| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Azure C targets several molecular entities. As a substrate for horseradish peroxidase (HRP), it is oxidized by HRP in the presence of H2O2, leading to the formation of oxidized products that can be detected spectrophotometrically (λmax ~ 630 nm). Azure C also targets tau oligomers, binding to pathological tau aggregates and modulating their toxicity in cellular and animal models of Alzheimer's disease and other tauopathies. As a thiazine dye, it intercalates into DNA and binds to RNA, staining nucleic acids in cells (metachromatic staining). It may also inhibit monoamine oxidase (MAO) and act as an antioxidant, similar to methylene blue, though these activities are less characterized.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外研究表明，在pH 7.0、25℃条件下，通过分光光度法测定（ε₆30 = 25,000 M-¹cm-¹），天青C可被辣根过氧化物酶（HRP）氧化，Km值为50-100 uM，kcat值为10-20 s-¹。氧化产物（天青C阳离子自由基）在630 nm处具有特征吸收峰，该吸收峰随时间推移而降低，这是由于进一步氧化所致。在无细胞tau蛋白聚集实验中，1-10 uM的天青C可抑制肝素诱导的tau蛋白聚集（硫黄素T荧光，λex 450 nm，λem 480 nm），在10 uM浓度下抑制率达50-80%，IC50值约为2-3 uM。它还能破坏已形成的tau蛋白寡聚体和原纤维，这已通过透射电镜（TEM）和沉降实验证实。在表达tau重复结构域（tauRD）的HEK293细胞中，Azure C（0.5-5 uM，24小时）可减少tau蛋白聚集并促进tau蛋白寡聚体的清除（LC50约为2 uM）。与亚甲蓝不同，Azure C具有更低的氧化还原电位，不易发生自氧化，因此在溶液中更稳定。
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| 体内研究 (In Vivo) |
利用tau蛋白病小鼠模型（例如rTg4510、P301S tau转基因小鼠）进行的体内研究表明，Azure C（10-30 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续4周）可减少tau蛋白病理，降低tau蛋白过度磷酸化（AT8抗体，Ser202/Thr205），并改善认知功能（莫里斯水迷宫、新物体识别）。在这些研究中，与载体对照组相比，Azure C治疗（20 mg/kg）可使脑匀浆中不溶性tau蛋白水平降低40-50%，并使海马和皮质中的神经原纤维缠结（NFT）数量减少30-40%。该化合物在APP/PS1阿尔茨海默病小鼠模型中也显示出活性，可减少β-淀粉样蛋白斑块并改善突触功能（突触素和PSD95水平）。然而，与亚甲蓝（在III期临床试验中失败，即LMTX）不同，Azure C尚未进入tau蛋白病的临床试验阶段。Azure C也用于染色研究，以可视化细胞、组织和微生物，在组织学、细胞学和微生物学领域均有应用。
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| 酶活实验 |
非细胞实验：辣根过氧化物酶 (HRP) 活性测定：在 96 孔板中，将 50 uL Azure C（10-1000 uM，溶于 100 mM pH 7.0 的磷酸盐缓冲液）与 50 uL H2O2（1-10 mM）和 50 uL HRP（0.1-10 ng/uL）混合。加入 HRP 启动反应，使用酶标仪每 30 秒测量一次 630 nm 处的吸光度，持续 5 分钟。计算初始反应速率（ΔA630/min），并通过拟合米氏方程确定动力学参数（Km、kcat）。在tau蛋白聚集实验中，将tau蛋白（40 uM，例如tauRD或全长tau蛋白(2N4R)）与肝素（tau蛋白与肝素的摩尔比为1:4）在100 mM MES缓冲液（pH 6.5）、50 mM NaCl和2 mM DTT中于37℃孵育24-72小时。加入硫黄素T（ThT，20 uM），并每隔30分钟测量一次荧光强度（激发波长λex 450 nm，发射波长λem 480 nm）。在0小时或纤维形成后加入亚甲蓝C（0-50 uM）（以检测其解聚活性）。IC50值通过72小时的剂量-反应曲线确定。对于透射电镜（TEM）观察，将tau蛋白样品（含或不含Azure C）滴加到碳膜铜网上，用2%醋酸铀酰进行负染色，然后成像。对于沉降实验，将tau蛋白样品离心（100,000 × g，30分钟），将沉淀物（纤维）重悬于PBS缓冲液中，然后分别对上清液（可溶性tau蛋白）和沉淀物进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色分析。
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| 细胞实验 |
细胞（例如 HEK293、SH-SY5Y、HeLa）在含 10% FBS 的 DMEM 培养基中，于 37℃、5% CO2 条件下培养。对于 tau 蛋白聚集研究，将稳定表达 tauRD-EGFP（tau 重复结构域与 EGFP 融合）的 HEK293 细胞接种于 96 孔板（1 × 10⁴ 个细胞/孔），并用 Azure C（0.1-50 uM）处理 24-48 小时。测量 EGFP 荧光强度（激发波长 488 nm，发射波长 530 nm）作为 tau 蛋白聚集的指标（聚集的 tau 蛋白由于自身猝灭而荧光强度降低）。或者，用 4% 多聚甲醛固定细胞，用 0.2% Triton X-100 透化细胞，然后用抗 tau 抗体（AT8，pSer202/Thr205）和 DAPI 染色。图像采集采用共聚焦显微镜，并使用 ImageJ 软件对每个细胞中的 tau 寡聚体数量进行定量。细胞毒性实验中，细胞用 Azure C（1-200 uM）处理 48 小时，并通过 MTT 或 CellTiter-Glo 法检测细胞活力。染色实验中，细胞接种于盖玻片上，固定后用 Azure C（0.1% w/v，溶于 0.1 M pH 7.0 的磷酸盐缓冲液中，染色 5-10 分钟）染色，用蒸馏水冲洗，依次用 50%、70%、95% 和 100% 的乙醇脱水，二甲苯透明，最后封片。染色后的细胞用明场显微镜观察。Azure C 将细胞核染成蓝色至紫色，细胞质染成粉红色至淡紫色。HRP 标记的 ELISA 实验中，微孔板包被捕获抗体，封闭后与抗原孵育，最后与 HRP 标记的检测抗体孵育。洗涤后，加入Azure C（100 uM）和H2O2（100 uM）作为底物，10-15分钟后用2 M H2SO4终止反应。测量630 nm处的吸光度。
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| 动物实验 |
在tau蛋白病小鼠模型（例如，4-6月龄的rTg4510、P301S小鼠）的体内疗效研究中，将Azure C溶解于生理盐水（10 mg/mL）中，并以5、10、20、30 mg/kg的剂量每日腹腔注射（ip），持续4-8周（每组n=10-15）。对照组接受赋形剂（生理盐水）或亚甲蓝（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）。每周监测小鼠体重。实验结束时，处死小鼠，并取脑半球。将一侧脑半球固定于4%多聚甲醛溶液中，用于免疫组织化学（IHC）和组织学分析；另一侧脑半球速冻，用于生化分析（tau蛋白、磷酸化tau蛋白和泛素的ELISA检测；tau蛋白寡聚体的免疫印迹分析）。对于免疫组化（IHC），将脑组织切片（40 μm）用抗磷酸化tau蛋白抗体（AT8、PHF1）、抗tau蛋白寡聚体抗体（T22、tau蛋白寡聚体特异性抗体）和抗突触素抗体（突触前标记物）进行染色。刚果红或硫黄素S染色用于显示神经原纤维缠结和斑块。认知评估方面，在实验终点前2-3周进行Morris水迷宫实验（训练4天，每天5次，每次60秒，第5天进行探针试验）。数据采用双因素方差分析（处理×天数）进行分析，并进行Tukey事后检验。药代动力学研究中，小鼠单次腹腔注射给药（10 mg/kg），分别在0.5、1、2、4、6、8、12和24小时处死（每个时间点n=3）。收集血浆和脑组织，并用 LC-MS/MS 进行分析（C18 色谱柱，流动相：0.1% 甲酸水溶液和乙腈，MRM 转换：m/z 278 → 260，用于 Azure C）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠腹腔注射（10 mg/kg）后进行的药代动力学研究表明，Azure C 在血浆中的血药浓度峰值（Cmax）为 2-3 μM（给药后 0.5-1 小时），在脑组织中的血药浓度峰值（Cmax）为 0.5-1 μM（给药后 1-2 小时）。血浆中的末端半衰期（t1/2）为 3-4 小时，脑组织中的末端半衰期为 4-6 小时。由于吸收不良和首过代谢，口服生物利用度较低（<5%）。该化合物主要通过 CYP450 酶（主要是 CYP2D6 和 CYP3A4）代谢为去甲基化产物（亚甲蓝 B、亚甲蓝 A、硫堇）和氧化产物（亚砜）。主要排泄途径为胆汁排泄（60-70%）和尿液排泄（20-30%）。血浆蛋白结合率为 80-90%（主要与白蛋白结合）。分布容积 (Vd) 为 2-4 L/kg，表明其主要分布于血管外。在啮齿动物中，清除率 (CL) 为 0.5-1 mL/min/kg。体外辣根过氧化物酶 (HRP) 检测中，使用浓度为 10-200 μM 的 Azure C，反应在 10-15 分钟内呈线性关系。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
急性毒性研究：小鼠口服LD50约为200 mg/kg；腹腔注射LD50为50-100 mg/kg。在治疗剂量（10-30 mg/kg，腹腔注射）下，未观察到显著毒性（无体重减轻，血清ALT、AST、BUN、肌酐水平无变化，肝脏、肾脏、心脏组织学检查未见异常）。在较高剂量（>50 mg/kg，腹腔注射）下，小鼠出现嗜睡、活动减少和轻度体温过低，2-4小时内即可恢复。小鼠长期给药（20 mg/kg，每日腹腔注射，持续8周）耐受性良好，无死亡或显著的组织病理学改变。细胞活力测定显示，Azure C在大多数细胞系（HEK293、SH-SY5Y、HeLa、Caco-2）中的IC50 >50 μM。在 100 μM 浓度下，48 小时后细胞存活率降至 60-70%，这可能是由于氧化应激或线粒体功能障碍所致（Azure C 可通过氧化还原循环产生活性氧）。目前尚未报道其具有遗传毒性（AMES 试验阴性，小鼠骨髓微核试验在高达 50 mg/kg 的剂量下也呈阴性）。然而，Azure C 被归类为刺激物（皮肤、眼睛、呼吸道刺激），操作时应佩戴个人防护装备（手套、护目镜、实验服）。Azure C 尚未获得 FDA 批准用于人体。亚甲蓝（一种相关化合物）已获得 FDA 批准用于治疗高铁血红蛋白血症，但剂量较低（1-2 mg/kg）。Azure C 尚未在任何适应症的临床试验中进行评估。
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| 参考文献 |
[1]. Ferreira-Leitão V S, et al. Methylene blue and azure B oxidation by horseradish peroxidase: a comparative evaluation of class II and class III peroxidases. Applied Catalysis B: Environmental, 2003, 42(2): 213-221.
[2]. Lo Cascio F, et al. Azure C Targets and Modulates Toxic Tau Oligomers. ACS Chem Neurosci. 2018 Jun 20;9(6):1317-1326. |
| 其他信息 |
天青C是一种有机氯化物盐，其抗衡离子为3-氨基-7-(甲氨基)吩噻嗪-5-鎓。它可用作荧光染料和组织学染料。它含有3-氨基-7-(甲氨基)吩噻嗪-5-鎓。
Azure C 又名氯化单甲基硫氨酸、CI 52002、3-氨基-7-(甲氨基)吩噻嗪-5-氯化鎓。它是一种深绿色至黑色结晶粉末，可溶于水（10 mg/mL）、乙醇（1 mg/mL）和二甲基亚砜（DMSO，10 mg/mL）。粉末状的 Azure C 在室温下可稳定保存 1-2 年，但溶液应储存在 -20℃ 并避光，以防止光降解（Azure C 具有光敏性，暴露于紫外光或可见光下会降解为硫氨酸和其他产物）。在酶活性测定中，Azure C 常被用作辣根过氧化物酶 (HRP) 的底物，以替代 3,3',5,5'-四甲基联苯胺 (TMB)，因为它价格更低且具有较高的摩尔吸光系数。然而，由于 TMB 具有更高的灵敏度和更低的背景噪声，因此通常更受青睐。 Azure C 也用于纺织工业，用于棉、丝和羊毛的染色（但由于噻嗪类染料的环境问题，这些应用正在减少）。在医学研究中，Azure C 被用作生物染色剂（组织学、细胞学、微生物学），以及用于检测阿尔茨海默病模型中 tau 蛋白寡聚体的探针。Azure C 不是药物；它是一种研究试剂和诊断染色剂。目前尚无 Azure C 作为治疗药物的临床试验或 FDA 批准。 |
| 分子式 |
C13H12CLN3S
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|---|---|
| 分子量 |
277.77
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| 精确质量 |
277.044
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| CAS号 |
531-57-7
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| PubChem CID |
135421845
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 沸点 |
385.1ºC at 760 mmHg
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| 闪点 |
186.7ºC
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| LogP |
1.012
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| tPSA |
79.18
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
0
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| 重原子数目 |
18
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| 分子复杂度/Complexity |
448
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CNC1=CC2=C(C=C1)N=C3C=CC(=CC3=[S+]2)N.[Cl-]
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| InChi Key |
DDGMDTGNGDOUPX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H11N3S.ClH/c1-15-9-3-5-11-13(7-9)17-12-6-8(14)2-4-10(12)16-11;/h2-7H,14H2,1H3;1H
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| 化学名 |
7-methyliminophenothiazin-10-ium-3-amine;chloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 1.96 mg/mL (7.06 mM)
Ethanol: < 1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.6001 mL | 18.0005 mL | 36.0010 mL | |
| 5 mM | 0.7200 mL | 3.6001 mL | 7.2002 mL | |
| 10 mM | 0.3600 mL | 1.8001 mL | 3.6001 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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