| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The primary target of PAR-4 (1-6) amide (human) is the protease-activated receptor 4 (PAR4), a G protein-coupled receptor (GPCR) expressed on platelets, endothelial cells, and other cell types. PAR4 is activated by proteolytic cleavage of its extracellular N-terminal domain by serine proteases such as thrombin, revealing a tethered ligand that binds to the receptor's second extracellular loop. The synthetic peptide PAR-4 (1-6) amide mimics this tethered ligand and directly activates the receptor without the need for proteolytic cleavage. Activation of PAR4 primarily triggers Galpha12/13 and Galphaq signaling pathways, leading to Rho activation, cytoskeletal rearrangement, and platelet shape change, as well as activation of phospholipase C (PLC) and subsequent calcium mobilization. In human platelets, PAR4 activation results in robust aggregation and secretion, particularly at high thrombin concentrations, and plays an important role in the amplification of the thrombin response. The amidation at the C-terminus increases the peptide's stability and resistance to carboxypeptidases.
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| 体外研究 (In Vitro) |
人 PAR-4 (1-6) 酰胺在 50 和 100 µM 时可诱导血小板聚集 [1]。
体外研究表明，浓度为 50 和 100 uM 的人源 PAR-4 (1-6) 酰胺可诱导血小板聚集。该肽以不依赖于凝血酶的方式激活 PAR4，使其成为研究 PAR4 在血小板功能中具体作用的宝贵工具。在富血小板血浆 (PRP) 或洗涤后的人血小板悬液中，添加 PAR-4 (1-6) 酰胺会导致血小板聚集呈浓度依赖性增加，这可通过光透射聚集法 (LTA) 测定。该聚集过程伴随着纤维蛋白原受体 αIIbβ3 (GPIIb/IIIa) 的激活（通过使用 PAC-1 抗体的流式细胞术测定）以及颗粒内容物（例如 ATP、5-羟色胺）的释放。该肽还能诱导血小板内钙离子浓度([Ca2+]i)升高，可通过Fluo-3或Fura-2荧光检测，并激活下游信号通路，包括Akt (Ser473)和ERK1/2 (Thr202/Tyr204)的磷酸化。与PAR1激活肽（例如SFLLRN）不同，PAR-4 (1-6)酰胺是一种较弱的激动剂，需要更高的浓度(50-100 uM)才能达到最大聚集，这反映了人血小板中PAR4的敏感性低于PAR1。该肽还能使PAR4脱敏，从而阻止凝血酶或其他PAR4激动剂的后续激活。在其他表达PAR4的细胞类型（例如内皮细胞）中，该肽可能诱导钙信号传导和屏障功能障碍。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于PAR-4 (1-6)酰胺肽是一种激动剂，静脉注射后可能诱发全身性血小板活化和血栓形成，因此通常不进行PAR-4 (1-6)酰胺肽的体内研究。它主要是一种用于研究血小板和PAR4生物学的体外工具。然而，出于研究目的，可以向动物（例如小鼠）静脉注射低剂量该肽，以研究其对体内血小板活化和血栓形成的影响。例如，在小鼠血栓模型（例如FeCl3诱导的颈动脉损伤）中，损伤前静脉注射PAR-4 (1-6)酰胺肽（例如1-10 mg/kg）可能加速血栓形成或缩短血管阻塞时间。或者，也可以在尾部出血模型中使用该肽来评估其对止血的影响。这些研究将有助于阐明PAR4在体内血栓形成和止血中的作用。然而，搜索结果中没有具体的体内数据。考虑到PAR4序列在不同物种间的差异（小鼠PAR4不能被人类PAR4激活肽激活），此类研究需要人源化PAR4小鼠模型或使用物种特异性PAR4激动剂。
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| 酶活实验 |
由于PAR-4 (1-6)酰胺是一种激活GPCR的肽激动剂，其活性通常在基于细胞的功能性检测中测定，因此非细胞检测方法并不常见。然而，可以使用放射性配体结合实验，该实验使用表达人PAR4的细胞膜（例如，瞬时转染PAR4的HEK293T细胞）。将细胞膜（20-50 ug蛋白）与放射性标记的PAR4拮抗剂（例如，如有条件，可使用3H-YD-3）和递增浓度的未标记PAR-4 (1-6)酰胺（0.1 nM至100 uM）在结合缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、10 mM MgCl2、1 mM EDTA、0.1% BSA）中于室温孵育60分钟。在 10 uM 未标记激动剂存在下测定非特异性结合。结合的配体通过 GF/C 滤膜（预先浸泡在 0.3% 聚乙烯亚胺中）快速过滤分离并计数。测定放射性配体置换的 IC50 值，并计算 Ki 值。或者，也可以通过荧光偏振 (FP) 或时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 来测量荧光标记肽（例如 GYPGQV-FAM）的直接结合。然而，这些检测方法并非常规方法。对于功能性无细胞检测，可以进行基于膜的 GTPγS 结合检测（细胞版本见下文）。将表达PAR4的细胞膜（20-30 ug）与0.1 nM 35S-GTPγS、100 uM GDP和不同浓度的PAR-4(1-6)酰胺（0.1-100 uM）在测定缓冲液（20 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、5 mM MgCl2）中于25℃孵育60分钟。通过过滤分离并计数结合的放射性物质。计算GTPγS结合刺激的EC50值。该测定方法直接测量激动剂结合受体对G蛋白的激活作用。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的研究，人血小板从新鲜全血中分离。血液收集于含3.2%柠檬酸钠的溶液（9:1）中，并在室温下以200g离心10分钟，得到富血小板血浆（PRP）。将PRP用自体贫血小板血浆（PPP，通过进一步以2000g离心10分钟获得）稀释，以达到标准血小板计数（例如，2.5×10⁸个血小板/mL）。对于洗涤血小板，将PRP用ACD酸化液（85 mM柠檬酸三钠、70 mM柠檬酸、110 mM葡萄糖，pH 6.5）酸化，并以1000g离心10分钟。将血小板沉淀重悬于含1 mM CaCl2和1 mM MgCl2的Tyrode氏缓冲液（pH 7.4）中。然后加入PAR-4(1-6)酰胺（例如，0、10、50、100、200、500 uM）激活血小板，并在发光聚集仪中于37℃下搅拌5-10分钟。聚集程度通过相对于纯血小板（PPP，100%透射率）的光透射率增加来测量。ATP释放采用荧光素/荧光素酶法（Chrono-Lume试剂）进行测量。对于钙动员实验，将洗涤后的血小板在37℃避光条件下用Fluo-3 AM（5 uM）或Fura-2 AM（2 uM）孵育30分钟，稀释至2×10⁸/mL，然后用肽刺激。荧光变化（Fluo-3的激发波长λex 485 nm，发射波长λem 525 nm）在荧光酶标仪或荧光分光光度计中测量。对于血小板活化的流式细胞术分析，将富血小板血浆（PRP）或洗涤后的血小板用肽刺激，然后用0.5%多聚甲醛固定，并用针对CD62P（P-选择素；用于检测α颗粒释放）、CD63（溶酶体膜蛋白）或PAC-1（活化的αIIbβ3）的荧光标记抗体进行染色。样品在流式细胞仪上进行分析。对于信号通路研究（例如，蛋白质印迹），将血小板用PAR-4(1-6)酰胺（例如，100 uM）激活0、1、2、5和10分钟，然后在含有磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液中裂解，并用针对磷酸化Akt（Ser473）、磷酸化ERK1/2（Thr202/Tyr204）或磷酸化PLCγ2（Tyr1217）的抗体进行免疫印迹分析。对于其他细胞类型（例如，瞬时表达人PAR4的HEK293T细胞）的研究，将细胞接种于96孔板（1×10⁴个细胞/孔），并用钙指示剂Fluo-4 AM（2 uM）孵育30分钟。随后加入递增浓度的肽，并使用酶标仪测量荧光强度（激发波长λex 485 nm，发射波长λem 525 nm）。计算钙动员的EC50值。PAR4介导的钙信号传导可被特异性PAR4拮抗剂（例如，YD-3、ML354）或靶向PAR4的siRNA阻断。
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| 动物实验 |
PAR-4 (1-6) 酰胺的体内实验方案尚未标准化，但出于研究目的，可将其应用于血栓动物模型。例如，在 FeCl3 诱导的小鼠颈动脉损伤模型中，将雄性 C57BL/6 小鼠（8-10 周龄，20-25 克）麻醉后暴露颈动脉。将浸有 10% FeCl3 溶液的一小块滤纸敷于动脉上 2-3 分钟，以诱导血管损伤和血栓形成。由于物种差异（小鼠 PAR4 的连接配体序列不同），人源 PAR-4 (1-6) 酰胺预计无法激活小鼠 PAR4。因此，需要使用表达人源 PAR4 的基因改造小鼠（人源化 PAR4 小鼠）。在该模型中，可在 FeCl3 损伤前 5-10 分钟通过静脉注射（iv）给予肽（例如，0.1-10 mg/kg）。使用多普勒血流探头监测血流，并测量血管闭塞时间（血流完全停止）。该肽可能缩短血管闭塞时间，表明其具有促血栓形成作用。或者，在尾部出血模型中，将小鼠麻醉，并切除尾尖 2 mm 长的组织。将尾部浸入 37℃ 的生理盐水中，并测量出血时间（出血停止的时间）。给予 PAR-4 (1-6) 酰胺可能缩短出血时间，表明其具有促止血作用。剂量将根据试点研究确定，通常为 0.1-5 mg/kg 静脉注射。这些研究并非旨在进行药物开发，而是为了研究 PAR4 在模拟人类 PAR4 生物学的系统中血栓形成中的作用。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于PAR-4 (1-6)酰胺是一种用于体外研究的研究肽，因此目前尚无其药代动力学数据。作为一种六肽（分子量618.68 Da），它易受血浆和组织中蛋白酶的快速蛋白水解降解。如果静脉注射，其在循环中的半衰期约为几分钟（例如2-10分钟）。该化合物很可能被外肽酶和内肽酶快速切割成较小的肽和游离氨基酸。C端酰胺基团可对羧肽酶提供一定的保护作用，但仍易受其他蛋白酶的降解。该肽的极性相对较强，口服生物利用度较低（<1-5%）。体外试验中，储备液用去离子水或DMSO配制（例如，100 mM）。冻干肽应储存于-20℃，避光防潮，至少可稳定保存2年。溶液形式的肽应分装后储存于-80℃，并在6个月内使用，以避免降解。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于PAR-4 (1-6)酰胺并非候选药物，因此目前尚无其临床前毒性数据。在基于细胞的检测（血小板、HEK293细胞）中，该肽在浓度高达500 μM时未表现出直接细胞毒性。它是PAR4的特异性激动剂，在所用浓度下不会激活其他PAR家族成员（PAR1、PAR2、PAR3）。如假设研究中所述，体内全身给药可能导致急性血小板活化、血小板减少症（血小板计数降低）以及潜在的血栓事件（例如肺栓塞、中风）。因此，该化合物不适用于人体。操作肽类化合物时应遵循标准安全防护措施（佩戴手套、实验服和护目镜）。该化合物仅供研究使用，不得用于人体或治疗用途。尚未进行遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。
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| 参考文献 |
[1]. Shimizu M, et al. Thrombin-induced platelet aggregation -effect of dabigatran using automated platelet aggregometry. Platelets. 2020;31(3):360-364.
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| 其他信息 |
PAR-4 (1-6) 酰胺（人源）是一种合成肽，是人蛋白酶激活受体 4 (PAR4) 的激动剂。它常被用作体外激活 PAR4 的研究工具，用于研究 PAR4 在血小板聚集、血栓形成和其他细胞过程中的作用。该肽也称为 GYPGQV-NH2，其序列来源于凝血酶切割后暴露的人 PAR4 受体的 N 端区域。它并非药物，也没有获得 FDA 批准的适应症。它可溶于水（例如，90 mg/mL）和 DMSO。该产品应以冻干粉末的形式储存在 -20℃ 的干燥容器中，避光防潮保存。在此条件下，它至少可稳定保存 2 年。溶液形式的产品应分装后储存在 -80℃，并在 6 个月内使用。这种肽是止血和血栓形成研究的重要工具。
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| 分子式 |
C28H42N8O8
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|---|---|
| 分子量 |
618.68
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| 精确质量 |
618.312
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| CAS号 |
245443-51-0
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| PubChem CID |
131851703
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
913.8±75.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
506.5±37.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.656
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| LogP |
0.98
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| tPSA |
269
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| 氢键供体(HBD)数目 |
8
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
16
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| 重原子数目 |
44
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| 分子复杂度/Complexity |
1060
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
C(N)(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC1=CC=C(O)C=C1)NC(=O)CN
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| InChi Key |
NIUWXNGGQOLCDN-XHOYROJHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H42N8O8/c1-15(2)24(25(31)41)35-26(42)18(9-10-21(30)38)33-23(40)14-32-27(43)20-4-3-11-36(20)28(44)19(34-22(39)13-29)12-16-5-7-17(37)8-6-16/h5-8,15,18-20,24,37H,3-4,9-14,29H2,1-2H3,(H2,30,38)(H2,31,41)(H,32,43)(H,33,40)(H,34,39)(H,35,42)/t18-,19-,20-,24-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]-N-[(2S)-1-amino-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]pentanediamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O: 100 mg/mL (161.63 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6163 mL | 8.0817 mL | 16.1634 mL | |
| 5 mM | 0.3233 mL | 1.6163 mL | 3.2327 mL | |
| 10 mM | 0.1616 mL | 0.8082 mL | 1.6163 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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