p-SCN-Bn-deferoxamine

RDC Linker for Radionuclide-Drug Conjugates

在原位环境中用氯屈膦酸盐脂质体预处理的小鼠在早期时间点表现出肝脏摄取减少（24小时时为12.2±2.3%ID/g对22.8±3.8%ID/g），在120小时时肿瘤摄取增加（13.8±8.0%ID/g对6.0±1.2%ID/g）。这使得用氯屈膦酸钠治疗的小鼠（6/6）的原位胰腺异种移植物的描绘明显多于未用氯屈磷酸钠治疗的鼠（2/6）或注射用非特异性抗体标记的金纳米粒子的小鼠（0/5）。 结论：氯屈膦酸盐脂质体和金纳米颗粒表面活性靶向抗体的组合允许对小鼠皮下和原位胰腺异种移植物进行PET/CT成像[1]。

细胞培养：[1]
胰腺癌症细胞系BxPC-3和MiaPaCa-2维持在37°C和5%CO2气氛下。BxPC-3细胞在罗斯威尔公园纪念研究所（RPMI）-1640中培养，含有2 mM L-谷氨酰胺、10 mM HEPES、1 mM丙酮酸钠、4.5 g/L葡萄糖、1.5 g/L碳酸钠和10%FBS。MiaPaCa-2细胞在补充了10%FBS和2.5%马血清的Dulbecco改良鹰培养基（DMEM）中培养。

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[89Zr]Zr-Ab-AuNP的体外评估：[1]
将1x106细胞接种在1mL培养基中的六孔板上，并在37°C和5%CO2的培养箱中粘附过夜。第二天，向每个孔中加入1 uCi的[89Zr]Zr-5B1-AuNP，并将其放回培养箱中1、4、12和24小时。在每个时间点收集培养基，用磷酸缓冲盐水洗涤孔两次。通过用冷的05 M甘氨酸缓冲液（pH=2.8）洗涤孔两次，然后在4°C下用PBS冲洗，收集表面结合部分。通过用1M NaOH裂解细胞，然后用PBS洗涤两次来收集内化部分。然后在Wizard2自动伽马计数器上对所有分数进行计数.

目的：体内靶向递送仍然是纳米材料转化为临床应用的一大障碍。最大的障碍是单核吞噬细胞系统（MPS），该系统会将外来物质从全身循环中清除，导致其在肝脏和脾脏等器官中积聚。本研究旨在确定将活性靶向抗体5B1连接到金纳米颗粒表面，并使用氯膦酸盐脂质体清除肝脏和脾脏中的巨噬细胞，是否能够最大限度地减少MPS器官的摄取，提高对CA19.9阳性胰腺肿瘤的靶向递送，并增强胰腺肿瘤的边界清晰度。
方法：为了制备抗体-金纳米颗粒偶联物（Ab-AuNP），首先将抗体与对异硫氰酸苄基去铁胺（p-SCN-DFO）偶联，然后将其与NHS活化的金纳米颗粒偶联。采用透射电子显微镜 (TEM) 和原子力显微镜 (AFM) 对 Ab-AuNP 进行表征。采用改良的 Lindmo 法评估其体外结合亲和力和内化潜力。将 Ab-AuNP 与 89Zr 进行放射性标记，并注射到预先注射或未注射氯膦酸盐脂质体的 CA19.9 阳性 BxPc-3 胰腺原位肿瘤小鼠体内，用于 PET 成像和生物分布研究。采用电感耦合等离子体发射光谱法 (ICP-OES) 分析证实金纳米颗粒已递送至 BxPc-3 胰腺皮下异种移植瘤。 [1]

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皮下肿瘤模型：[1]
将5×10⁶个BxPC-3或MiaPaCa-2细胞悬浮于150 μL（细胞培养基：基质胶比例为1:1）中，注射到雌性无胸腺裸鼠的后侧腹部。待肿瘤生长3-4周后，进行成像和生物分布研究。

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原位肿瘤模型：[1]
对于原位胰腺异种移植模型，使用雌性无胸腺裸鼠。小鼠用1-2%异氟烷麻醉，手术在加热垫上进行，以在手术过程中调节体温。在切口附近皮内注射布比卡因作为局部麻醉剂。切口周围的皮肤用聚维酮碘和70%乙醇交替擦拭3次。切开皮肤和腹膜后，将脾脏和胰腺从腹腔中取出。此时，将6 × 10⁵个BxPC-3（荧光素酶转染）细胞悬浮于培养基和Matrigel（1:1比例）中，注射到胰头。将脾脏和胰腺放回腹腔，并用4-0 Vicryl缝线缝合。用三个无菌伤口夹闭合皮肤。术后立即给予丁丙诺啡和美洛昔康。术后24小时和48小时分别给予美洛昔康，7天后移除伤口夹。采用生物发光成像（IVIS Spectrum）监测肿瘤生长，肿瘤在大约三周内达到最佳大小。氯膦酸盐脂质体购自 Formumax 公司，每只小鼠腹腔注射 200 μL。

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ICP-OES 分析：[1]
使用 Optima 7000 DV 光谱仪进行分析。首先将含有 [89Zr]Zr-5B1-AuNP 和 [89Zr]Zr-IgG-AuNP 的收获器官置于 75°C 下，用 65% HNO3 和 35% HCl 的王水溶液消化过夜，然后用适量的 5% HNO3 溶液溶解，使其浓度在校准曲线范围内（ppm 至 ppb）。加入过氧化氢以加速有机物的消化。校准溶液由经认证的金单元素溶液配制而成。该仪器使用浓度范围为 0.01 至 5 ppm 的六点校准曲线进行校准，并在曲线的低、中、高三个点分别使用三个质控样品进行验证。ICP-OES 测定的操作条件为：射频功率 1300 W，等离子体流量 15 L·min⁻¹，辅助流量 0.5 L·min⁻¹，雾化器流量 0.8 L·min⁻¹，样品进样速率 1 mL·min⁻¹。监测波长为 267.595 nm 的信号。定量下限为 0.06 ppm。放射性生物分布数据与 ICP 数据的比较旨在定性地反映二者的吸收模式。我们认为此处观察到的差异是由于 ICP 测量过程所致。根据溶解器官所需的酸量，某些浓度可能低于仪器的检测限（请注意，由于此原因，ICP 数据的误差范围相当大）。这是使用完整器官时该方法的一个局限性，因为完全溶解所需的酸量可能相当大；此外，由于纳米颗粒难以溶解，注入的纳米颗粒质量较低，也可能导致某些样本（尤其是肝脏样本）的检测困难。

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生物分布研究：[1]
生物分布研究通过在注射抗体-纳米颗粒偶联物后的特定时间点处死小鼠进行。收集相关器官和肿瘤，称重，并在伽马计数器上计数。生物分布值以每克组织中注射剂量的百分比表示，并通过纳入适当的标准进行计算。

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PET/CT 成像：[1]
小鼠用 1-2% 异氟烷麻醉，并在 Inveon microPET/CT 仪器上采集图像。

[1]. ImmunoPET Imaging of Pancreatic Tumors with 89Zr-Labeled Gold Nanoparticle-Antibody Conjugates. Mol Imaging Biol. 2021 Feb;23(1):84-94.

本研究证实了将特异性靶向抗体标记的金纳米颗粒递送至皮下和原位胰腺异种移植瘤的能力。使用人源化抗体5B1时，表达靶抗原的皮下胰腺异种移植瘤中金纳米颗粒的积累量为24.0 ± 11.6% ID/g，而IgG标记的对照组仅为4.0 ± 1.2% ID/g。这使得表达靶抗原的肿瘤数量增加了6-8倍。在原位模型中，5B1标记的金纳米颗粒在肿瘤中的积累量是IgG标记对照组的4-7倍。此外，本研究还证实了氯膦酸盐脂质体能够增强原位胰腺异种移植瘤的成像效果。这项工作对于开发实时体内追踪纳米颗粒生物分布的方法具有重要意义。通过将PET活性放射性核素整合到我们的纳米颗粒上，我们可以可视化并分析主动靶向配体和巨噬细胞清除策略的效果。理论上，这可以用于对任何需要在体内评估以用于临床应用的纳米颗粒系统进行其他修饰。整合PET核素可以实现对药物效应或纳米制剂生物分布中其他因素的非侵入性追踪。此外，金纳米颗粒本身具有以下优势：(a) 体内安全性高；(b) 易于修饰；(c) 能够通过定位到肿瘤微环境进行被动靶向，以及通过肿瘤细胞进行主动靶向。最后，本研究支持一种药理学策略，即使用氯膦酸盐脂质体来增强金纳米颗粒-抗体偶联物的生物分布，从而实现PET成像。[1]

C33H52N8O8S2

752.94

752.334

1222468-90-7

24983484

White to off-white solid powder

1.5

280

7

11

26

51

1140

0

HBAYEVATSBINBX-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C33H52N8O8S2/c1-26(42)39(47)22-8-2-5-19-34-29(43)15-17-31(45)40(48)23-9-3-6-20-35-30(44)16-18-32(46)41(49)24-10-4-7-21-36-33(51)38-28-13-11-27(12-14-28)37-25-50/h11-14,47-49H,2-10,15-24H2,1H3,(H,34,43)(H,35,44)(H2,36,38,51)

N-[5-[acetyl(hydroxy)amino]pentyl]-N'-hydroxy-N'-[5-[[4-[hydroxy-[5-[(4-isothiocyanatophenyl)carbamothioylamino]pentyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]pentyl]butanediamide

p-SCN-Bn-deferoxamine; Berdoxam; 1222468-90-7; p-NCS-Bz-DFO; Berdoxam [USAN]; TMK6ND3QJH; UNII-TMK6ND3QJH; p-Isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。