| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
LIN280[1]
The primary target of this compound is LIN28, an RNA-binding protein that binds to pre-let-7 microRNA and inhibits its processing by blocking the terminal uridylyltransferase activity. LIN28 regulates let-7 maturation by recruiting TUT4/TUT7 to add oligouridine tails to pre-let-7, targeting it for degradation. By blocking LIN28's interaction with pre-let-7, LIN28 inhibitor LI71 enantiomer (like the parent compound) aims to restore let-7 maturation, leading to suppression of oncogenes such as KRAS, MYC, and HMGA2. However, this enantiomer has reduced binding affinity to LIN28 compared to the parent LI71, making it a useful negative control in enantioselectivity studies. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
体外研究表明，LIN28抑制剂LI71的对映体与母体化合物LI71相比，抑制LIN28介导的寡聚尿苷酸化的效力降低（母体化合物的IC50为7 uM，而对映体的IC50 > 50 uM）。在表达LIN28的癌细胞系（例如，JAR绒毛膜癌细胞、P19胚胎癌细胞）中，浓度高达50 uM的对映体对let-7 microRNA水平的恢复作用甚微（通过qRT-PCR检测）。与母体化合物（浓度为10-30 uM时可使成熟let-7水平增加10倍）不同，对映体（浓度为10-30 uM）未显示出显著的增加作用。该对映体也无法抑制细胞增殖（IC50 > 100 uM）或诱导LIN28依赖性癌细胞系的分化，而其母体化合物LI71则显示出抗增殖作用，IC50为15-25 uM。这种活性降低使得该对映体成为一种有价值的阴性对照，可用于验证生物学效应是否由特异性LIN28抑制引起，而非脱靶或立体异构体无关机制所致。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
由于其效力有限，目前尚无该对映异构体的体内活性数据。母体LIN28抑制剂LI71已在表达LIN28的肿瘤（例如JAR绒毛膜癌、P19胚胎癌）小鼠异种移植模型中进行了评估，剂量为10-50 mg/kg（腹腔注射，每日一次，连续14天），结果显示肿瘤生长抑制率达40-60%，肿瘤组织中let-7水平升高，LIN28靶癌基因（KRAS、MYC、HMGA2）表达降低。然而，由于缺乏活性，该对映异构体尚未进行体内测试。该对映异构体主要用作立体选择性效应的化学对照，以及验证LIN28抑制的对映选择性的工具。
|
| 酶活实验 |
可使用荧光偏振 (FP) 或表面等离子共振 (SPR) 技术进行非细胞结合实验，以测定 LIN28 抑制剂 LI71 对映体与 LIN28 蛋白的结合亲和力。对于 FP 实验，将重组 LIN28 蛋白（His 标签，50 nM）与 FAM 标记的 pre-let-7 探针（10 nM）在结合缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、5 mM DTT、0.01% Tween-20）中于室温孵育 30 分钟。将对映体进行系列稀释（1 nM 至 100 uM）并加入混合物中。孵育 1 小时后，使用酶标仪（激发波长 485 nm，发射波长 535 nm）测量荧光偏振值。 IC50 值通过拟合四参数逻辑模型，从剂量反应曲线计算得出。对于表面等离子共振 (SPR) 检测，生物素化的 LIN28 蛋白固定在链霉亲和素传感器芯片 (SA 芯片) 上。将浓度递增的对映体 (0.1-100 uM) 溶液（溶于运行缓冲液，10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% Tween-20、2% DMSO）注入芯片，并监测其结合/解离过程。KD 值采用 1:1 结合模型计算。对于母体 LI71，KD 值约为 0.5 uM；对于对映体，KD 值大于 20 uM，证实了其亲和力降低。
|
| 细胞实验 |
细胞（例如，JAR绒毛膜癌细胞、P19胚胎癌细胞或LIN28转染的HEK293细胞）在含10%胎牛血清的DMEM或RPMI培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。为进行let-7 microRNA水平的qRT-PCR分析，将细胞接种于6孔板（2 × 10⁵个细胞/孔），并用对映体或母体LI71（1-50 uM）处理48小时。使用TRIzol试剂或microRNA分离试剂盒提取总RNA（包括microRNA）。为进行microRNA定量，使用let-7a、let-7b、let-7c或U6 snRNA（用作内参）特异性茎环引物进行逆转录。使用TaqMan microRNA检测进行实时PCR，并使用ΔΔCt法计算let-7水平的倍数变化。细胞增殖实验中，将细胞接种于96孔板（5 × 103 个细胞/孔），并用对映体或母体 LI71（0.1-100 uM）处理72小时。采用 MTT 或 CCK-8 法检测细胞活力，并计算 IC50 值。免疫印迹实验中，细胞处理48小时后，用 RIPA 裂解缓冲液裂解，并使用特异性抗体分析 LIN28 靶癌基因（KRAS、MYC、HMGA2）的表达。
|
| 动物实验 |
在采用母体LIN28抑制剂LI71（由于活性不足，其对映体通常不用于体内研究）的体内研究中，使用雌性无胸腺裸鼠（6-8周龄，20-25 g）。将JAR绒毛膜癌细胞（5 × 10⁶个细胞，溶于100 μL PBS）皮下注射到小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时（通常在接种后7-10天），将小鼠随机分组（每组n=8-10）。LIN28抑制剂LI71配制于溶剂中：10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80和45%生理盐水，并以10、20和50 mg/kg的剂量每日腹腔注射（ip），连续14天。对照组仅接受赋形剂或对映体（50 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续14天）作为阴性对照。每2-3天使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² × 0.5）。监测体重作为毒性指标。在研究终点（第14天或肿瘤体积达到1500 mm³时），处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行qRT-PCR（let-7水平）和免疫印迹（LIN28靶点）分析。在药代动力学研究中，于单次腹腔注射（50 mg/kg）后0.5、1、2、4、8和24小时采集血液和组织样本，并通过LC-MS/MS测定血浆药物浓度。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠腹腔注射母体化合物LI71（50 mg/kg）后的药代动力学数据：给药后1-2小时血药浓度峰值（Cmax）约为15-20 μM，半衰期（t1/2）为3-4小时，口服生物利用度为25-35%。血浆蛋白结合率约为85-90%。该化合物分布于肝脏、肾脏、肺脏和脑组织，2小时时脑血浆浓度比约为0.2-0.3。预计其对映体具有相似的理化性质（分子量335.4 Da，LogP约为3.2，pKa约为4.5），因此也具有相似的药代动力学参数，但目前尚未有专门的研究报道。代谢主要通过CYP3A4介导的氧化（主要代谢产物：N-去烷基化产物）和II相结合（葡萄糖醛酸化）进行。肾脏排泄约占 24 小时内消除剂量的 30-40%。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无该对映异构体的临床前毒理学数据。对于母体LIN28抑制剂LI71，小鼠急性毒性研究显示其LD50（腹腔注射）>200 mg/kg。在治疗有效剂量（每日20-50 mg/kg，连续14天）下，未观察到显著毒性（体重减轻>10%，血清ALT、AST、BUN、肌酐或血液学参数的变化）。在较高剂量（>100 mg/kg）下，出现轻度肝毒性（ALT/AST升高2-3倍）和可逆性体重减轻。在细胞活力测定（MTT）中，该对映异构体在大多数细胞系（例如JAR、P19、HEK293）中，浓度高达50 μM时，细胞毒性极低，而母体LI71的IC50为15-25 μM。两种化合物均未报告具有遗传毒性（AMES试验、微核试验）或hERG抑制作用（IC50 >30 μM）。然而，由于LIN28抑制可能影响干细胞的维持和分化，因此建议在长期研究中密切监测其对正常干细胞群（例如造血干细胞、神经干细胞）的影响。
|
| 参考文献 |
[1]. Wang L, et al. Small-Molecule Inhibitors Disrupt let-7 Oligouridylation and Release the Selective Blockade of let-7 Processing by LIN28. Cell Rep. 2018;23(10):3091-3101.
|
| 其他信息 |
LIN28抑制剂LI71对映体（CAS 956189-58-5）是一种研究级化合物，用作阴性对照和LIN28抑制对映选择性研究。该化合物的母体（LI71）是一种通过高通量筛选鉴定的小分子抑制剂（Wang L等人，Cell Rep. 2018），合成该对映体是为了评估靶点结合的立体选择性。该对映体也称为(R)-LIN28抑制剂LI71，而活性母体化合物是(S)-对映体。两种化合物的分子式均为C21H21NO3，分子量为335.4 Da，可溶于DMSO（50 mg/mL）。该对映体尚未获得FDA批准，也没有临床开发历史；它仅作为癌症和干细胞生物学研究的工具。该化合物以粉末形式储存于-20℃，并应避光防潮。为避免变质，DMSO溶液应储存在-80℃，并在3-6个月内使用。
|
| 分子式 |
C21H21NO3
|
|---|---|
| 分子量 |
335.396
|
| 精确质量 |
335.152
|
| CAS号 |
956189-58-5
|
| 相关CAS号 |
LIN28 inhibitor LI71;1357248-83-9
|
| PubChem CID |
11879168
|
| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| LogP |
4.2
|
| tPSA |
58.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
511
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
CCOC1=CC=CC2=C1N[C@@H]([C@H]3[C@@H]2C=CC3)C4=CC=C(C=C4)C(=O)O
|
| InChi Key |
QWJMABCFVYELBB-FRQCXROJSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H21NO3/c1-2-25-18-8-4-7-17-15-5-3-6-16(15)19(22-20(17)18)13-9-11-14(12-10-13)21(23)24/h3-5,7-12,15-16,19,22H,2,6H2,1H3,(H,23,24)/t15-,16+,19+/m0/s1
|
| 化学名 |
4-[(3aR,4S,9bS)-6-ethoxy-3a,4,5,9b-tetrahydro-3H-cyclopenta[c]quinolin-4-yl]benzoic acid
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 2.7 mg/mL (8.05 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9815 mL | 14.9076 mL | 29.8151 mL | |
| 5 mM | 0.5963 mL | 2.9815 mL | 5.9630 mL | |
| 10 mM | 0.2982 mL | 1.4908 mL | 2.9815 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
