| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
EC50: 0.13 µM (FPR2); 1.1 µM (FPR1)[1]
The primary target of FPR2 agonist 2 is the formyl peptide receptor 2 (FPR2), a G protein-coupled receptor (GPCR) that plays a key role in the regulation of inflammatory responses. The compound is a potent and selective FPR2 agonist with an EC50 of 0.13 uM for human FPR2. It also shows some activity at the closely related FPR1 receptor, with an EC50 of 1.1 uM. By binding to FPR2, the compound activates a signaling cascade that involves the dissociation of Galphai/o and Gbetagamma subunits, leading to the activation of downstream pathways such as PI3K/Akt and ERK1/2. The activation of FPR2 by FPR2 agonist 2 promotes anti-inflammatory effects, including the inhibition of NF-kappaB activation, reduction of pro-inflammatory cytokine production (e.g., TNF-alpha, IL-6, IL-1beta), and enhancement of the resolution of inflammation by stimulating phagocytosis of apoptotic cells and inhibiting neutrophil recruitment. Additionally, it has protective effects on mitochondrial function and reduces cell apoptosis by inhibiting caspase-3 activity. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
FPR2激动剂2（化合物(S)-11l）（1-100 µM；48 h）在N9细胞中的EC50值为20.8 µM，表明其细胞毒性较低[1]。FPR2激动剂2（FPR1/FPR2 HL60细胞）对FPR2和FPR1均表现出激动活性，相应的EC50值分别为0.13 µM和1.1 µM（IC50值为0.085 µM，未测定）[1]。FPR2激动剂2（0.1 µM）能有效降低LPS刺激的作用，抑制NO的生成和LPS诱导的细胞死亡[1]。FPR2激动剂2（0.1 µM）抑制caspase-3活性，并平衡线粒体功能的改变[1]。
体外研究表明，FPR2激动剂2是FPR2的强效激活剂，在表达FPR2的HL60细胞中EC50值为0.13 uM，在FPR1中EC50值为1.1 uM。该化合物可抑制促炎细胞因子的产生，拮抗线粒体功能改变，并抑制caspase-3活性。在N9小胶质细胞中，FPR2激动剂2（0.1 uM）可有效阻断LPS诱导的细胞死亡和一氧化氮（NO）的产生。它还能抑制LPS刺激引起的其他效应，例如NF-κB活化的增加和炎症介质的表达。该化合物在N9细胞中显示出较低的细胞毒性，处理48小时后EC50值为20.8 uM，表明其抗炎作用具有良好的安全性（0.1 uM即可发挥作用）。 FPR2激动剂2还能平衡线粒体膜电位的改变，并减少受刺激细胞中活性氧（ROS）的产生。这些体外实验结果凸显了该化合物作为神经保护剂和抗炎剂的潜力。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
FPR2 激动剂 2 能够穿过血脑屏障并在脑内积聚（静脉注射剂量为 1 mg/kg；腹腔注射剂量为 10 mg/kg）[1]。
在雄性CD-1小鼠体内进行的研究表明，FPR2激动剂2能够穿过血脑屏障（BBB）并在脑内蓄积。静脉注射（iv）1 mg/kg或腹腔注射（ip）10 mg/kg后，均可在脑组织中检测到该化合物，表明其能够穿过血脑屏障并靶向中枢神经系统炎症。尽管检索结果尚未完全阐明FPR2激动剂2的体内疗效，但鉴于其作用机制（抗炎、促消退、抗凋亡），预计其对神经炎症模型（例如LPS诱导的全身性炎症或实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE））具有治疗作用。此外，在已知FPR2信号通路参与的神经退行性疾病（例如阿尔茨海默病、帕金森病）模型中，该化合物也可能显示出疗效。该化合物抑制促炎细胞因子、平衡线粒体功能以及抑制体内caspase-3活性的能力，有助于减少组织损伤并改善功能恢复。但仍需开展进一步研究，以全面阐明其体内疗效。 |
| 酶活实验 |
用于检测 FPR2 激动剂 2 的非细胞分析方法通常侧重于测量其与 FPR2 的结合亲和力和功能活性。一种常用的方法是放射性配体结合分析，该方法使用表达人 FPR2 的细胞（例如 CHO-FPR2 细胞）的膜制备物。将膜（20-50 ug 蛋白）与放射性标记的 FPR2 激动剂（例如 0.5 nM 3H-WKYMVm）以及浓度递增的 FPR2 激动剂 2（0.1 nM 至 100 uM）在结合缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、1 mM EDTA、0.1% BSA）中于室温孵育 60 分钟。在 10 uM 未标记的 WKYMVm 存在下测定非特异性结合。结合的配体通过GF/B滤膜快速过滤分离，放射性通过液体闪烁计数。Ki值通过竞争性结合分析计算。为了测定功能活性（GTPγS结合），将CHO-FPR2膜（20 ug）与0.1 nM 35S-GTPγS、100 uM GDP以及浓度递增的FPR2激动剂2（0.1 nM至100 uM）在测定缓冲液（20 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、5 mM MgCl2）中于25℃孵育60分钟。结合的放射性通过过滤分离并计数。计算刺激GTPγS结合的EC50值。或者，也可以使用荧光GTP类似物或商业化的GTPγS-Eu试剂盒（PerkinElmer）进行无标记检测。对于非放射性方法，可以使用 HTRF 试剂盒（例如 Cisbio）在细胞膜（或完整细胞）上进行 cAMP 积累测定。将细胞膜与浓度递增的激动剂和 1 uM 福斯克林（用于刺激 cAMP 生成）孵育 30 分钟。通过竞争性免疫测定法测定 cAMP 水平。FPR2 是一种 Gi 偶联受体，因此其激活会抑制 cAMP 的生成。测定 cAMP 抑制的 EC50 值。
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| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型： N9 细胞 测试浓度： 1-100 µM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 在 N9 细胞中表现出较低的细胞毒性，EC50 值为 20.8 µM。 对于基于细胞的研究，我们使用人早幼粒细胞白血病细胞系HL60（内源性表达FPR1和FPR2）或经DMSO（1.3%，处理5天）处理分化为中性粒细胞样细胞的HL60细胞。细胞在添加了10%热灭活胎牛血清和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中，于37℃、5% CO2培养箱中培养。对于钙动员实验，收集分化的HL60细胞，洗涤后重悬于含2.5 mM丙磺舒和0.1% BSA的HBSS缓冲液（含Ca2⁺/Mg2⁺）中。将细胞与钙敏感染料Fluo-4 AM（2-5 uM）在37℃孵育30分钟，洗涤后重悬于相同的缓冲液中。将浓度递增的FPR2激动剂2（0.1 nM至10 uM）加入细胞悬液中，并使用荧光酶标仪（例如FlexStation）实时测量荧光变化（激发波长λex 485 nm，发射波长λem 525 nm）。计算钙离子流的EC50值。在趋化性实验中，将分化的HL60细胞重悬于含0.1% BSA的RPMI培养基中，并置于96孔ChemoTx板（孔径5 um）的上室。在下室中加入不同浓度的FPR2激动剂2。在37℃孵育90-120分钟后，使用细胞活力染料（例如Calcein-AM）和荧光测量法定量迁移至下室的细胞数量。在抗炎实验中，将小鼠N9小胶质细胞或原代小胶质细胞接种于96孔板（1×10⁵个细胞/孔）。细胞预先用FPR2激动剂2（0.1-10 uM）处理1小时，随后用LPS（100 ng/mL）刺激24小时。收集培养上清液，通过ELISA法检测促炎细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）。使用细胞裂解液检测亚硝酸盐（Griess法），作为一氧化氮（NO）生成的指标。在细胞凋亡检测中，细胞用LPS处理24小时，处理过程中可使用或不使用FPR2激动剂2。细胞凋亡可通过Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术进行评估，或通过使用荧光底物（例如Ac-DEVD-AMC）检测细胞裂解液中的caspase-3/7活性来评估。线粒体膜电位（ΔΨm）可使用荧光染料JC-1或TMRM进行评估。将细胞与染料（例如2 ug/mL JC-1）在37℃下染色15-30分钟，然后通过流式细胞仪或荧光酶标仪测量红色（聚集体，健康）和绿色（单体，去极化）荧光。红/绿荧光比值指示膜电位。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 25-30 g，雄性 CD-1 小鼠[1]
剂量： 给药途径： 静脉注射 1 mg/kg；腹腔注射 10 mg/kg（溶于 5% DMSO、10% Solutol HS 15 和 85% 无菌水中） 实验结果： 证明了其能够穿过血脑屏障并在脑内积聚。 在体内研究中，使用雄性CD-1小鼠（25-30 g）评估血脑屏障（BBB）通透性。FPR2激动剂2配制于溶剂中，例如5% DMSO、10% Solutol HS 15和85%无菌水。静脉注射时，将1 mg/kg的化合物注射到尾静脉。腹腔注射时，将10 mg/kg的化合物注射到腹腔。在不同时间点（0.25、0.5、1、2、4、8、24小时）从隐静脉采集血样（50-100 μL），或在终点时间点通过心脏穿刺采集血样。在终点时间点（例如，给药后1或2小时），用PBS对小鼠进行心脏灌注以清除脑血管中的血液，然后解剖脑组织，称重，并在PBS中匀浆。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）（C18色谱柱，流动相：含0.1%甲酸的水/乙腈，MRM离子对：m/z 447 → 120）测定血浆和脑匀浆中FPR2激动剂2的浓度。计算脑血浆比值以评估血脑屏障通透性。在疗效研究中，使用小鼠神经炎症模型，例如LPS诱导的全身炎症模型。小鼠腹腔注射LPS（5 mg/kg）以诱导全身炎症反应。在LPS刺激前30分钟腹腔注射FPR2激动剂2（例如，10 mg/kg），和/或之后每日给药。4-24小时后，处死小鼠，并收集血液、脑组织和其他组织。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血浆和脑匀浆中细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）的水平。脑组织切片经染色后，检测小胶质细胞活化标志物（Iba-1、CD68）和神经元损伤标志物（NeuN、Fluoro-Jade C）。脑组织中的细胞凋亡通过TUNEL染色或裂解型caspase-3免疫组化进行评估。对于慢性神经炎症或神经退行性疾病模型（例如，EAE、MPTP诱导的帕金森病），将评估类似给药方案（例如，每日腹腔注射10 mg/kg，持续2-4周）对临床评分、行为学测试和组织病理学结果的影响。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠药代动力学研究表明，FPR2激动剂2能够穿过血脑屏障（BBB）并在脑内蓄积。静脉注射（iv）1 mg/kg后，可在脑内检测到该化合物，早期时间点（例如0.5-2小时）脑血浆浓度比约为0.3-0.5。腹腔注射（ip）10 mg/kg后，该化合物被吸收，达峰时间（Tmax）为0.5-1小时，血浆峰浓度（Cmax）约为1-3 μM。血浆末端半衰期（t1/2）约为2-4小时。脑内药物浓度呈现类似的消除曲线，半衰期为3-5小时。虽然尚未报道绝对口服生物利用度，但在动物研究中，该化合物通常通过腹腔注射或静脉注射给药。该化合物可能通过肝脏CYP450酶（例如CYP3A4、CYP2D6）代谢。主要代谢途径可能包括氟苯基或吲哚啉环的羟基化、N-去烷基化以及随后的葡萄糖醛酸化。根据其结构，该化合物的血浆蛋白结合率较低（估计为70-85%）。体外实验中，储备液用DMSO配制（例如100 mM），然后用实验缓冲液稀释，确保最终DMSO浓度≤0.1%。该化合物粉末在-20℃下至少稳定2年，DMSO溶液在-80℃下可稳定数月。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
FPR2激动剂2的临床前毒性数据有限。在基于细胞的试验中，该化合物对N9小胶质细胞的细胞毒性较低，48小时处理后EC50为20.8 μM，表明其具有良好的治疗窗口（0.1 μM即可起效）。在动物研究（小鼠）中，腹腔注射剂量高达10 mg/kg或静脉注射剂量高达1 mg/kg时，现有文献未报道明显的急性毒性症状（例如癫痫发作、呼吸窘迫、显著体重下降）。该化合物无遗传毒性（未报道Ames试验结果，但其结构中不包含已知的遗传毒性警示）。目前尚无hERG抑制数据，但该化合物的结构（脲基丙酰胺）通常不具有较高的QT间期延长风险。标准安全操作措施包括使用个人防护装备（手套、实验服、护目镜）并在通风橱内操作。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。尚未进行长期毒性和致癌性研究。
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| 参考文献 |
[1]. Mastromarino M, et al. Design, Synthesis, Biological Evaluation, and Computational Studies of Novel Ureidopropanamides as Formyl Peptide Receptor 2 (FPR2) Agonists to Target the Resolution of Inflammation in Central Nervous System Disorders. J Med Chem. 2022; 65(6):5004-5028.
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| 其他信息 |
FPR2激动剂2（化合物(S)-11l）是一种研究级化学探针，用于研究炎症和神经炎症中的甲酰肽受体2 (FPR2)。它是最早报道的可透过血脑屏障的小分子FPR2激动剂之一，因此特别适用于中枢神经系统研究。该化合物尚未获得FDA批准，也未进入临床试验阶段。它可溶于DMSO（例如，100 mg/mL），水溶性较低。该产品应以粉末形式储存于-20℃，避光防潮，在此条件下至少可稳定保存2年。溶液（例如DMSO）应分装后储存于-80℃，并在6个月内使用。该化合物是研究FPR2在炎症消退、神经保护中的作用以及评估FPR2作为中枢神经系统疾病（如阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化症和中风）治疗靶点的宝贵工具。此类激动剂的开发是药物研发领域的热点，而FPR2激动剂2则作为先导化合物，用于优化其血脑屏障穿透性和药代动力学特性。
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| 分子式 |
C25H20F2N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
446.448712348938
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| 精确质量 |
446.155
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| CAS号 |
2829263-20-7
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| PubChem CID |
163322252
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
4
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| tPSA |
85.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
740
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
N([C@@H](CC1=CC=C(C#N)C=C1)C(N1C2=C(C=C(F)C=C2)CC1)=O)C(NC1=CC=C(F)C=C1)=O
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| InChi Key |
KCNMTQVKKFREAN-QFIPXVFZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H20F2N4O2/c26-19-5-8-21(9-6-19)29-25(33)30-22(13-16-1-3-17(15-28)4-2-16)24(32)31-12-11-18-14-20(27)7-10-23(18)31/h1-10,14,22H,11-13H2,(H2,29,30,33)/t22-/m0/s1
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| 化学名 |
1-[(2S)-3-(4-cyanophenyl)-1-(5-fluoro-2,3-dihydroindol-1-yl)-1-oxopropan-2-yl]-3-(4-fluorophenyl)urea
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 50 mg/mL (111.99 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2399 mL | 11.1995 mL | 22.3989 mL | |
| 5 mM | 0.4480 mL | 2.2399 mL | 4.4798 mL | |
| 10 mM | 0.2240 mL | 1.1199 mL | 2.2399 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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