| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
APN is itself a target enzyme (zinc-dependent metalloprotease), not a drug that binds to a target. As a target, it is inhibited by various compounds. The following inhibitor constants (Ki) for APN are reported: Bestatin inhibits at least 12 different aminopeptidases, most with Ki below 1 μM [1]; Angiotensin IV (Ang IV) inhibits APN with pKi = 5.23 [3]; The selective APN inhibitor 7B (2(S)-benzyl-3-[hydroxy(1'(R)-aminoethyl)phosphinyl]propanoyl-L-tyrosine) has pKi = 9.22 for purified porcine APN, pKi = 8.58 ± 0.01 for recombinant human APN (from HEK293 cells) [3].
Angiotensin IV also inhibits IRAP (insulin-regulated aminopeptidase) with pKi = 6.90 for recombinant human IRAP [3].
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| 体外研究 (In Vitro) |
- 纹状体膜中的酶活性（[3]）： 将纹状体细胞膜与底物L-Leu-pNA（1.5 mM，37°C）孵育。L-Leu-pNA的Km为0.238 ± 0.033 mM，Vmax为0.007 ± 0.001 μM/min。血管紧张素IV（100 μM）抑制高达90%的氨肽酶活性（pKi = 6.09 ± 0.25）。选择性APN抑制剂7B产生双相抑制曲线：高亲和力组分（pKi = 9.20 ± 0.14，占总活性的60±6%，对应APN）和低亲和力组分（pKi = 7.26 ± 0.10，占总活性的约40%，对应IRAP）。[3]
- 重组人APN和IRAP的抑制（[3]）： 转染重组人APN或IRAP的HEK293细胞被7B抑制，pKi值分别为8.58 ± 0.01（APN）和7.04 ± 0.04（IRAP）。[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
中枢血压调节（[2]）： 向脑室内（i.c.v.）输注APN抑制剂乌苯美司和氨肽酶抑制剂（amastatin）可增加动脉血压，并在正常血压（WKY、Sprague-Dawley）和高血压（SHR）大鼠品系中引起渴水反应。向脑室内输注氨肽酶M（APN）可降低SHR和WKY大鼠的动脉血压。将APN微注射到下丘脑室旁核（PVN）可降低动脉血压。[2]
- 肾脏APN与盐适应（[2]）： 在盐抵抗性大鼠品系（Dahl SR、Sprague-Dawley）中，高盐饮食（8% vs. 0.8% NaCl）增加肾脏APN丰度和活性。相反，在盐敏感性Dahl SS大鼠中，高盐饮食挑战下肾脏APN不增加，提示APN失调导致盐敏感性。[2] - 纹状体多巴胺释放（[3]）： 向大鼠纹状体局部灌注血管紧张素IV（10 μM，1小时）显著增加细胞外多巴胺水平（60分钟时最大约为基础值的150%）。单独灌注选择性APN抑制剂7B（10、100或500 nM，1小时）对纹状体多巴胺释放无影响。共灌注Ang IV（10 μM）与7B（100 nM）可增强多巴胺释放（最大约为基础值的350%）。共灌注Ang IV（10 μM）与7B（500 nM）完全取消Ang IV诱导的多巴胺释放。[3] |
| 酶活实验 |
- 使用L-Leu-pNA底物的氨肽酶活性测定（[3]）： 将膜匀浆（纹状体组织50 μg蛋白，或转染HEK293细胞2×10⁵个细胞）在96孔板中于37°C下与1.5 mM L-Leu-pNA（或指定浓度）和酶缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4，140 mM NaCl，0.1% BSA，100 μM PMSF）单独或与测试化合物一起孵育。通过测量10至50分钟内在405 nm处的吸光度来监测对硝基苯胺的形成。通过线性回归计算速率常数。使用非线性回归（GraphPad Prism 4.0）计算IC50值。使用Cheng-Prusoff方程计算pKi值：pKi = -log[IC50/(1+[L]/Km)]，其中[L]是游离底物浓度，Km是米氏常数。[3]
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| 细胞实验 |
- HEK293细胞转染和膜制备（[3]）： HEK293细胞在含L-谷氨酰胺（2 mM）、青霉素/链霉素、非必需氨基酸、丙酮酸钠（1 mM）和10%胎牛血清的DMEM中，于37°C、5% CO₂下培养。使用LipofectAMINE（8 μl/ml，1 μg/ml DNA）将质粒DNA（含人IRAP基因的pCIneo或含人APN cDNA的pTEJ4）瞬时转染细胞。2天后，用0.2% EDTA的PBS收集细胞，离心（500×g，5分钟，室温），在50 mM Tris-HCl pH 7.4中匀浆，通过离心（30,000×g，30分钟，4°C）制备膜。转染细胞的酶活性比非转染细胞高10倍（IRAP）和8倍（APN）。[3]
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| 动物实验 |
大鼠立体定位植入和微透析（[3]）： 雄性Wistar大鼠（250-300 g）用氯胺酮/地西泮（60/4.5 mg/kg i.p.）麻醉并置于立体定位框架中。将引导套管植入左侧背侧纹状体上方3 mm处（坐标相对于前囟：L -2.4，A +1.2，V +2.8）。通过套管引入微透析探针（膜长3 mm），并用改良林格氏液（147 mM NaCl，4 mM KCl，1.2 mM CaCl₂）以2 μl/min灌注。动物过夜恢复。每20分钟收集一次透析液样本（40 μl）。将药物（Ang IV，7B）溶于改良林格氏液中，通过探针局部给药1小时。浓度：7B为10、100或500 nM；Ang IV为10 μM。所有实验均获得布鲁塞尔自由大学动物实验伦理委员会的批准。[3]
- 大鼠脑室内输注（[2]）： 在正常血压（WKY、Sprague-Dawley）和高血压（SHR）大鼠品系中进行APN抑制剂（乌苯美司、amastatin）或氨肽酶M的脑室内输注，以测量血压变化。[2] - 大鼠饮食盐操作（[2]）： 给盐抵抗性（Dahl SR、Sprague-Dawley）和盐敏感性（Dahl SS）大鼠品系喂食高盐（8% NaCl）或低盐（0.8% NaCl）饮食，以评估肾脏APN表达和活性。[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
- 托舍多特（CHR-2797）在晚期实体瘤中的I期试验（[1]）： 在一项I期试验中（40例患者，加速滴定设计，每日一次给药），最常见的不良事件是疲劳、腹泻、外周性水肿、恶心、头晕和便秘。未报告剂量限制性毒性。1例患者达到部分缓解（肾细胞癌），4例患者疾病稳定超过6个月。[1]
- NGR-hTNF的I期试验（[1]）： 在一项首次临床试验中（16例患者，NGR-hTNF静脉给药，每3周一次，剂量0.2-1.6 μg/m²），最常见的治疗相关毒性是在首次输注期间发生的1-2级寒战（69%）。未发生剂量限制性毒性。[1] - 乌苯美司在切除的I期鳞状细胞肺癌中的试验（[1]）： 在一项随机双盲安慰剂对照试验中（402例患者，乌苯美司30 mg每日口服，持续2年），两组均观察到很少的不良事件。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- 结构（[1][2]）： 全长APN由967个氨基酸组成，具有短的N末端胞质结构域（8-10个氨基酸）、单个跨膜螺旋和包含Zn²⁺结合HELAH基序和活性位点的大胞外C末端结构域。APN是一种非共价键合的同源二聚体，分子量为160 kDa（2×80 kDa亚基）。在体内高度糖基化。[1][2]
- 组织分布（[1][2]）： APN广泛表达。在大脑中：脑膜、脉络丛、松果体、室旁核、垂体、皮质、尾壳核、丘脑底核、导水管周围灰质、丘脑、脊髓、海马、伏隔核、黑质、下丘脑、中缝核、脑桥核、下橄榄和小脑颗粒层中表达最高。在肾脏中：集中在肾上皮细胞（顶端刷状缘膜）、系膜细胞和肾小球中。[1][2] - 在癌症中的作用（[1]）： APN在多种实体瘤（乳腺、结肠、肺、卵巢、胰腺、甲状腺）中失调。高APN表达与肿瘤进展、血管生成、不良生存和转移相关。与健康对照相比，癌症患者的血浆和积液中可溶性APN升高。APN是抗癌治疗的靶点（如乌苯美司、托舍多特、NGR靶向药物偶联物）。[1] - 在高血压中的作用（[2]）： APN通过中枢（下丘脑PVN）和肾脏机制参与动脉血压调节。APN基因的一个功能性单核苷酸多态性（Lys528Arg）已被证明与原发性高血压和非调节性高血压相关，并降低酶活性。APN基因定位到Dahl大鼠染色体1上的一个高血压数量性状位点。[2] - 在多巴胺释放中的作用（[3]）： 在大鼠纹状体中，APN和IRAP均存在（APN约占氨肽酶活性的60%，IRAP约占40%）。血管紧张素IV增加多巴胺释放，低剂量7B（抑制APN，延长Ang IV半衰期）可增强这一效应，而高剂量7B（同时抑制APN和IRAP）则取消该效应。作者假设IRAP和/或APN可能作为受体（不仅仅是酶）介导Ang IV的效应。[3] |
| CAS号 |
9054-63-1
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|---|---|
| 相关CAS号 |
Microsomal aminopeptidase;9054-63-1
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| PubChem CID |
168010185
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 来源 |
Produced by Aspergillus niger fermentation
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
1
|
| 可旋转键数目(RBC) |
10
|
| 重原子数目 |
63
|
| 分子复杂度/Complexity |
1510
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Dipeptidyl peptidase IV
SpeB cysteine protease
AMG 118 (Immobilized cephalosporin C acylase)
Elastase
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