| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
AH1 targets T-cell receptors (TCRs) on CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs). The peptide is presented on the cell surface in complex with the MHC class I molecule H-2Ld. In CT26 colon carcinoma cells (which express the endogenous MuLV gp70 protein), AH1 is naturally processed and presented to CD8+ T cells. The AH1/Ld complex is recognized by specific TCRs, leading to activation, proliferation, and effector functions of CTLs (e.g., IFN-gamma production, granzyme B and perforin release, and target cell lysis). The AH1 epitope is highly immunogenic, and AH1-specific CTLs can be generated in vitro by stimulating CD8+ T cells from BALB/c mice (H-2Ld haplotype) with AH1-pulsed dendritic cells. AH1 is also a model antigen for studying tumor immunology and immune evasion mechanisms, as CT26 tumors can downregulate MHC class I or induce T-cell exhaustion. The epitope has no known off-target interactions with non-immune cells.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外研究表明，AH1肽（0.1-10 ug/mL）能有效刺激BALB/c小鼠的CD8+ T细胞。在ELISpot检测中，来自携带CT26肿瘤或AH1免疫小鼠的脾细胞（与AH1脉冲树突状细胞共培养5-7天）在用AH1（1-10 ug/mL）再次刺激后，每2×10⁵个细胞可产生200-500个IFN-γ斑点形成细胞（SFC）。在细胞毒性试验中，AH1特异性CTL在效应细胞与靶细胞（E:T）比例为10:1至50:1时，可杀伤经AH1脉冲处理的靶细胞（例如，P815肥大细胞瘤细胞或天然表达该表位的CT26细胞），在4小时⁵¹Cr释放或钙黄绿素-AM释放试验中，特异性裂解率达50-90%。该裂解作用依赖于MHC I类分子，并可被抗H-2Ld抗体（克隆28-14-8）阻断。在增殖试验中，经AH1脉冲处理的DC刺激的CFSE标记的CD8+ T细胞在5-7天内扩增5-10倍，并伴有活化标志物（CD25、CD69、CD44）的上调。 AH1与佐剂（例如CpG ODN、poly I:C）联用时，还能诱导树突状细胞成熟和细胞因子（IL-12、TNF-α）的产生。在没有T细胞的情况下，未观察到对肿瘤细胞（CT26、TS/A）的直接作用，表明AH1不具有直接的细胞毒性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
利用BALB/c小鼠（CT26结肠癌的同源宿主）进行的体内研究表明，AH1具有免疫治疗潜力。在预防性疫苗接种研究中，小鼠在第-14天和第-7天皮下注射AH1（50-100 ug）与佐剂（例如，不完全弗氏佐剂(IFA)、CpG ODN或poly I:C）的混合物，然后在第0天皮下接种CT26肿瘤细胞（5 × 10⁵个）。结果显示，接种组小鼠的肿瘤生长显著延迟（第21天平均肿瘤体积：接种组为500 mm3，对照组为1500 mm3，p < 0.01），且生存期延长（中位生存期：40天 vs 25天）。部分小鼠（20-30%）长期（>100天）保持无瘤状态。在治疗性疫苗研究中，在接种CT26肿瘤（已建立的肿瘤，体积约100-200 mm3）后5-7天，给予AH1（50-100 ug + 佐剂）。单独接种疫苗可产生有限的抗肿瘤效果（肿瘤体积减少30-40%），但与免疫检查点抑制剂（抗PD-1、抗CTLA-4，各200 ug，腹腔注射，分别于第3、6、9天给药）联合使用可产生协同效应（肿瘤生长抑制率达70-80%，肿瘤完全消退率达50-60%）。AH1肽脉冲树突状细胞疫苗（1-2 × 10⁶个树突状细胞，静脉注射或皮下注射）也显示出疗效，可使肿瘤负荷减少50-70%。在过继转移研究中，将AH1免疫小鼠的脾细胞在体外用AH1（10 ug/mL）刺激5天，然后将1-2 × 10⁷个活化的CTL细胞过继转移至携带CT26肿瘤的小鼠体内（肿瘤接种后第7天）。结果显示肿瘤生长抑制率达60-80%，且小鼠生存期延长。在TS/A乳腺癌模型中也观察到类似结果（肿瘤体积减少50-70%）。组织学和血清生化分析表明，在这些模型中，AH1不会诱导自身免疫反应，也不会对正常组织（如皮肤、肺、肝脏、肾脏、心脏）造成显著毒性。
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| 酶活实验 |
非细胞基肽-MHC结合检测：使用TAP缺陷型RMA-S细胞（小鼠H-2Ld）进行MHC I类分子稳定性检测。将RMA-S细胞在26℃培养过夜，使空载MHC I类分子在细胞表面积累。次日，将细胞（1 × 10⁶/mL）与不同浓度的AH1肽（0.1-1000 nM）在无血清RPMI培养基中于26℃孵育2小时，然后转移至37℃继续孵育2小时以稳定肽-MHC复合物。洗涤细胞后，用抗H-2Ld抗体（克隆28-14-8，FITC标记）在冰上染色30分钟，然后进行流式细胞术分析。几何平均荧光强度（MFI）与细胞表面稳定化的H-2Ld的量成正比。 AH1 与 H-2Ld 结合的 EC50 值通常为 10-50 nM，最大稳定性 (MFI) 可达背景值（无肽）的 5-10 倍。或者，可以使用荧光标记的参考肽（例如，pBM8-11，一种已知的 H-2Ld 结合肽）和纯化的 H-2Ld 蛋白（体外复性）进行竞争性结合实验，以确定 AH1 的结合亲和力 (IC50)。低纳摩尔范围 (1-10 nM) 的 IC50 值证实了高亲和力。对于 TCR 结合研究，使用可溶性 AH1/H-2Ld 四聚体（通过生物素标记 H-2Ld 重链、β2-微球蛋白和 AH1 肽，然后用链霉亲和素-PE 或 -APC 进行四聚化构建）通过流式细胞术检测 AH1 特异性 CD8+ T 细胞。可以通过滴定（0.01-1 ug/mL）四聚体来确定结合亲和力（Kd）。
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| 细胞实验 |
从 BALB/c 小鼠（6-8 周龄）中收集脾细胞，用 ACK 裂解缓冲液裂解红细胞，并将细胞重悬于含 10% FBS、50 uM 2-巯基乙醇和 1% 青霉素-链霉素的 RPMI 1640 培养基中。为了生成 AH1 特异性 CTL，将脾细胞（5 × 10⁶/孔）接种于 24 孔板中，并用 AH1 肽（10 ug/mL）和 IL-2（10 U/mL）刺激 5-7 天。或者，从小鼠骨髓中用GM-CSF（20 ng/mL）和IL-4（10 ng/mL）培养6天，生成骨髓来源的树突状细胞（BMDC），然后用AH1（10 ug/mL）脉冲处理2小时，洗涤后与脾细胞共培养（DC：T细胞比例为1:10），培养5-7天。对于细胞毒性试验，将靶细胞（CT26、P815或经AH1脉冲处理的P815）用⁵¹Cr（100 uCi/10⁶个细胞）在37℃下标记1小时，洗涤3次，然后以5 × 103个细胞/孔的密度接种于96孔U型底板中。将效应细胞毒性T淋巴细胞（CTL）以不同的效应细胞与靶细胞（E:T）比例（10:1、20:1、50:1）进行三重复实验。在37℃孵育4小时后，收集上清液，并用γ计数器测量⁵¹Cr的释放量。特异性裂解百分比 = (实验释放量 - 自发释放量) / (最大释放量 - 自发释放量) × 100%。最大释放量是通过添加1% Triton X-100获得的；自发释放量是指仅在培养基中靶细胞的释放量。对于ELISpot实验，将96孔PVDF板用抗IFN-γ捕获抗体（5 ug/mL）在4℃包被过夜。然后用1% BSA封闭2小时。将脾细胞（2 × 10⁵ 个细胞/孔）与 AH1 肽（1-10 ug/mL）混合，于 37℃ 孵育 20-24 小时。洗涤后，加入生物素标记的抗 IFN-γ 检测抗体（2 ug/mL），孵育 2 小时，随后加入链霉亲和素-AP（1 小时），并用 BCIP/NBT 底物显色。使用 ELISpot 读板仪计数斑点。对于细胞内细胞因子染色 (ICS)，将脾细胞或 CTL 用 AH1（10 ug/mL）和布雷菲德菌素 A（1 ug/mL）刺激 4-6 小时，然后进行表面 CD8 染色，固定/透化处理，进行 IFN-γ 或 TNF-α 染色，并通过流式细胞术进行分析。定量 CD8⁺IFN-γ⁺ 细胞的百分比。
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| 动物实验 |
在肿瘤攻毒实验中，使用雌性BALB/c小鼠（6-8周龄，18-22克）。将CT26结肠癌细胞（5 × 10⁵个，溶于100 μL PBS）皮下注射到小鼠右侧腹部。预防性免疫接种中，将AH1肽（50-100 μg）乳化于IFA中，或与CpG ODN（50 μg）和poly I:C（50 μg）混合，总体积为100-200 μL，于第-14天和第-7天皮下注射到小鼠尾根部或腹部。对照组小鼠仅注射佐剂或无关肽（例如OVA257-264）。在第0天，用CT26细胞攻毒小鼠。每隔2-3天用游标卡尺测量肿瘤体积，当肿瘤体积超过1500 mm³或小鼠出现痛苦迹象时，对小鼠实施安乐死。对于治疗性疫苗接种，小鼠于第0天接种CT26细胞。在第5-7天（肿瘤可触及，体积约为50-100 mm³），小鼠接受皮下或腹腔注射AH1肽（100 μg）+ CpG/poly I:C（各50 μg），溶于200 μL PBS中。对于联合免疫检查点阻断疗法，于第3、6、9和12天腹腔注射抗PD-1抗体（克隆RMP1-14，200 μg）或抗CTLA-4抗体（克隆9D9，200 μg）。对于过继转移研究，CTL的生成方法如上所述（脾细胞用AH1刺激5-7天）。在接种 CT26 后第 7 天，将 1 × 10⁷ 个 CTL 细胞（溶于 200 μL PBS）经尾静脉注射。小鼠也可接受重组 IL-2（10,000 U，腹腔注射，每日一次，连续 5 天）以促进 CTL 细胞的存活和扩增。为了评估体内抗原特异性 T 细胞反应，在实验终点（或第 7、14、21 天），收集脾细胞，并通过 AH1/H-2Ld 四聚体染色、ELISpot 和细胞内细胞因子染色进行分析。肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) 经胶原酶 IV 和 DNase I 消化后从肿瘤组织中分离，并进行类似的分析。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
AH1肽的药代动力学：由于AH1是一种9肽，皮下或静脉注射后其全身半衰期很短（数分钟），这是因为血清和组织肽酶（例如二肽基肽酶、氨肽酶、羧肽酶）会迅速降解它。对于皮下注射游离AH1（100 μg溶于100 μL PBS），血浆峰浓度（Cmax）通常<10 ng/mL，半衰期为5-15分钟。大部分注射剂量（80-90%）在1小时内被清除。为了提高稳定性和免疫原性，AH1通常与佐剂（IFA、CpG、poly I:C）配制，或通过肽脉冲树突状细胞递送，其中肽被加工并由MHC I类分子呈递，而不是以游离肽的形式给药。对于DC疫苗，通常注射1-2 × 10⁶个经肽脉冲处理的DC，DC上肽-MHC复合物（通过抗H-2Ld/AH1复合物抗体检测）在体内的半衰期为24-48小时。对于过继性T细胞转移，活化的CTL在循环中的半衰期为2-5天（转移后第3-5天达到扩增高峰）。目前尚未对AH1游离肽进行正式的药代动力学研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无针对AH1的毒性数据。在动物研究中（BALB/c小鼠，接种AH1+IFA或CpG，每次注射剂量为50-200 μg，在2-4周内注射2-4次），未观察到显著不良反应（无体重减轻、行为或活动改变、肝脏、肾脏、肺、心脏或脾脏的组织病理学改变）。然而，不完全弗氏佐剂（IFA）可在注射部位引起肉芽肿，这些肉芽肿会在2-4周内自行消退。根据组织病理学检查，通过疫苗接种或过继转移产生的AH1特异性CTL不会在正常组织中引起自身免疫反应（无白癜风、无脱发、无肠炎、无心肌炎）。在一些研究中，高剂量AH1肽（500微克，皮下注射）联合强效佐剂可能因T细胞活化而引起短暂的嗜睡和轻度脾肿大（脾脏增大10-20%），但未发现长期毒性。目前尚未开展AH1的遗传毒性、生殖毒性或致癌性研究。在正常操作条件下（使用个人防护装备、实验服和护目镜），AH1被认为对研究用途无毒。该肽应以冻干粉末形式储存于-20℃，可稳定保存2-3年。溶液（1-10毫克/毫升，溶于水或PBS）应分装后储存于-80℃，并在6个月内使用，以避免降解（甲硫氨酸的氧化对AH1无影响，但酪氨酸和组氨酸残基可能易被氧化）。 AH1 可溶于水、PBS（10 mg/mL）和 DMSO（50 mg/mL）。
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| 参考文献 |
[1]. M Toda, et al. Herpes simplex virus as an in situ cancer vaccine for the induction of specific anti-tumor immunity. Hum Gene Ther. 1999 Feb 10;10(3):385-93.
[2]. Antonio Rosato, et al. The cytotoxic T-lymphocyte response against a poorly immunogenic mammary adenocarcinoma is focused on a single immunodominant class I epitope derived from the gp70 Env product of an endogenous retrovirus. Cancer Res. 2003 May 1;63(9):2158-63. |
| 其他信息 |
AH1是临床前癌症免疫学研究中最广泛研究的模型肿瘤抗原之一。它来源于内源性嗜性鼠白血病病毒（MuLV）的gp70包膜蛋白，该病毒在CT26细胞（一种源自BALB/c小鼠的结肠癌细胞系）中表达。该肽段由MHC I类分子H-2Ld呈递，H-2Ld在BALB/c小鼠中表达（H-2d单倍型）。AH1也在其他MuLV阳性小鼠肿瘤中表达，包括TS/A（乳腺腺癌）和Renca（肾癌）。 AH1表位具有高度免疫原性，常用于研究T细胞反应、免疫耐受、肿瘤免疫逃逸（例如，MHC I类分子下调、PD-L1上调、调节性T细胞募集）以及评估癌症疫苗（包括肽疫苗、DNA疫苗、病毒载体疫苗、树突状细胞疫苗和新抗原疫苗）的疗效。AH1还用于构建肿瘤特异性T细胞系，以进行过继性细胞疗法（ACT）研究；作为四聚体染色的阳性对照；以及作为研究T细胞耗竭和免疫检查点阻断机制的工具。AH1的序列为SPSYVYHQF（单字母代码）。该肽通常采用固相肽合成法（SPPS）合成，纯度>95%（HPLC法），并通过质谱法进行表征。AH1并非药物，而是一种用于体外和体内研究的试剂。该肽尚未获得FDA批准，也无临床适应症。应将该肽以冻干粉末形式储存于-20℃，避光防潮，至少可稳定保存2年。用于细胞培养时，应将储备液（10 mg/mL，溶于水或50%乙腈/水溶液）分装后储存于-20℃，并在1年内使用。避免反复冻融（>3次）。用于体内实验时，应将AH1溶解于无菌PBS或生理盐水中并立即使用。该肽不可用于人体，仅供实验室研究使用。该肽不属于危险品（无需GHS分类），但操作时应佩戴手套和实验服。在操作活体动物和肿瘤细胞系时，务必遵循机构生物安全指南。
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| 分子式 |
C54H70N12O15
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|---|---|
| 分子量 |
1127.21
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| 精确质量 |
1126.51
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| CAS号 |
181272-91-3
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| PubChem CID |
101760040
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
0.868
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| tPSA |
440.02
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| 氢键供体(HBD)数目 |
15
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| 氢键受体(HBA)数目 |
17
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| 可旋转键数目(RBC) |
30
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| 重原子数目 |
81
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| 分子复杂度/Complexity |
2140
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| 定义原子立体中心数目 |
9
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| SMILES |
CC(C)C(C(=O)NC(CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)NC(CC2=CN=CN2)C(=O)NC(CCC(=O)N)C(=O)NC(CC3=CC=CC=C3)C(=O)O)NC(=O)C(CC4=CC=C(C=C4)O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C5CCCN5C(=O)C(CO)N
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| InChi Key |
OUDYTNPKUOHOHA-CWBDEABLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C54H70N12O15/c1-29(2)45(65-49(75)39(22-32-12-16-35(70)17-13-32)60-50(76)42(27-68)64-51(77)43-9-6-20-66(43)53(79)36(55)26-67)52(78)62-38(21-31-10-14-34(69)15-11-31)47(73)61-40(24-33-25-57-28-58-33)48(74)59-37(18-19-44(56)71)46(72)63-41(54(80)81)23-30-7-4-3-5-8-30/h3-5,7-8,10-17,25,28-29,36-43,45,67-70H,6,9,18-24,26-27,55H2,1-2H3,(H2,56,71)(H,57,58)(H,59,74)(H,60,76)(H,61,73)(H,62,78)(H,63,72)(H,64,77)(H,65,75)(H,80,81)/t36-,37-,38-,39-,40-,41-,42-,43-,45-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-amino-3-hydroxypropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8871 mL | 4.4357 mL | 8.8715 mL | |
| 5 mM | 0.1774 mL | 0.8871 mL | 1.7743 mL | |
| 10 mM | 0.0887 mL | 0.4436 mL | 0.8871 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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