| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The molecular target of Cys modifier 1 is the thiol group of cysteine amino acid residues in proteins. Cysteine is a relatively rare amino acid in proteins, and its thiol side chain is highly nucleophilic, providing a specific "chemical handle" for conjugation. The electrophilic carbonylacrylic warhead of the compound undergoes a rapid Michael addition reaction with the deprotonated thiolate anion of cysteine at neutral pH. This reaction is highly selective for cysteine over other nucleophilic amino acids (such as lysine, histidine, or tyrosine) under optimized conditions (e.g., pH 7.0-7.4). The nitrobenzofurazan (NBD) moiety attached to the modifier serves as a fluorescent reporter, allowing the labeled protein to be detected via fluorescence (excitation at 465 nm, emission at 539 nm). Thus, it targets the innate reactivity of the sulfur atom in the protein's cysteine residues, not a specific binding pocket.
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| 体外研究 (In Vitro) |
半胱氨酸修饰剂 1 的体外活性体现在其能够高效标记复杂混合物中含半胱氨酸的蛋白质。在 4℃ 或 25℃ 下，于 PBS 缓冲液（pH 7.4）中，浓度为 1-10 uM 时，该修饰剂可标记模型蛋白（例如，牛血清白蛋白，BSA，含有 35 个半胱氨酸残基和 1 个游离巯基）上 80-95% 的暴露半胱氨酸残基。标记反应迅速，与游离半胱氨酸或谷胱甘肽的反应的二级速率常数 (k2) 为 10-100 M-¹ s-¹。标记后荧光信号增强，便于定量分析。在推荐浓度下，该修饰剂对其他氨基酸或核酸无明显的脱靶标记。该化合物在室温下于水性缓冲液中可稳定保存数小时，因此可用于标准生化工作流程。经高效液相色谱法（HPLC）确认，纯度通常≥98%。
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| 体内研究 (In Vivo) |
半胱氨酸修饰剂1是一种化学生物学工具，不用于动物治疗。其“体内活性”指的是其在活细胞内标记蛋白质的潜在用途。然而，由于它能与细胞内环境中丰富的硫醇（例如，毫摩尔浓度的谷胱甘肽）发生反应，因此未经仔细优化，可能不适用于活细胞内的选择性标记。它的主要用途是在体外，用于纯化蛋白质或细胞裂解液。目前尚无已发表的研究描述将半胱氨酸修饰剂1用于动物体内药物疗效评估的情况。它的使用严格限于实验室，例如在试管、无细胞体系或固定/透化细胞中进行。
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| 酶活实验 |
半胱氨酸修饰剂 1 旨在与半胱氨酸残基反应，其效率通常使用游离的 N-乙酰半胱氨酸 (NAC) 或谷胱甘肽 (GSH) 等模型化合物进行评估。典型的检测方案如下：在含有 1 mM EDTA（以防止金属催化氧化）的 50 mM 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4) 中配制 100 uM 的半胱氨酸修饰剂 1。向溶液中加入不同浓度 (0-500 uM) 的 NAC 或 GSH（还原型）。将反应在室温 (25℃) 下孵育 30-120 分钟。使用荧光酶标仪或分光光度计，通过测量激发波长 465 nm/发射波长 539 nm 处的荧光强度增加来监测反应进程。或者，也可以使用 HPLC-UV 或 LC-MS 监测反应，以定量修饰剂的消耗和硫醇加合物的生成。然后通过绘制荧光强度随时间变化的曲线来计算二级反应速率常数。对于蛋白质标记，将蛋白质与修饰剂孵育，然后进行SDS-PAGE电泳，并使用荧光扫描仪对凝胶进行成像以显示标记的蛋白质条带。纯度通过核磁共振（NMR）和高分辨率质谱（HRMS）进行确认。
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| 细胞实验 |
半胱氨酸修饰剂 1 主要用于体外蛋白质标记，而非活细胞实验。典型的细胞实验流程包括裂解细胞以释放目标蛋白。例如，将表达含半胱氨酸的目标蛋白的质粒转染至 HEK293T 细胞。48 小时后，收集细胞并用 RIPA 缓冲液裂解（不含 DTT 或 β-巯基乙醇等还原剂，以保留巯基）。将澄清的细胞裂解液与 10-50 uM 的半胱氨酸修饰剂 1 在 4℃ 下轻柔振荡孵育 1-2 小时。然后通过 SDS-PAGE 分离标记的蛋白质。首先扫描凝胶的荧光（NBD 通道）以检测标记的目标蛋白，然后用考马斯亮蓝或银染法染色以显示总蛋白。对于目标特异性检测，使用针对目标蛋白的抗体进行 Western blot 分析。荧光标记还可以用于使用抗 NBD 抗体捕获目标蛋白。
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| 动物实验 |
作为一种化学工具，目前尚无针对半胱氨酸修饰剂 1 的标准化体内动物实验方案。然而，为了测试其体内稳定性或生物分布，可以设计如下的探索性研究：将半胱氨酸修饰剂 1（5-10 mg/kg）配制于合适的溶剂中（例如，含 10% DMSO 和 10% Tween 80 的 PBS），并通过静脉注射（IV）给药于雄性 BALB/c 小鼠。在注射后不同时间点（例如，5 分钟、30 分钟、1 小时、4 小时、8 小时、24 小时），处死小鼠，并采集血液和主要器官（肝脏、肾脏、肺脏、脾脏）。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆和组织匀浆中化合物的浓度。使用全身荧光成像系统观察组织切片中的荧光（NBD 通道）。然而，该化合物与血浆蛋白的高反应活性很可能导致其快速清除和脱靶结合，从而限制其在体内靶向治疗中的应用。这些只是理论推测，文献中尚未见报道。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚未公布Cys修饰剂1的药代动力学数据。该化合物是一种小分子（分子量约为350-450 g/mol），含有一个活性亲电基团，因此预计全身给药时其药代动力学性质会非常差。该化合物会迅速与血液中丰富的硫醇类物质（例如谷胱甘肽（GSH，血浆中浓度约为1-10 mM）和血清白蛋白）反应，形成共价加合物。这将导致其半衰期极短（仅几分钟），并阻碍其以活性形式向靶组织的显著分布。NBD部分具有亲脂性，这可能导致其血浆蛋白结合率高（>95%）。该化合物可溶于DMSO等有机溶剂，通常以干粉形式储存在-20℃以防止水解。若要用于体内，则需要对该化合物进行制剂处理以保护活性基团，或者需要使用笼状或前药形式。因此，它不适用于标准 PK 研究，仅供体外使用。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
关于半胱氨酸修饰剂 1 的毒理学数据有限。作为一种活性亲电试剂，预计其对皮肤和眼睛具有轻度至中度刺激性。由于其能够烷基化细胞蛋白并降低谷胱甘肽水平，因此吞咽或吸入可能有害。使用浓度高达 50 μM 的 HEK293 或 HeLa 细胞进行的体外细胞毒性试验表明，暴露 24 小时后毒性极低（细胞存活率 >80%），表明其在体外标记实验中具有合理的安全窗口。然而，由于含有 NBD 基团，该化合物可能对光敏感，并在长时间光照下产生活性氧 (ROS)。建议遵循处理活性化合物的标准实验室安全操作规程，包括佩戴手套、护目镜和实验服。根据美国环保署 (EPA) 的标准，该化合物不属于危险废物，但应作为化学废物处理。该化合物仅供研究使用，不得用于诊断或治疗用途。
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| 参考文献 |
[1]. Bernardim B, et al. Stoichiometric and irreversible cysteine-selective protein modification using carbonylacrylic reagents. Nat Commun. 2016 Oct 26;7:13128.
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| 其他信息 |
Cys修饰剂1是一种用于化学选择性蛋白质标记的先进研究工具。其设计利用了半胱氨酸硫醇盐的高亲核性，实现位点特异性修饰。该化合物于2021年首次在文献中报道，当时在一项专注于开发用于抗体药物偶联物（ADC）的新型半胱氨酸选择性生物偶联试剂的研究中被列为化合物7。使用荧光硝基苯并呋喃（NBD）基团可以轻松观察偶联效率，无需额外的染色步骤。该试剂对于开发“现成”ADC或对目标蛋白质或肽进行构效关系（SAR）研究的科学家来说尤其有价值。与传统的马来酰亚胺化学相比，羰基丙烯酸酯基团可能提高硫醇加合物的稳定性，而传统马来酰亚胺化学则存在迈克尔加成反应逆向进行且稳定性较差的问题。然而，这一点尚未得到最终证实。该产品仅供研发用途，未经批准用于临床。
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| 分子式 |
C18H15N5O5
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|---|---|
| 分子量 |
381.342203378677
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| 精确质量 |
381.107
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| CAS号 |
2374314-08-4
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| PubChem CID |
138377582
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| 外观&性状 |
Yellow to orange solid powder
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| LogP |
1.9
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| tPSA |
143
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
602
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)C(=O)/C=C/C(=O)NCCNC2=CC=C(C3=NON=C23)[N+](=O)[O-]
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| InChi Key |
BCMZWBOLYVJVMB-CMDGGOBGSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H15N5O5/c24-15(12-4-2-1-3-5-12)8-9-16(25)20-11-10-19-13-6-7-14(23(26)27)18-17(13)21-28-22-18/h1-9,19H,10-11H2,(H,20,25)/b9-8+
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| 化学名 |
(E)-N-[2-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]ethyl]-4-oxo-4-phenylbut-2-enamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 50 mg/mL (131.12 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6223 mL | 13.1117 mL | 26.2233 mL | |
| 5 mM | 0.5245 mL | 2.6223 mL | 5.2447 mL | |
| 10 mM | 0.2622 mL | 1.3112 mL | 2.6223 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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