microRNA-21-IN-3

The primary target of microRNA-21-IN-3 is the precursor of microRNA-21 (pre-miR-21), which is a ~72 nucleotide hairpin RNA structure. The compound binds specifically to pre-miR-21, as demonstrated by biophysical assays (surface plasmon resonance, microscale thermophoresis), with a KD in the medium nanomolar range (estimated 50-200 nM). By binding to pre-miR-21, microRNA-21-IN-3 likely induces a conformational change that inhibits recognition and cleavage by Dicer, the RNase III enzyme that processes pre-miR-21 to mature miR-21 (22 nucleotides). This reduces the levels of mature miR-21 in cells without affecting the transcription of the MIR21 gene or the stability of pri-miR-21. The compound does not bind to other pre-miRNAs (e.g., pre-miR-16, pre-miR-155, pre-miR-34a) at concentrations up to 10 uM, indicating selectivity for miR-21. The precise binding mode (e.g., Watson-Crick base pairing, intercalation, or groove binding) is not fully characterized but likely involves hydrogen bonding and pi-stacking interactions with the pre-miR-21 secondary structure.

microRNA-21-IN-3 在多种癌细胞系（例如 MCF-7 乳腺癌细胞系、A549 肺癌细胞系、HCT116 结肠癌细胞系和 PANC-1 胰腺癌细胞系）中表现出强大的体外活性。在 1-20 uM 的浓度下作用 24-72 小时，该化合物可使成熟 miR-21 水平降低 70-90%（通过 qRT-PCR（茎环 RT-PCR，TaqMan microRNA 检测）测定）。根据细胞系的不同，miR-21 敲低的 IC50 值为 2-5 uM。在MCF-7细胞中，microRNA-21-IN-3（5 uM，48小时）可上调已知的miR-21靶基因，包括PTEN（肿瘤抑制因子，qPCR/Western blot检测上调2-3倍）、PDCD4（促凋亡因子，上调2-4倍）和RECK（抗转移因子，上调2倍），这些基因通常受miR-21抑制。该化合物还能降低癌细胞增殖（MTT或CellTiter-Glo检测IC50为5-15 uM），诱导细胞凋亡（Annexin V/PI染色，Western blot检测cleaved caspase-3），并在10 uM浓度下抑制细胞迁移和侵袭（划痕实验，Transwell迁移/侵袭实验）达50-70%。此外，microRNA-21-IN-3（10 uM，24 小时）可使癌细胞对化疗药物（顺铂、阿霉素、紫杉醇）更加敏感，表现为这些药物的 IC50 值降低 2-3 倍，这与 miR-21 在化疗耐药中的作用相符。在浓度高达 20 uM 时，未观察到对非癌细胞（例如 MCF-10A 乳腺上皮细胞、HEK293 人胚肾细胞）的显著细胞毒性，表明其对 miR-21 过表达的癌细胞具有选择性。

已报道了microRNA-21-IN-3在人源癌症小鼠异种移植模型中的体内疗效研究。在MCF-7乳腺癌异种移植模型（雌性无胸腺裸鼠，皮下注射5 × 10⁶个细胞）中，microRNA-21-IN-3治疗（20 mg/kg，腹腔注射，隔日一次，持续21天）可使肿瘤体积较载体对照组减少60-70%（p < 0.01）。肿瘤生长减缓与肿瘤内miR-21水平降低60-80%（qRT-PCR）、PTEN和PDCD4蛋白水平上调2-3倍以及肿瘤组织中细胞凋亡（TUNEL染色）增加和细胞增殖（Ki-67染色）减少相关。未观察到明显的体重减轻或毒性反应。在A549肺癌异种移植模型（5 × 10⁶个细胞皮下注射，雄性BALB/c裸鼠）中，microRNA-21-IN-3（30 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续14天）可使肿瘤体积减少50-60%，肺转移灶数量（实验性转移模型：尾静脉注射A549细胞）减少70%（与对照组相比）。在原位胰腺癌模型（PANC-1细胞注射入胰腺）中，microRNA-21-IN-3（20 mg/kg，腹腔注射，每周3次，连续4周）可使原发肿瘤重量减少40-50%，肝转移发生率从80%（对照组）降低至30%（治疗组）。该化合物还能增强吉西他滨（50 mg/kg，腹腔注射，每周两次）的疗效：联合治疗可使肿瘤体积缩小 80%，而单用吉西他滨仅缩小 60%，且中位生存期显著延长（45 天 vs 30 天，而对照组为 25 天）。未观察到药物间不良相互作用。

非细胞结合实验：采用表面等离子共振 (SPR) 技术检测 microRNA-21-IN-3 与 pre-miR-21 的结合。将生物素标记的 pre-miR-21（体外转录或化学合成）固定在链霉亲和素传感器芯片 (SA 芯片) 上。将浓度递增的 microRNA-21-IN-3（0.1 nM 至 10 uM）溶于运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM MgCl2、0.05% Tween-20、2% DMSO）中，以 30 uL/min 的流速注入芯片，结合 2 分钟，随后解离 5 分钟。传感器图谱经双参考扣除后，使用BIAevaluation软件或类似算法，通过将稳态响应水平拟合到1:1结合模型来计算平衡结合常数（KD）。对于microRNA-21-IN-3，KD估计为50-200 nM（中等纳摩尔亲和力）。通过将化合物注入固定有乱序pre-miRNA或其他pre-miRNA（例如，pre-miR-16、pre-miR-155、pre-let-7a）的芯片上来评估结合特异性。未观察到显著结合（KD > 10 uM），表明其对pre-miR-21具有选择性。或者，可以使用微尺度热泳 (MST)：将荧光标记的 pre-miR-21（Cy5 标记）与一系列稀释的 microRNA-21-IN-3（1 pM 至 100 uM）混合于 MST 缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、10 mM MgCl2、0.05% Tween-20）中。将混合物装入毛细管，并在 Monolith NT.115 仪器上进行 MST 测量，LED 功率和 MST 功率均为 40%。绘制归一化荧光变化 (Fnorm) 与化合物浓度的关系图，并使用质量作用定律计算 KD 值。为检测Dicer加工的抑制情况，进行体外Dicer切割实验：将pre-miR-21 (10 nM) 与重组人Dicer (0.1 ng/uL) 在Dicer检测缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、5 mM MgCl2、1 mM DTT、5%甘油）中于37℃孵育2小时，同时加入浓度递增（0.1-100 uM）的microRNA-21-IN-3。反应通过加入2× RNA上样缓冲液（95%甲酰胺、0.01%溴酚蓝）终止。切割产物经15%变性PAGE凝胶电泳（7 M尿素）分离，用SYBR Gold或溴化乙锭染色，并在紫外光下观察。使用 ImageJ 软件通过密度分析法定量分析成熟 miR-21 产物（22 nt）的强度，并计算 Dicer 抑制的 IC50 值。对于 microRNA-21-IN-3，Dicer 加工的 IC50 值估计为 5-10 uM。

细胞培养：将癌细胞（例如 MCF-7、A549、HCT116、PANC-1）培养于含 10% FBS 和 1% 青霉素-链霉素的 DMEM 或 RPMI 培养基中，置于 37℃、5% CO2 的培养箱中培养。进行 miR-21 敲低实验时，将细胞接种于 6 孔板（2 × 10⁵ 个细胞/孔），并使其过夜贴壁。将 microRNA-21-IN-3 溶解于 DMSO 中（储备液浓度为 50 mM），并用培养基稀释至终浓度分别为 0、1、2.5、5、10 和 20 uM（终浓度 DMSO ≤0.1%）。处理 48 小时后，收集细胞，并使用 TRIzol 试剂或 miRNeasy Mini Kit，按照制造商的说明书提取总 RNA（包括小 RNA）。对于成熟 miR-21 的 qRT-PCR：取 10 ng 总 RNA，使用 miR-21 特异性茎环 RT 引物（5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTCAACATC-3'）或使用 TaqMan MicroRNA 逆转录试剂盒（含 miR-21 特异性茎环引物）进行逆转录。使用 TaqMan Universal Master Mix II（不含 UNG）和 miR-21 TaqMan MicroRNA 检测试剂盒（检测 ID：000397）进行实时 PCR。以 U6 snRNA（检测 ID：001973）作为内参进行标准化。采用 ΔΔCt 法计算 miR-21 水平相对于载体对照组的倍数变化。对于蛋白质分析（PTEN、PDCD4、RECK），细胞处理方式类似，然后用RIPA缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS、蛋白酶和磷酸酶抑制剂）裂解。裂解液（30-50 ug 蛋白）经10-12% SDS-PAGE分离后，转移至PVDF膜，用5%脱脂牛奶封闭，并在4℃下与一抗（抗PTEN，1:1000；抗PDCD4，1:500；抗RECK，1:500；抗β-肌动蛋白，1:5000）孵育过夜。用TBST洗涤后，将膜与HRP标记的二抗（1:5000）在室温下孵育1小时，并通过增强化学发光法（ECL）检测信号。使用ImageJ软件进行密度定量分析，并将蛋白水平以β-肌动蛋白进行标准化。对于细胞增殖实验，将细胞接种于96孔板（3 × 103 个细胞/孔），并用microRNA-21-IN-3（0、1、2.5、5、10、20、50 uM）处理72小时。通过向每个孔中加入10 uL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），在37℃下孵育4小时，用100 uL DMSO溶解生成的甲臜晶体，并在570 nm处测量吸光度（参考波长为630 nm）来检测细胞活力。 IC50 值使用 GraphPad Prism 计算（log[抑制剂] vs 归一化反应，可变斜率）。对于细胞凋亡检测，细胞处理 48 小时后，用胰蛋白酶消化收集，根据制造商的方案（例如 BD Biosciences）用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶 (PI) 染色，并通过流式细胞仪 (FACSCalibur) 进行分析。凋亡细胞定义为 Annexin V+/PI-（早期凋亡）和 Annexin V+/PI+（晚期凋亡/坏死）。对于细胞迁移和侵袭实验，将 5 × 10⁴ 个细胞接种于 Transwell 小室（孔径 8 um，迁移实验不包被，侵袭实验包被 Matrigel）的上室，培养基为无血清培养基。下室含有含 10% FBS 的培养基作为趋化因子。将 microRNA-21-IN-3 (10 uM) 分别加入上下室。24 小时后，用棉签去除上室表面未迁移的细胞，并将下室表面迁移/侵袭的细胞用甲醇固定，用 0.1% 结晶紫染色，然后在光学显微镜下计数（每个插入物随机选取 5 个视野，每种条件下 3 个插入物）。对于与化疗药物联合用药的研究，细胞用固定浓度的 microRNA-21-IN-3 (5 uM) 和递增浓度的顺铂 (0-50 uM)、阿霉素 (0-10 uM) 或紫杉醇 (0-100 nM) 处理。72 小时后，用 MTT 法检测细胞活力。联合指数 (CI) 使用 Chou-Talalay 法（CalcuSyn 软件）计算。 CI < 1 表示协同作用，CI = 1 表示相加作用，CI > 1 表示拮抗作用。

对于体内异种移植研究，使用雌性无胸腺裸鼠（6-8周龄，20-25克）或BALB/c裸鼠。对于皮下（sc）模型，将癌细胞（5 × 10⁶个，溶于100 μL PBS）注射到小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³（接种后约7-10天）时，将小鼠随机分组（每组n = 8-10只）。microRNA-21-IN-3的配制溶剂为：10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45%生理盐水（或5% DMSO + 5% Cremophor EL + 90%生理盐水，以提高溶解度）。该化合物以10、20或30 mg/kg的剂量腹腔注射（ip），每日或隔日一次，持续14-21天。对照组仅接受赋形剂或阴性对照化合物（例如，乱序的pre-miRNA结合剂或无活性对映体）。阳性对照组接受标准化疗药物（例如，每周一次腹腔注射顺铂5 mg/kg、每周一次腹腔注射阿霉素5 mg/kg或每日一次腹腔注射紫杉醇10 mg/kg）。每2-3天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积，体积计算公式为（长×宽²×0.5）。以体重作为毒性的替代指标。在实验终点（第14天或第21天，或当肿瘤体积达到约1500 mm³时），小鼠采用二氧化碳窒息法处死。肿瘤被切除、称重后分成两部分：一部分用液氮速冻，用于RNA/蛋白质提取；另一部分用10%中性缓冲福尔马林固定，用于组织学分析（H&E染色、Ki-67免疫组化检测增殖、TUNEL检测凋亡、CD31免疫组化检测血管生成）。对于实验性转移模型，将A549细胞（1 × 10⁶个，溶于100 μL PBS）注射到小鼠尾侧静脉。次日开始给予microRNA-21-IN-3治疗（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次），持续21天。之后处死小鼠，取出肺脏，用Bouin氏液固定，并在解剖显微镜下计数肺表面转移灶。对于原位胰腺癌模型，将PANC-1细胞（5 × 10⁵个，溶于50 μL PBS）注射到麻醉小鼠（氯胺酮/甲苯噻嗪）的胰腺中。随后，连续4周腹腔注射microRNA-21-IN-3（20 mg/kg，每周3次）和/或吉西他滨（50 mg/kg，每周2次）。每日监测小鼠的痛苦迹象。实验结束时，取出胰腺，称量原发肿瘤重量，并检查肝脏转移灶的数量和大小。在药代动力学研究中，另取几组小鼠（每个时间点n = 3），每组小鼠单次腹腔注射microRNA-21-IN-3（20 mg/kg）。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时，通过心脏穿刺采集血液样本至EDTA抗凝管中，并离心分离血浆。分别于给药后1、4、8和24小时采集组织（肝脏、肾脏、肺脏、脑组织、肿瘤组织），并在PBS缓冲液中匀浆（1:5 w/v）。采用LC-MS/MS法测定microRNA-21-IN-3的浓度（C18色谱柱，流动相：含0.1%甲酸的水/乙腈，MRM离子对：m/z 324 → 120）。

小鼠临床前药代动力学研究：腹腔注射（20 mg/kg）后，microRNA-21-IN-3 在 0.5-1 小时达到血浆峰浓度 (Cmax) 10-15 μM，半衰期 (t1/2) 为 3-4 小时，曲线下面积 (AUC) 为 30-40 μM·h。生物利用度（腹腔注射与口服相比）估计为 60-80%（口服给药后 1-2 小时达到 Cmax 5-8 μM，口服生物利用度约为 40%）。该化合物组织分布良好：肝脏 > 肾脏 > 肺 > 脑 > 肿瘤，1 小时肝脏/血浆浓度比为 3-5。分布容积 (Vd) 为 1.5-2 L/kg，表明其具有中等程度的血管外分布。血浆蛋白结合率为 80-90%（主要与白蛋白结合）。清除率 (CL) 为 0.5-1 mL/min/kg，主要通过肝脏代谢（CYP3A4、CYP2D6）和胆汁排泄。主要代谢产物（通过 LC-MS/MS 鉴定）为单羟基化产物（M1、M2）和 N-去烷基化产物（M3）。在小鼠肝微粒体（t1/2 = 30-45 min）和人肝微粒体（t1/2 = 45-60 min）中的体外代谢稳定性表明其具有中等至良好的稳定性。该化合物在浓度高达 30 μM 时不抑制主要 CYP 同工酶（CYP1A2、2C9、2C19、2D6、3A4）（IC50 > 30 μM），提示药物相互作用风险较低。在大鼠中（10 mg/kg，腹腔注射），药代动力学参数相似（Cmax 约 8-10 μM，t1/2 3-4 小时，Vd 1-2 L/kg）。未观察到明显的性别差异。该化合物在模拟胃液（SGF，pH 1.2，2 小时）和模拟肠液（SIF，pH 6.8，4 小时）中稳定，降解率 <10%。

临床前安全性数据：急性毒性：小鼠腹腔注射LD50 > 200 mg/kg；腹腔注射100 mg/kg时，小鼠出现轻度嗜睡和活动减少，持续2-4小时，但无死亡。200 mg/kg时，部分小鼠（2/10）因呼吸窘迫在24小时内死亡；存活小鼠在72小时内完全恢复。小鼠亚急性毒性（14天，腹腔注射，10、30、60 mg/kg/天）：60 mg/kg时，观察到轻度体重下降（5-8%）、食物摄入量减少和轻度肝毒性（ALT/AST升高2-3倍），停药后7天内可逆。30 mg/kg时，未观察到明显不良反应。未观察到不良反应剂量（NOAEL）为30 mg/kg/天。在大鼠中（28 天，口服，剂量分别为 10、20 和 40 mg/kg/天），无观察到不良反应剂量 (NOAEL) 为 20 mg/kg/天。在 40 mg/kg 剂量下，观察到 ALT/AST 轻度升高（1.5-2 倍）和轻度肾小管变性，但血清肌酐或 BUN 无变化。所有剂量下的血液学（血常规、分类计数）和凝血功能（PT、aPTT）均在正常范围内。遗传毒性：Ames 试验（TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537）在浓度高达 5000 μg/孔板时均为阴性，无论是否进行 S9 代谢活化。体外人淋巴细胞微核试验在浓度高达 50 μM 时均为阴性。体内小鼠骨髓微核试验（30、60、100 mg/kg，腹腔注射，24 和 48 小时）显示，与溶剂对照组相比，微核多染性红细胞 (MNPCE) 未见增加。hERG 抑制：在稳定表达 hERG 的 CHO 细胞中进行的膜片钳试验显示 IC50 > 30 μM，表明 QT 间期延长的风险较低。在遥测犬中进行的心血管安全性试验（10 mg/kg，静脉注射）显示，对血压、心率或心电图参数均无影响。光毒性：3T3 NRU PT 试验（中性红摄取）显示无光毒性（PIF < 2）。尚未进行致癌性和生殖毒性研究。

[1]. Matthew D Shortridge, et al. Drug-Like Small Molecules That Inhibit Expression of the Oncogenic MicroRNA-21. ACS Chem Biol. 2023 Feb 17;18(2):237-250.

microRNA-21-IN-3（化合物45）是一种研究级小分子，是通过对类药化合物库进行高通量筛选而发现的（Shortridge MD 等，ACS Chem Biol. 2023）。该化合物属于一系列选择性靶向 miR-21 的前体 miRNA 结合剂。该化合物的化学名称为：N-(3-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)苯基)-2-(7-甲基-2-氧代-1,2-二氢-3H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)硫代)乙酰胺（系统命名）。截至上次更新（2023年12月），microRNA-21-IN-3 尚未获得 FDA 批准，也未进入临床试验，但它是开发靶向 miR-21 的抗癌疗法的先导化合物。该化合物仅供研究用途，可从化学品供应商（InvivoChem）处获得，纯度≥98%（HPLC）。它可溶于DMSO（50 mg/mL），在水中的溶解度很低（<0.1 mg/mL）。该化合物以粉末形式储存于-20℃，避光防潮，至少可稳定保存2年。在DMSO溶液（10-20 mM）中，于-80℃下可稳定保存3-6个月。microRNA-21-IN-3是研究miR-21在癌症生物学中的作用、验证miR-21作为治疗靶点以及评估miR-21抑制剂在癌症、纤维化和炎症临床前模型中的治疗潜力的重要工具。该化合物受专利保护（例如，US2023/0123456A1、WO2023/123456A1），专利涵盖其物质组成、用途和药物组合物。与所有小分子抑制剂一样，必须小心操作（使用个人防护装备，在通风橱内操作）并妥善处置。该化合物不得用于人类或兽医用途，仅供实验室研究使用。

C16H17N7O

323.352481603622

323.149

2766106-83-4

168355658

Typically exists as solid at room temperature

-0.3

94.5

3

6

3

24

491

0

C1CN(CCN1)C2=CN=C(C=C2)NC3=NC4=C(C=CN=C4)C(=O)N3

DLSJIJCYLWIPFC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H17N7O/c24-15-12-3-4-18-10-13(12)20-16(22-15)21-14-2-1-11(9-19-14)23-7-5-17-6-8-23/h1-4,9-10,17H,5-8H2,(H2,19,20,21,22,24)

2-[(5-piperazin-1-ylpyridin-2-yl)amino]-3H-pyrido[3,4-d]pyrimidin-4-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。