SI = CC50/EC50）。在添加时间研究中，于病毒感染的不同时间点添加化合物，以确定被抑制的病毒生命周期阶段。
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| 动物实验 |
对于SARS-CoV-2 3CLpro抑制剂的体内动物研究，通常采用以下方案：将K18-hACE2转基因小鼠（6-8周龄，雌性）经鼻内感染10⁴-10⁵ PFU的SARS-CoV-2病毒。将测试化合物配制于合适的溶剂中（例如，10% DMSO、40% PEG400和50%生理盐水或0.5%甲基纤维素），并以10、30和100 mg/kg的剂量口服或腹腔注射给药，通常每日两次，持续3-5天。对照组仅给予溶剂。每日监测小鼠体重，并记录临床评分（基于外观、活动和呼吸）。在感染后不同时间点，处死小鼠，并收集肺组织，通过噬斑试验或qRT-PCR测定病毒载量。肺组织还需进行组织病理学检查（苏木精-伊红染色），以评估炎症、水肿和肺损伤。肺匀浆中的细胞因子和趋化因子水平采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或多重检测法进行测定。在药代动力学研究中，于给药后不同时间点采集血液和肺组织样本，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析化合物浓度。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
SARS-CoV-2 3CLpro-IN-20（CAS号：878985-00-3）是一种共价SARS-CoV-2 3CLpro抑制剂（化合物5g），IC50为0.43 μM，Ki约为0.33 μM。其分子式为C19H12BrNO2，分子量为366.21 g/mol。该化合物用于蛋白酶靶向研究，以探索病毒复制和成熟过程。未来的研究方向可能包括：优化该化合物的体内药代动力学特性；评估其在SARS-CoV-2感染动物模型中的疗效；研究其对其他冠状病毒的活性；以及将其开发为治疗COVID-19和其他冠状病毒疾病的潜在疗法。
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| 分子式 |
C19H12BRNO2
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|---|---|
| 分子量 |
366.208084106445
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| 精确质量 |
365.005
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| CAS号 |
878985-00-3
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| PubChem CID |
4035834
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| 外观&性状 |
Orange to red solid powder
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| LogP |
4.3
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| tPSA |
37.4
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
494
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
N1(CC2=CC=C3C(=C2)C=CC=C3)C2=C(C=C(Br)C=C2)C(=O)C1=O
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| InChi Key |
VTPWMSNOJBWKQC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H12BrNO2/c20-15-7-8-17-16(10-15)18(22)19(23)21(17)11-12-5-6-13-3-1-2-4-14(13)9-12/h1-10H,11H2
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| 化学名 |
5-bromo-1-(naphthalen-2-ylmethyl)indole-2,3-dione
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| 别名 |
5-bromo-1-(naphthalen-2-ylmethyl)-1H-indole-2,3-dione
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~4.76 mg/mL (~13.00 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7307 mL | 13.6534 mL | 27.3067 mL | |
| 5 mM | 0.5461 mL | 2.7307 mL | 5.4613 mL | |
| 10 mM | 0.2731 mL | 1.3653 mL | 2.7307 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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