| 规格 | 价格 | |
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| 1mg | ||
| 5mg | ||
| 10mg | ||
| 50mg | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
MDM2-MDMX RING domain heterocomplex E3 ligase activity. MEL24 is structurally similar to MEL23 and was identified as a validated Mdm2 inhibitor. The compound has an EC50 of 3.0 μg/mL (9.2 μM) in the cell-based Mdm2(wt)-luciferase auto-ubiquitination assay [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性: 在使用Mdm2(wt)-荧光素酶和Mdm2(C464A)-荧光素酶稳定细胞系的细胞实验中,MEL24(5.33 μg/mL,2小时)增加了野生型而非突变型细胞系的发光,表明特异性抑制Mdm2 E3连接酶活性。EC50为3.0 μg/mL(9.2 μM)。在RKO和HCT116细胞中,MEL24(5 μg/mL,6小时)使Mdm2和p53蛋白水平增加至与MG132处理相似的水平。MEL24还阻止了MCF7细胞中依托泊苷诱导的MdmX降解 [1]。
在p53缺失的H1299细胞中,MEL24(5 μg/mL,6小时)稳定了Flag-Mdm2蛋白,而多柔比星无此效应,表明Mdm2的稳定化是p53非依赖性的。MEL24不诱导p53 Ser15磷酸化或组蛋白H2A.X Ser139磷酸化,表明无基因毒性应激反应。MEL24在RKO细胞(野生型p53)中增加p53水平,但在RKO-E6细胞(p53被HPV-E6降解)中无此效应,证实其对Mdm2介导的p53调节具有特异性 [1]。 体外泛素化实验显示,MEL24在基于细胞的系统中抑制Mdm2和p53的泛素化。在转染HA-泛素的Mdm2(wt)-荧光素酶细胞中,MEL24(10 μg/mL)显著减少了Mdm2-泛素复合物。在共转染Flag-Mdm2、p53和HA-泛素的H1299细胞中,MEL24(10 μg/mL)抑制了p53泛素化 [1]。 MEL24 的 ED50 值为 9.2 μM,作用于 293T 细胞 [1]。在 HCT116 细胞(p53 野生型)中,MEL24(15 μM,6 小时)可激活 p53,提高 Mdm2、p53 和 MdmX 水平,并防止内源性 MdmX 降解 [1]。 |
| 酶活实验 |
酶学实验: 体外泛素化实验使用纯化的全长Flag-Mdm2和HA-MdmX蛋白进行。反应体系含E1、UbcH5C、³²P标记的泛素和ATP。测试递增浓度的MEL24。产物通过SDS-PAGE分离,通过放射自显影分析。MEL24抑制了Mdm2-MdmX异源复合物的E3连接酶活性 [1]。
对于基于细胞的高通量筛选,将Mdm2(wt)-荧光素酶稳定的293T细胞以7,500个/孔接种于384孔板。24小时后,加入化合物(终浓度5.33 μg/mL)处理2小时,然后用发光缓冲液裂解细胞,在Victor3读板仪上读取发光值。使用Mdm2(C464A)-荧光素酶细胞进行反筛 [1]。 |
| 细胞实验 |
细胞实验: 对于Mdm2-荧光素酶实验,将稳定表达Mdm2(wt)-荧光素酶或Mdm2(C464A)-荧光素酶的293T细胞接种于384孔板(7,500个/孔)。24小时后,用MEL24处理细胞2小时,用发光缓冲液裂解,测量发光值。使用GraphPad Prism计算EC50 [1]。
对于Western blotting,在含50 mM Tris-HCl pH 7.5、200 mM NaCl、0.5% NP-40和蛋白酶抑制剂的缓冲液中裂解细胞(RKO、HCT116、H1299、MCF7)。蛋白通过SDS-PAGE分离,转移至硝酸纤维素膜,用抗Mdm2、p53、MdmX和肌动蛋白的抗体进行检测 [1]。 对于比较MEL23和MEL24的细胞活力实验,NALM6细胞用两种化合物的稀释系列处理72小时,加入刃天青2小时后在600 nm处测量OD值。MEL24在NALM6细胞中的IC50为4.58 μM(来自Frontiers in Oncology论文,非MEL24主要论文)[2]。 对于泛素化实验,用HA-泛素(5 μg)转染Mdm2(wt)-荧光素酶细胞。8小时后,用10 μg/mL MEL24或DMSO处理细胞16小时,然后额外用10 μM MG132处理3小时。裂解细胞,用抗HA亲和基质进行免疫沉淀,然后用抗Mdm2抗体进行Western blotting。对于p53泛素化,用Flag-Mdm2(5 μg)、p53(0.5 μg)和HA-泛素(2 μg)转染H1299细胞,然后进行类似处理 [1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
MEL24在RKO细胞中5 μg/mL处理6小时不诱导p53 Ser15磷酸化或组蛋白H2A.X Ser139磷酸化,表明不引起基因毒性应激。在p53缺失的H1299细胞中,MEL24(5 μg/mL,6小时)稳定了Flag-Mdm2,且在正常培养条件下不影响细胞活力 [1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MEL24是一种含有四氢-β-咔啉和巴比妥酸结构的小分子,与MEL23结构相似,取代基略有不同。它通过使用新型基于细胞的Mdm2自身泛素化实验从270,080个化合物中筛选鉴定为有效的Mdm2 E3连接酶抑制剂。四氢-β-咔啉和巴比妥酸结构对于活性都是必需的。MEL24与MEL23类似,优先抑制MDM2-MDMX异源复合物的E3连接酶活性。该化合物在野生型p53细胞中增加Mdm2和p53蛋白水平,在p53缺失细胞中增加Mdm2水平,表明具有p53非依赖性活性。MEL24不诱导DNA损伤反应标志物,这使其区别于多柔比星等基因毒性药物 [1][2]。
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| 分子式 |
C17H18N4O3
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|---|---|
| 分子量 |
326.349823474884
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| 精确质量 |
326.137
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| CAS号 |
642072-48-8
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| PubChem CID |
71451689
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
0.5
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| tPSA |
85.5
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
556
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(=O)N(C)C(=O)C(C2C3=C(CCN2)C2=C(N3)C=CC=C2)C(=O)N1C
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| InChi Key |
FOUOSAVQDWJOGI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H18N4O3/c1-20-15(22)12(16(23)21(2)17(20)24)14-13-10(7-8-18-14)9-5-3-4-6-11(9)19-13/h3-6,12,14,18-19H,7-8H2,1-2H3
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| 化学名 |
1,3-dimethyl-5-(2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indol-1-yl)-1,3-diazinane-2,4,6-trione
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| 别名 |
MEL24; MEL-24
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0642 mL | 15.3210 mL | 30.6419 mL | |
| 5 mM | 0.6128 mL | 3.0642 mL | 6.1284 mL | |
| 10 mM | 0.3064 mL | 1.5321 mL | 3.0642 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。