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NICE-01 (AP1867-PEG2-JQ1; AP-PEG2-JQ1)

别名: NICE01 (AP-1867-PEG2-JQ1; AP-PEG2-JQ-1)
目录号: V62424 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
NICE-01 (AP1867-PEG2-JQ1；AP-PEG2-JQ1) 是一种双功能化合物，利用核定位的含溴结构域蛋白 4 (BRD4) 作为诱导剂，与不同细胞区室中的蛋白质结合。
NICE-01 (AP1867-PEG2-JQ1; AP-PEG2-JQ1) CAS号: 2982819-94-1
产品类别: Others 12
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品描述
NICE-01 (AP1867-PEG2-JQ1; AP-PEG2-JQ1) 是一种双功能化合物，它利用核定位的含溴结构域蛋白 4 (BRD4) 作为诱导剂，与不同细胞区室中的蛋白质结合，并将细胞质货物运输到细胞核中。
NICE-01（AP1867-PEG2-JQ1；AP-PEG2-JQ1）是一种双功能化合物，可与不同细胞区室中的蛋白质结合，并诱导胞质货物进入细胞核。它利用核定位的溴结构域蛋白4（BRD4）作为“载体”，实现胞质蛋白的共转运和核捕获。这种新型化学工具无需基因改造即可控制蛋白质的亚细胞定位。
生物活性&实验参考方法
靶点
BRD4
NICE-01 is a bifunctional molecule that targets two distinct proteins: BRD4 (bromodomain-containing protein 4) and a cytosolic protein of interest fused to an FKBPF36V tag. The JQ1 moiety binds with high affinity (Kd = 94 pM) to BRD4, which is a nuclear-localized transcriptional regulator. The AP1867 moiety binds to FKBPF36V-tagged cytosolic proteins. The PEG2-diamine linker connects these two binding moieties, allowing the compound to bridge the cytosolic protein to BRD4 and facilitate its nuclear transport.
体外研究 (In Vitro)
共转染FKBPF36V-mEGFP和mCherry-BRD4的细胞在加入NICE-01（200 nM，40分钟）后，FKBPF36V-EGFP迅速转位至细胞核（图1c）。AP1867和JQ1的组合无法诱导此效应（图S1）。我们由此推测，内源性含BET结构域的蛋白可能作为核输入的“载体”。在稳定表达FKBPF36V-mEGFP的细胞中，NICE-01（250 nM，3小时）可使mEGFP富集于细胞核内（图1d和图S1）。高浓度（10 μM，图 1e）的 JQ1 或 AP1867 可以增强这种效应。[1]
在缺乏外源 mCherry-BRD4 的细胞中，10 μM 的 NICE-01 无法诱导 FKBPF36V-mEGFP 进入细胞核。[1]
在共转染 mCherry-BRD4 的细胞中，NICE-01 能够将 FKBPF36V-mEGFP-PIK3CAE545K 导入细胞核。[1]
在短暂的初始阶段（在此期间，核内 FKBPF36V-mEGFP (39.4 kDa) 与 mCherry-BRD4 和 NICE-01 形成三元复合物），核输入相对于细胞质中 FKBPF36V-mEGFP 的比例表现出一级动力学特征。 kimport 估计为 0.0266 min⁻¹，t₁/₂ = 26 分钟。[1]
共转染 FKBPF36V-mEGFP-NPM1c 和 mCherry-BRD4 的细胞在用 NICE-01 处理后，FKBPF36V-mEGFP-NPM1c 在数分钟内迅速重新定位到细胞核内（图 2a、b；化合物添加前后细胞 mEGFP-mCherry 相关性分布的 Mann-Whitney U 检验 P = 4.4e-185）。[1]
体外实验表明，NICE-01 通过其 JQ1 活性基团与 BRD4 结合，解离常数 (Kd) 为 94 pM。它还能通过 AP1867 基团与 FKBPF36V 标签蛋白高亲和力结合。这种双功能结合使该化合物能够作为分子桥梁，将胞质靶蛋白与核内 BRD4 蛋白紧密连接。PEG2 连接子为双重结合提供了适当的空间灵活性。研究表明，NICE-01 能够诱导细胞系中靶蛋白在细胞核内大量积累。
体内研究 (In Vivo)
NICE-01的体内活性体现在其能够诱导活细胞中胞质货物进入细胞核。该化合物利用核定位的BRD4作为载体，实现了胞质蛋白的共转运和核捕获。这项技术提供了一种以化学遗传学方式控制蛋白质定位和功能的工具。虽然标准产品说明书中尚未发表体内动物实验数据，但该化合物的设计用途是用于细胞培养，并可能用于动物模型，以验证诱导核转运的功能后果。
酶活实验
用于检测 NICE-01 的 JQ1 组分的标准无细胞结合分析方法是利用荧光偏振 (FP) 的溴结构域结合分析。将重组 BRD4 溴结构域 1 (BD1) 蛋白与荧光标记的 JQ1 探针和不同浓度的 NICE-01 孵育。测量偏振度，并计算解离常数 (Kd)。对于 AP1867，可以使用类似的竞争性结合分析方法，该方法使用 FKBP 蛋白和荧光示踪剂。据报道，该化合物对 BRD4 的 Kd 值为 94 pM。
细胞实验
AP1867-PEG2-JQ1 (NICE-01) 可快速将 GFP 导入细胞核。(A) 核输入和表达控制 (NICE) 概念示意图。一种双功能分子可将目标胞质蛋白导入细胞核。(B) AP1867-PEG2-JQ1 的结构。(C) 将 mCherry-BRD4 和 FKBPF36V-mEGFP 共转染至 U2OS 细胞，用 NICE-01 (200 nM) 或 DMSO 处理，并成像 40 分钟。(D) 将稳定表达 FKBPF36V-mEGFP 的 293T 细胞用 NICE-01 (250 nM) 或 DMSO 处理，并成像 3 小时。 (E) 稳定表达 FKBPF36V-mEGFP 的 293T 细胞，用 NICE-01 (250 nM) 和指定浓度的 JQ1 或 AP1867 共同处理，成像 15 分钟。(F) 稳定表达 FKBPF36V-mEGFP 的 293T 细胞，转染 mCherry-BRD4，未经处理或用 NICE-01 (250 nM, 10 μM) 处理，成像 15 分钟。白色箭头指示表现出钩状效应的代表性细胞。红色箭头指示表达 mCherry-BRD4 但不表现出钩状效应的代表性细胞。(G) 稳定表达 FKBPF36V-mEGFP 的 293T 细胞，转染 mCherry-BRD4，用 NICE-01 (250 nM) 处理，成像 50 分钟。随机选取 100 个 mCherry+ 和 mCherry– 细胞，评估 mEGFP 的完全导入情况（细胞核/胞质 mEGFP 强度 ≥2.5）。P 值采用 Fisher 精确检验计算。[1]
NICE-01 的细胞检测方法包括：将编码目标胞质蛋白（融合 FKBPF36V 标签）和荧光蛋白（例如 GFP 或 RFP）的质粒转染至细胞。24 小时后，用不同浓度（例如 0.1-100 nM）的 NICE-01 处理细胞 1-6 小时。然后固定细胞，并通过共聚焦显微镜分析细胞核和细胞质组分，以量化核转位效率。也可以进行表达目标蛋白和 BRD4 的细胞共培养实验。通过与核标记物（例如 DAPI 或 Hoechst）的共定位来确认核输入。
动物实验
NICE-01 专为细胞培养实验而设计。典型的实验方案是将 HeLa 或 HEK293T 细胞接种于 96 孔板中，并用表达胞质 FKBPF36V 标签蛋白（例如 GFP-FKBP）的质粒进行转染。24 小时后，用 1-100 nM 的 NICE-01 处理细胞 2-6 小时。然后固定细胞，用 DAPI 染色以显示细胞核，并通过高内涵显微镜成像。定量分析显示 GFP 信号核定位的细胞百分比。作为对照，使用非活性类似物或用与 JQ1 结合竞争的 BRD4 抑制剂进行处理。
药代性质 (ADME/PK)
使用 NICE-01 的体内实验可在表达 FKBPF36V 标签胞质蛋白的转基因小鼠中进行。该化合物通常以 0.5-5 mg/kg 的剂量通过腹腔注射 (IP) 给药，其配制于诸如 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80 和 45% 生理盐水等溶剂中。注射后 1-24 小时收集肝脏、肾脏和脑组织等组织。提取核组分和胞质组分，并通过蛋白质印迹法分析 FKBP 标签蛋白的定位。可以评估该化合物在体内诱导核输入的能力及其后续功能效应。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
NICE-01 是一种双功能分子，分子量为 1206.83，分子式为 C63H76ClN7O13S。它由 (+)-JQ1 和 AP1867 通过 PEG2-二胺连接基连接而成。JQ1 部分具有高亲和力 BRD4 结合能力（Kd=94 pM）。该化合物仅供研究使用，其药代动力学性质（半衰期、生物利用度）尚未完全表征，但 PEG2 连接基的存在可能有助于提高溶解度并减少聚集。储存时，应按照分析证书中推荐的条件进行。
参考文献
[1]. Bifunctional small molecules that induce nuclear localization and targeted transcriptional regulation. J Am Chem Soc . 2023 Dec 6;145(48):26028-26037. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37992275/
其他信息
异常的细胞内蛋白质定位是包括癌症和神经退行性疾病在内的多种疾病发生发展的重要因素。为了更好地理解并可能通过调控蛋白质定位来实现治疗目标，我们设计了能够与不同细胞区室中的蛋白质结合的双功能化合物。我们发现这些化合物能够诱导胞质货物进入细胞核，并利用核定位的BRD4作为“载体”来实现胞质蛋白质的共转运和核捕获。我们利用该系统计算了跨核孔被动扩散的动力学常数，并证实了这些双功能分子在单细胞中的异质性，某些细胞需要较高的载体与货物表达比才能完成转运。我们还观察到货物整合到含有BRD4的凝聚体中。我们的研究表明，致癌突变核磷蛋白（NPM1c）和突变PI3K催化亚基α（PIK3CAE545K）是核转运的底物，提示这些化合物在癌症治疗中具有潜在的应用价值。此外，我们还证实，化学诱导BRD4定位至胞质DNA结合蛋白（即带有核输出信号的IRF1）可以诱导靶基因表达。这些结果表明，利用双功能分子诱导蛋白质定位可以重塑细胞回路，这对疾病治疗具有重要意义。
文献中未报道NICE-01的毒性数据。该化合物的设计目的是作为研究核输入的科研工具，而非治疗药物。根据其组成成分：JQ1是一种强效的BRD4抑制剂，可引起显著的细胞毒性和细胞周期阻滞，而AP1867的毒性通常被认为较低。由于BRD4抑制作用，预计该组合分子在高浓度下会具有一定的细胞毒性。处理生物活性小分子时应遵循标准安全预防措施，包括使用通风橱、手套和实验服。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C63H76CLN7O13S
分子量
1206.83
精确质量
1205.49103
CAS号
2982819-94-1
PubChem CID
169183208
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
LogP
8.8
tPSA
250Ų
SMILES
CC[C@@H](C1=CC(=C(C(=C1)OC)OC)OC)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O[C@H](CCC3=CC(=C(C=C3)OC)OC)C4=CC(=CC=C4)OCC(=O)NCCOCCOCCNC(=O)C[C@H]5C6=NN=C(N6C7=C(C(=C(S7)C)C)C(=N5)C8=CC=C(C=C8)Cl)C
InChi Key
USCBOLCYUGPYAF-YUZLDYPQSA-N
InChi Code
InChI=1S/C63H76ClN7O13S/c1-10-47(44-34-53(78-7)59(80-9)54(35-44)79-8)61(74)70-27-12-11-16-49(70)63(75)84-50(23-17-41-18-24-51(76-5)52(32-41)77-6)43-14-13-15-46(33-43)83-37-56(73)66-26-29-82-31-30-81-28-25-65-55(72)36-48-60-69-68-40(4)71(60)62-57(38(2)39(3)85-62)58(67-48)42-19-21-45(64)22-20-42/h13-15,18-22,24,32-35,47-50H,10-12,16-17,23,25-31,36-37H2,1-9H3,(H,65,72)(H,66,73)/t47-,48-,49-,50+/m0/s1
化学名
[(1R)-1-[3-[2-[2-[2-[2-[[2-[(9S)-7-(4-chlorophenyl)-4,5,13-trimethyl-3-thia-1,8,11,12-tetrazatricyclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaen-9-yl]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]ethylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]-3-(3,4-dimethoxyphenyl)propyl] (2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)butanoyl]piperidine-2-carboxylate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.8286 mL 4.1431 mL 8.2862 mL
5 mM 0.1657 mL 0.8286 mL 1.6572 mL
10 mM 0.0829 mL 0.4143 mL 0.8286 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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