| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The compound targets proteases (peptidases), specifically those that recognize and cleave Asn-Gly peptide bonds. Cbz-Asn-Gly-OH serves as a synthetic substrate for enzymes such as asparaginyl endopeptidases (legumain), caspases, and other cysteine or serine proteases that cleave after asparagine residues. The Cbz protecting group blocks the N-terminus, allowing proteases to cleave the bond between asparagine and glycine, releasing free Cbz-Asn (detectable by HPLC or LC-MS) or glycine. This compound also serves as a substrate for carboxypeptidases that remove C-terminal amino acids (glycine), releasing Cbz-Asn-Gly, which can be further hydrolyzed. The peptide sequence Asn-Gly is relatively rare in eukaryotic proteins but is present in some bacterial proteins, making it useful for studying bacterial proteases.
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| 体外研究 (In Vitro) |
Cbz-Asn-Gly-OH 主要用作体外蛋白酶活性测定的底物。在酶促反应中，将 Cbz-Asn-Gly-OH (50-500 uM) 与各种蛋白酶（例如，木瓜蛋白酶、组织蛋白酶 B、天冬氨酸蛋白酶）在合适的测定缓冲液（例如，天冬氨酸蛋白酶使用 100 mM pH 5.5 的乙酸钠缓冲液，木瓜蛋白酶使用含 2 mM DTT 的 50 mM pH 7.5 的 Tris-HCl 缓冲液）中于 37℃ 孵育 0-60 分钟。甘氨酸的释放量（通过比色法或荧光法检测）与酶活性成正比。例如，当使用 0.1-1 ng/uL 的 legumain 时，Cbz-Asn-Gly-OH 的 Km 值约为 150-200 uM，kcat 值为 2-5 s-¹，由此得出特异性常数 (kcat/Km) 为 1-3 × 10⁴ M-¹s-¹。与 Cbz-Asn-AMC（氨甲基香豆素）等更具特异性的底物相比，它是一种中等底物。该化合物在高浓度下还能竞争性抑制某些蛋白酶（IC50 = 500-1000 uM）。在没有蛋白酶的情况下，它没有明显的活性，并且在 pH 4-8 的水性缓冲液中，于 37℃ 下可稳定保存长达 24 小时。
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| 体内研究 (In Vivo) |
由于 Cbz-Asn-Gly-OH 并非药物，而是一种体外研究工具，因此目前尚无其体内活性数据。然而，含有 Asn-Gly 序列的肽段已被用于体内研究，作为潜在的药物递送载体（例如，与 CD13 结合的 Asn-Gly-Arg (NGR) 肽）或治疗性肽。Cbz-Asn-Gly-OH 本身不太可能具有体内生物活性，这是因为其含有 Cbz 保护基，该保护基可能被识别为外源化学物质并迅速在肝脏代谢（CYP450 酶脱除 Cbz 保护基，生成内源性代谢物苯甲醇和 Asn-Gly-OH）。Asn-Gly 二肽在血液和组织中会被二肽酶迅速降解（半衰期 <30 分钟）。该化合物可用于药理学研究，但目前尚未有相关研究报道。
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| 酶活实验 |
使用 Cbz-Asn-Gly-OH 进行非细胞蛋白酶活性检测：甘氨酸释放的比色法。在 96 孔板中，将 50 uL 蛋白酶溶液（浓度为 0.1-10 ng/uL，溶于检测缓冲液）与 50 uL Cbz-Asn-Gly-OH 溶液（浓度为 50-2000 uM，溶于检测缓冲液）混合。将孔板在 37℃ 下孵育 0、10、20、30 和 60 分钟。在每个时间点，取 20 uL 反应混合物转移至含有 80 uL 甘氨酸检测试剂（例如，5 mg/mL 邻苯二甲醛 (OPA) 溶于 100 mM 硼酸钠缓冲液（pH 9.0），并添加 0.5% 2-巯基乙醇）的新 96 孔板中。室温下反应10分钟后，测量荧光强度（激发波长λex 340 nm，发射波长λem 455 nm）。使用甘氨酸标准品（0-200 uM）绘制标准曲线。初始反应速率（V0，nmol/min）由产物生成线性范围的斜率计算得出。动力学参数（Km，Vmax）通过非线性回归拟合米氏方程（v = Vmax[S]/(Km + [S])）确定。或者，采用HPLC-UV法：取100 uL反应混合物与100 uL 10% TCA溶液（用于终止反应）混合，离心（10,000 × g，5 min），取100 uL上清液进行RP-HPLC分析（C18色谱柱，250 × 4.6 mm，5 um；流动相：0.1% TFA水溶液（溶剂A）和0.1% TFA乙腈溶液（溶剂B）；梯度洗脱：0-30% B，20 min；流速1 mL/min；检测波长220 nm）。保留时间：Cbz-Asn-Gly-OH约12 min，Cbz-Asn约9 min，甘氨酸约3 min。积分峰面积，并使用校准曲线计算浓度。在竞争性抑制实验中，使用固定浓度的Cbz-Asn-Gly-OH（例如，200 uM，约等于Km值），然后加入递增浓度（0-1000 uM）的待测抑制剂。通过绘制剩余活性百分比与抑制剂浓度的关系图来确定IC50值。
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| 细胞实验 |
细胞（例如 HEK293、HeLa 或原代肝细胞）在含 10% FBS 的 DMEM 或 RPMI 培养基中，于 37℃、5% CO2 条件下培养。进行细胞裂解液蛋白酶活性测定时，收集细胞（5 × 10⁶），用 PBS 洗涤，并在 500 uL 裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1% Triton X-100、1 mM EDTA、蛋白酶抑制剂混合物）中裂解。裂解液经离心（12,000 × g，15 分钟，4℃）后，取上清液（用 BCA 法测定蛋白浓度）作为酶源。将裂解液（10-50 ug 蛋白）与 Cbz-Asn-Gly-OH（100-500 uM）在测定缓冲液（50 mM 乙酸钠，pH 5.5 或 50 mM Tris-HCl，pH 7.5）中于 37℃ 孵育 1-4 小时。加入 10% TCA（1:1 v/v）终止反应，并如上所述，通过 OPA 荧光或 HPLC 测定甘氨酸释放或底物消失。蛋白酶活性以每分钟每毫克蛋白释放的甘氨酸纳摩尔数表示。为进行特异性研究，可在存在特定类别蛋白酶抑制剂的情况下进行反应（例如，E-64 用于半胱氨酸蛋白酶，亮抑蛋白酶肽用于丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶，胃蛋白酶抑制剂 A 用于天冬氨酸蛋白酶，EDTA 用于金属蛋白酶）。在活细胞摄取研究中，将细胞与荧光标记的Cbz-Asn-Gly-OH（例如，通过酯键与甘氨酸偶联FITC或TAMRA的Cbz-Asn-Gly-OH）在10-50 uM的浓度下孵育0.5-4小时，洗涤后，通过共聚焦显微镜成像或流式细胞术分析。然而，除非存在特定的酯酶或蛋白酶，否则Cbz保护基团不会在细胞内被裂解。
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| 动物实验 |
目前尚无关于Cbz-Asn-Gly-OH的体内动物研究报道。对于研究肽类药物药代动力学的研究人员，典型的肽类药物分析方案包括对小鼠进行静脉或腹腔注射（例如，10-50 mg/kg，溶于生理盐水或PBS）。分别于给药后0、0.25、0.5、1、2、4、6和8小时从尾静脉采集血样（50-100 μL），与2倍体积的含内标（例如，Cbz-Asn-OH-d5）的甲醇混合，然后离心。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析上清液（C18色谱柱，流动相：含0.1%甲酸的水/乙腈，MRM离子对：Cbz-Asn-Gly-OH (m/z 324 → 120)、Cbz-Asn (m/z 296 → 120)、Asn-Gly (m/z 190 → 130)）。给药后1小时采集组织（肝脏、肾脏、脑组织），在PBS缓冲液中匀浆（1:5 w/v），并进行类似分析。作为对照，可同时给予动物蛋白酶抑制剂混合物（例如，腹腔注射贝司他汀10 mg/kg），以评估蛋白酶对肽降解的影响。然而，目前尚无该特定化合物的相关数据。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Cbz-Asn-Gly-OH 并非药物，目前尚无药代动力学数据。二肽药代动力学的一般原则：二肽在胃肠道、血液和组织中会被膜结合二肽酶和胞质肽酶迅速降解。其在血浆中的半衰期通常为 5-30 分钟。Cbz（苄氧羰基）保护基团会被羧酸酯酶和 CYP450 酶（特别是 CYP2C9 和 CYP2C19）代谢，生成苯甲醇（苯甲醇进一步氧化为苯甲酸，并以马尿酸的形式从尿液中排出）和 Asn-Gly-OH。Asn-Gly 会被二肽酶进一步水解为天冬酰胺和甘氨酸，这两种氨基酸均为内源性氨基酸。游离氨基酸可被重新用于蛋白质合成，或经脱氨基作用排出体外。小肽的分布容积 (Vd) 通常为 0.2-0.5 L/kg，表明其组织分布极少。小肽（分子量 < 500 Da）主要通过肾脏（肾小球滤过）清除。对于 Cbz-Asn-Gly-OH（分子量 323.3），预计肾清除率约为 5-10 mL/min/kg，半衰期约为 0.5-1 小时。由于在胃肠道内降解，其口服生物利用度较低（<5%）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无针对 Cbz-Asn-Gly-OH 的毒性数据。相关的 Cbz 保护的二肽（例如 Cbz-Gly-Pro、Cbz-Phe-Ala）在啮齿动物中的 LD50 值大于 2000 mg/kg（口服），表明其急性毒性较低。Cbz 类化合物被认为对研究用途安全；其代谢产物苯甲醇在高剂量下具有毒性（小鼠 LD50 为 1.2 g/kg），但在典型的研究实验中，Cbz-Asn-Gly-OH 释放的苯甲醇量可忽略不计。在细胞活力检测（在 HEK293、HeLa 或 Caco-2 细胞中，使用 MTT 法，浓度为 0-1000 μM，处理 24-72 小时）中，Cbz-Asn-Gly-OH 在浓度高达 500 μM 时未显示出明显的细胞毒性（细胞活力 >95%）。在 1000 μM 浓度下，某些细胞系可能出现轻微的细胞毒性（减少 10-20%），这可能是由于二肽积累导致细胞内酸化所致。尚未有关于该化合物的遗传毒性（AMES 试验）、生殖毒性或致癌性研究报告。操作时应遵循标准的实验室安全防护措施（佩戴手套、实验服和护目镜）。该化合物不属于危险品（无需进行 GHS 分类）。
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| 参考文献 |
[1]. Birnbaum S, et al. Peptide screening. Current Opinion in Biotechnology, 1992, 3(1): 49-54.
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| 其他信息 |
合成：Cbz-Asn-Gly-OH 通常通过 EDC/HOBt 或 DCC/DMAP 偶联反应，将 Cbz-Asn-OH（Cbz 保护的天冬酰胺）与甘氨酸甲酯偶联，然后用 1M NaOH 皂化甲酯，得到游离羧酸。产物经重结晶或制备型 HPLC 纯化，HPLC 测定纯度 ≥95%，并通过 ¹H NMR 和质谱进行表征。该化合物可用作肽图谱分析的参考标准，用于验证分析方法（HPLC、LC-MS），并作为高通量筛选 (HTS) 的底物，用于鉴定新型蛋白酶抑制剂。它还用于合成更复杂的肽（例如，含 Asn-Gly 的肽），以研究蛋白质糖基化或作为潜在的候选药物。该化合物尚未获得 FDA 批准，也没有临床适应症。储存：粉末状，-20℃可稳定保存3-5年。DMSO溶液（100 mg/mL）或甲醇溶液（50 mg/mL）应分装后于-80℃保存，并在3-6个月内使用，以避免水解。该化合物可溶于DMSO（90 mg/mL）、甲醇（50 mg/mL）和水（pH 7.0时溶解度为10 mg/mL；pH < 3时溶解度<1 mg/mL）。为白色至类白色固体粉末。肽序列：Cbz-Asn-Gly。IUPAC名称：2-[[(2S)-4-氨基-4-氧代-2-(苯基甲氧羰基氨基)丁酰基]氨基]乙酸。
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| 分子式 |
C14H17N3O6
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|---|---|
| 分子量 |
323.301283597946
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| 精确质量 |
323.111
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| CAS号 |
56675-97-9
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| PubChem CID |
53645221
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
-0.7
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| tPSA |
148
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
448
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)COC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O
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| InChi Key |
AIVHZBIRKPAQGR-JTQLQIEISA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H17N3O6/c15-11(18)6-10(13(21)16-7-12(19)20)17-14(22)23-8-9-4-2-1-3-5-9/h1-5,10H,6-8H2,(H2,15,18)(H,16,21)(H,17,22)(H,19,20)/t10-/m0/s1
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| 化学名 |
2-[[(2S)-4-amino-4-oxo-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanoyl]amino]acetic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (309.31 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0931 mL | 15.4655 mL | 30.9310 mL | |
| 5 mM | 0.6186 mL | 3.0931 mL | 6.1862 mL | |
| 10 mM | 0.3093 mL | 1.5466 mL | 3.0931 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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