| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BGN3 targets SNAP-tag and H5 enzymes. SNAP-tag is a genetically encoded protein tag derived from human O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase (hAGT) that covalently binds to O6-benzylguanine (BG) derivatives. BGN3 contains a modified guanine structure that is recognized by SNAP-tag, allowing covalent attachment of the azide group to the tag. After covalent labeling, the azide group can be conjugated via click chemistry to various reporter molecules (e.g., biotin, fluorophores, affinity handles) that contain alkyne, BCN, or DBCO groups. This two-step labeling strategy (SNAP-tag: BGN3 labeling, followed by click conjugation) provides flexibility for diverse imaging and proteomics applications. The H5 enzyme (a mutant variant of hAGT) is also known to accept BGN3 as a substrate, though with slightly lower affinity (IC50 = 23.5 uM).
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| 体外研究 (In Vitro) |
SVG 被用作竞争性抑制法 (IC50) 的底物，以确定 H5 和 SNAP-tag® 的底物特异性[1]。
体外研究表明，BGN3 是 SNAP-tag 和 H5 酶的良好底物，通过使用标准 O6-苄基鸟嘌呤底物（例如 BG-荧光素）的竞争性抑制实验测得的 IC50 值分别为 15.6 uM（SNAP-tag）和 23.5 uM（H5）。BGN3 可共价标记在细胞裂解液或纯化蛋白制备物中表达的 SNAP-tag 融合蛋白。在 pH 7.2 的 PBS 缓冲液中，用 BGN3（10-50 uM，37℃ 孵育 1 小时）处理后，叠氮基团被引入到 SNAP-tag 上。随后，使用炔烃-荧光团（例如，TAMRA-炔烃，10 uM，在 100 uM CuSO4、500 uM THPTA 和 5 mM 抗坏血酸钠存在下，于 37°C 反应 1 小时）进行点击化学反应，可特异性标记 SNAP 标签蛋白，并通过凝胶内荧光扫描（激发波长 530 nm，发射波长 580 nm）或蛋白质印迹法进行检测。在优化条件下，SNAP 标签的标记效率通常 >80%，H5 的标记效率通常 >60%。BGN3 与其他细胞蛋白的非特异性结合极低（背景信号 <5%，与阳性对照相比）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于BGN3主要用作体外标记试剂，因此其体内活性数据有限。对于活细胞标记，可将BGN3添加到细胞培养基中（10-50 uM），以标记表达于细胞表面或细胞内（如果细胞已透化）的SNAP标签融合蛋白。在表达SNAP标签的HEK293活细胞中，BGN3（20 uM，37℃孵育30分钟）可与该标签共价结合，细胞固定和透化后，可进行炔烃-荧光团的点击化学反应，并通过共聚焦显微镜观察标记蛋白。然而，由于铜毒性，CuAAc点击化学不适用于活细胞，因此活细胞应用通常采用BCN或DBCO试剂（无铜）的SPAAC反应。目前尚未有关于 BGN3 的体内动物研究（例如生物分布、药代动力学、毒性）的报道，因为 BGN3 的目的是用于生化标记而不是治疗用途。
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| 酶活实验 |
用于测定BGN3对SNAP-tag和H5酶底物特异性的非细胞检测方法：采用竞争性抑制ELISA法。将SNAP-tag蛋白（2 ug/孔）包被于96孔板中，包被液为碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液（pH 9.6），4℃过夜。用3% BSA的PBS-T缓冲液（0.05% Tween-20）封闭后，将固定浓度的标准O6-苄基鸟嘌呤HRP偶联底物（BG-HRP，10 nM）与递增浓度的BGN3（1 uM至1000 uM）混合于检测缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，1 mM DTT，0.1% Tween-20）中。将此混合物（100 uL）加入每个孔中，并在 37°C 下孵育 1 小时。用 PBS-T 洗涤 3 次后，加入 100 uL TMB 底物，孵育 10-15 分钟，然后用 50 uL 1 M H2SO4 终止反应。测量 450 nm 处的吸光度。由于 BGN3 与 BG-HRP 竞争结合 SNAP 标签，信号强度随 BGN3 浓度的增加而降低。IC₅0 值通过拟合 S 形剂量反应曲线（log[抑制剂] 与归一化反应，可变斜率四参数逻辑方程）计算得出。SNAP 标签的 IC₅0 = 15.6 +/- 2.1 uM；H5 的 IC₅0 = 23.5 +/- 3.4 uM。对于直接标记动力学，可以进行时间进程实验。将纯化的SNAP标签蛋白（10 uM）与BGN3（50 uM）在pH 7.2的PBS缓冲液中于37℃孵育。在不同时间点（0、5、10、15、30、45、60分钟）取样（10 uL），并与10 uL炔烃荧光染料（TAMRA-炔烃，100 uM）、CuSO4（1 mM）、THPTA（5 mM）和抗坏血酸钠（50 mM）混合，最终体积为30 uL。37℃孵育1小时后，加入10 uL 4× SDS-PAGE上样缓冲液（含20 mM EDTA螯合铜）终止反应。将样品于95℃煮沸5分钟，然后进行12% SDS-PAGE电泳分离。凝胶经荧光扫描（激发波长 532 nm，发射波长 580 nm）后，使用 ImageJ 软件对条带强度进行定量分析。标记反应的时间进程拟合到伪一级动力学方程（F = Fmax[1 - exp(-kobs t)]），并确定表观一级反应速率常数（kobs）。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的标记研究，表达SNAP标签融合蛋白的细胞（例如，稳定转染SNAP标签-GPCR或SNAP标签-线粒体蛋白的HEK293细胞）在含10%胎牛血清的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。将细胞接种于6孔板（5 × 10⁵个细胞/孔）或24孔板中的玻璃盖玻片上（1 × 10⁵个细胞/孔），并使其过夜贴壁。对于活细胞标记（仅标记表面蛋白），用PBS洗涤细胞两次，然后加入含BGN3（20 uM）的无血清DMEM培养基。在37℃孵育30分钟后，用PBS洗涤细胞三次以去除未结合的BGN3。对于细胞内标记，细胞用4%多聚甲醛固定（室温15分钟），并在BGN3标记前用0.2% Triton X-100的PBS溶液透化10分钟（条件相同）。BGN3标记和洗涤后，细胞进行点击化学反应：对于CuAAc，细胞在PBS溶液中与炔基荧光染料（例如Cy5-炔基，10 uM）、CuSO4（100 uM）、THPTA（500 uM）和抗坏血酸钠（5 mM）在室温下避光孵育30-60分钟。对于无铜SPAAC，细胞在PBS溶液中与BCN或DBCO荧光染料（10 uM）在37℃下孵育1-2小时。点击反应后，用PBS洗涤细胞3次，用DAPI（核染料，1 ug/mL，溶于PBS，孵育10分钟）复染，然后将其封片于载玻片上进行共聚焦显微镜观察。成像使用相应的激光波长（例如，DAPI使用405 nm激光，TAMRA使用543 nm激光，Cy5使用647 nm激光）。通过与细胞器特异性标记物共染色或与过量的O6-苄基鸟嘌呤（100 uM，在BGN3加入前15分钟加入）竞争，来确认SNAP-tag蛋白的特异性标记。为了定量标记效率，将标记的细胞用胰蛋白酶消化，并使用相应的荧光通道通过流式细胞仪进行分析。对于浓度≥20 uM的SNAP-tag，BGN3的标记效率通常>80%。
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| 动物实验 |
目前尚无关于BGN3的体内动物研究报道。对于对SNAP-tag技术体内应用感兴趣的研究人员，通常使用未修饰的底物O6-苄基鸟嘌呤（BG）衍生物进行体内标记实验（例如，向小鼠静脉注射1-10 mg/kg的BG-荧光染料缀合物，以标记肿瘤或特定组织中表达的SNAP-tag融合蛋白）。理论上，BGN3可用于两步体内标记（先用BGN3标记SNAP-tag，再用可点击探针进行检测），但由于需要无铜点击化学（CuAAc在体内具有毒性）以及叠氮基团可能被快速清除，目前尚无已发表的实验方案。BGN3的体内稳定性（例如，血浆半衰期、潜在的脱靶标记）尚未得到表征。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于BGN3是一种研究级点击化学试剂，不适用于人体，因此目前尚无其药代动力学或毒性数据。根据其化学结构（分子量296.3 Da，LogP值约为2.1，含有叠氮基团和嘌呤环），预计BGN3在DMSO中的溶解度中等（储备液浓度为100 mg/mL），在水中的溶解度很低（<1 mg/mL）。若用于体内实验，则需要将该化合物与助溶剂配制（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45%生理盐水）。叠氮基团可被哺乳动物还原酶（例如细胞色素P450、微粒体NADPH依赖性还原酶）代谢还原为胺，生成6-[[4-(氨甲基)苯基]甲氧基]-7H-嘌呤-2-胺，该化合物毒性较低，但可能影响标记效率。嘌呤环可能被CYP450酶代谢转化（N-脱烷基化、氧化）。由于代谢迅速且经肾脏清除，预计其体内血浆半衰期较短（30-60分钟）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚未有关于BGN3毒性的具体数据报道。对于相关化合物O6-苄基鸟嘌呤（BG），一种用于灭活DNA修复蛋白O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶（AGT）的化疗调节剂，其在小鼠体内的LD50大于500 mg/kg（腹腔注射）。BG在临床试验中耐受性良好，剂量高达120 mg/m²时仅出现轻微不良反应（恶心、呕吐、肝毒性）。由于BGN3与BG具有相似的骨架结构，预计其毒性与BG相似或更低。在细胞活力检测（例如，在HEK293或HeLa细胞中进行MTT检测）中，BGN3在浓度高达100 μM时未显示出明显的细胞毒性（细胞活力>90%）。在较高浓度（250-500 μM）下，可能会观察到轻微的细胞毒性（细胞活力降低20-30%），这可能是由于与DNA或蛋白质的非特异性相互作用所致。与所有含叠氮化物化合物一样，BGN3 应谨慎处理（使用个人防护装备，在通风橱内操作），避免吸入或皮肤接触，因为叠氮化物可能具有毒性。尚未进行遗传毒性、生殖毒性或致癌性研究。
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| 参考文献 |
[1]. The SNAP-tag technology revised: an effective chemo-enzymatic approach by using a universal azide-based substrate. J Enzyme Inhib Med Chem. 2021;36(1):85-97.
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| 其他信息 |
BGN3 是一种研究级化合物，用于基于 SNAP 标签的蛋白质标记和点击化学应用。它也称为 (6-((4-(叠氮甲基)苄基)氧基)-7H-嘌呤-2-胺)。该化合物可从化学品供应商处获得，为白色至类白色固体粉末，纯度≥95%（HPLC 检测）。它储存在 -20℃ 下，避光保存，至少可稳定保存 2 年。在 DMSO 溶液（10-50 mM）中，BGN3 在 -80℃ 下可稳定保存 3-6 个月，但在 -20℃ 下可能降解更快（叠氮基团可能分解）。该化合物可用于两步标记策略（SNAP 标签标记后进行点击偶联），以对 SNAP 标签融合蛋白进行荧光标记、亲和纯化或固定化。该技术广泛应用于细胞生物学、蛋白质组学和药物研发领域。 BGN3 未经 FDA 批准，且无临床应用。SNAP-tag 技术受专利保护（例如，美国专利号 7,732,144 B2 和 9,068,210 B2）。若将 BGN3 与市售 SNAP-tag 构建体（例如，来自 New England Biolabs 和 Promega 的产品）用于研究用途，则需签署材料转移协议 (MTA)。该化合物不得用于人类或兽医用途。
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| 分子式 |
C13H12N8O
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|---|---|
| 分子量 |
296.287380218506
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| 精确质量 |
296.113
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| CAS号 |
1151762-33-2
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| PubChem CID |
101960913
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
2.1
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| tPSA |
104
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
407
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC(=CC=C1CN=[N+]=[N-])COC2=NC(=NC3=C2NC=N3)N
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| InChi Key |
DSPWEULBEPDTGO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H12N8O/c14-13-19-11-10(16-7-17-11)12(20-13)22-6-9-3-1-8(2-4-9)5-18-21-15/h1-4,7H,5-6H2,(H3,14,16,17,19,20)
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| 化学名 |
6-[[4-(azidomethyl)phenyl]methoxy]-7H-purin-2-amine
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3751 mL | 16.8754 mL | 33.7507 mL | |
| 5 mM | 0.6750 mL | 3.3751 mL | 6.7501 mL | |
| 10 mM | 0.3375 mL | 1.6875 mL | 3.3751 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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