MEL24

别名: MEL24; MEL-24 MEL-24
目录号: V61063 纯度: ≥98%
MEL24 是一种 Mdm2 E3 连接酶抑制剂,可降低细胞存活率并以 p53 依赖性方式增加对 DNA 损伤剂的敏感性,用于体外抗肿瘤研究。
MEL24 CAS号: 642072-48-8
产品类别: Others 12
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格
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产品描述
MEL24 是一种 Mdm2 E3 连接酶抑制剂,可降低细胞存活率并以 p53 依赖性方式增加对 DNA 损伤剂的敏感性,用于体外抗肿瘤研究。
MEL24 是一种靶向 MDM2-MDMX 异源复合物 E3 连接酶活性 的小分子抑制剂,与 MEL23 结构相关,在基于细胞的自身泛素化实验中 EC₅₀ 为 3.0 μg/mL(9.2 μM)。它在野生型 p53 细胞中增加 Mdm2 和 p53 蛋白水平,并在 p53 缺失细胞中稳定 Mdm2,表明具有 p53 非依赖性活性。MEL24 不诱导 p53 Ser15 磷酸化或 γH2A.X,证实其无基因毒性。在体外,它减少基于细胞系统中 Mdm2 和 p53 的泛素化,并阻止依托泊苷诱导的 MdmX 降解。MEL24 可作为研究 MDM2-MDMX 复合物 E3 连接酶功能及其 p53 非依赖性作用的化学探针。
生物活性&实验参考方法
靶点
MDM2-MDMX RING domain heterocomplex E3 ligase activity. MEL24 is structurally similar to MEL23 and was identified as a validated Mdm2 inhibitor. The compound has an EC50 of 3.0 μg/mL (9.2 μM) in the cell-based Mdm2(wt)-luciferase auto-ubiquitination assay [1].
体外研究 (In Vitro)
体外活性: 在使用Mdm2(wt)-荧光素酶和Mdm2(C464A)-荧光素酶稳定细胞系的细胞实验中,MEL24(5.33 μg/mL,2小时)增加了野生型而非突变型细胞系的发光,表明特异性抑制Mdm2 E3连接酶活性。EC50为3.0 μg/mL(9.2 μM)。在RKO和HCT116细胞中,MEL24(5 μg/mL,6小时)使Mdm2和p53蛋白水平增加至与MG132处理相似的水平。MEL24还阻止了MCF7细胞中依托泊苷诱导的MdmX降解 [1]。
在p53缺失的H1299细胞中,MEL24(5 μg/mL,6小时)稳定了Flag-Mdm2蛋白,而多柔比星无此效应,表明Mdm2的稳定化是p53非依赖性的。MEL24不诱导p53 Ser15磷酸化或组蛋白H2A.X Ser139磷酸化,表明无基因毒性应激反应。MEL24在RKO细胞(野生型p53)中增加p53水平,但在RKO-E6细胞(p53被HPV-E6降解)中无此效应,证实其对Mdm2介导的p53调节具有特异性 [1]。
体外泛素化实验显示,MEL24在基于细胞的系统中抑制Mdm2和p53的泛素化。在转染HA-泛素的Mdm2(wt)-荧光素酶细胞中,MEL24(10 μg/mL)显著减少了Mdm2-泛素复合物。在共转染Flag-Mdm2、p53和HA-泛素的H1299细胞中,MEL24(10 μg/mL)抑制了p53泛素化 [1]。
MEL24 的 ED50 值为 9.2 μM,作用于 293T 细胞 [1]。在 HCT116 细胞(p53 野生型)中,MEL24(15 μM,6 小时)可激活 p53,提高 Mdm2、p53 和 MdmX 水平,并防止内源性 MdmX 降解 [1]。
酶活实验
酶学实验: 体外泛素化实验使用纯化的全长Flag-Mdm2和HA-MdmX蛋白进行。反应体系含E1、UbcH5C、³²P标记的泛素和ATP。测试递增浓度的MEL24。产物通过SDS-PAGE分离,通过放射自显影分析。MEL24抑制了Mdm2-MdmX异源复合物的E3连接酶活性 [1]。
对于基于细胞的高通量筛选,将Mdm2(wt)-荧光素酶稳定的293T细胞以7,500个/孔接种于384孔板。24小时后,加入化合物(终浓度5.33 μg/mL)处理2小时,然后用发光缓冲液裂解细胞,在Victor3读板仪上读取发光值。使用Mdm2(C464A)-荧光素酶细胞进行反筛 [1]。
细胞实验
细胞实验: 对于Mdm2-荧光素酶实验,将稳定表达Mdm2(wt)-荧光素酶或Mdm2(C464A)-荧光素酶的293T细胞接种于384孔板(7,500个/孔)。24小时后,用MEL24处理细胞2小时,用发光缓冲液裂解,测量发光值。使用GraphPad Prism计算EC50 [1]。
对于Western blotting,在含50 mM Tris-HCl pH 7.5、200 mM NaCl、0.5% NP-40和蛋白酶抑制剂的缓冲液中裂解细胞(RKO、HCT116、H1299、MCF7)。蛋白通过SDS-PAGE分离,转移至硝酸纤维素膜,用抗Mdm2、p53、MdmX和肌动蛋白的抗体进行检测 [1]。
对于比较MEL23和MEL24的细胞活力实验,NALM6细胞用两种化合物的稀释系列处理72小时,加入刃天青2小时后在600 nm处测量OD值。MEL24在NALM6细胞中的IC50为4.58 μM(来自Frontiers in Oncology论文,非MEL24主要论文)[2]。
对于泛素化实验,用HA-泛素(5 μg)转染Mdm2(wt)-荧光素酶细胞。8小时后,用10 μg/mL MEL24或DMSO处理细胞16小时,然后额外用10 μM MG132处理3小时。裂解细胞,用抗HA亲和基质进行免疫沉淀,然后用抗Mdm2抗体进行Western blotting。对于p53泛素化,用Flag-Mdm2(5 μg)、p53(0.5 μg)和HA-泛素(2 μg)转染H1299细胞,然后进行类似处理 [1]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
MEL24在RKO细胞中5 μg/mL处理6小时不诱导p53 Ser15磷酸化或组蛋白H2A.X Ser139磷酸化,表明不引起基因毒性应激。在p53缺失的H1299细胞中,MEL24(5 μg/mL,6小时)稳定了Flag-Mdm2,且在正常培养条件下不影响细胞活力 [1]。
参考文献

[1]. Discovery of Mdm2-MdmX E3 ligase inhibitors using a cell-based ubiquitination assay. Cancer Discov. 2011 Sep;1(4):312-25.

[2]. MDM2 and MDMX promote ferroptosis by PPARα-mediated lipid remodeling. Genes Dev. 2020 Apr 1;34(7-8):526-543.

其他信息
MEL24是一种含有四氢-β-咔啉和巴比妥酸结构的小分子,与MEL23结构相似,取代基略有不同。它通过使用新型基于细胞的Mdm2自身泛素化实验从270,080个化合物中筛选鉴定为有效的Mdm2 E3连接酶抑制剂。四氢-β-咔啉和巴比妥酸结构对于活性都是必需的。MEL24与MEL23类似,优先抑制MDM2-MDMX异源复合物的E3连接酶活性。该化合物在野生型p53细胞中增加Mdm2和p53蛋白水平,在p53缺失细胞中增加Mdm2水平,表明具有p53非依赖性活性。MEL24不诱导DNA损伤反应标志物,这使其区别于多柔比星等基因毒性药物 [1][2]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C17H18N4O3
分子量
326.349823474884
精确质量
326.137
CAS号
642072-48-8
PubChem CID
71451689
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
0.5
tPSA
85.5
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
24
分子复杂度/Complexity
556
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1(=O)N(C)C(=O)C(C2C3=C(CCN2)C2=C(N3)C=CC=C2)C(=O)N1C
InChi Key
FOUOSAVQDWJOGI-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C17H18N4O3/c1-20-15(22)12(16(23)21(2)17(20)24)14-13-10(7-8-18-14)9-5-3-4-6-11(9)19-13/h3-6,12,14,18-19H,7-8H2,1-2H3
化学名
1,3-dimethyl-5-(2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indol-1-yl)-1,3-diazinane-2,4,6-trione
别名
MEL24; MEL-24
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.0642 mL 15.3210 mL 30.6419 mL
5 mM 0.6128 mL 3.0642 mL 6.1284 mL
10 mM 0.3064 mL 1.5321 mL 3.0642 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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