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Streptavidin

别名: 9013-20-1; Strepavidin; RefChem:389287; DTXSID701054443; ...; Recombinant Streptavidin protein (PerCP); 链霉亲和素;链霉青合素;链霉亲合素;链霉亲和素 (来自链霉菌); 抗生物素蛋白;链霉亲合素,Promega;链亲合素;链亲和素;抗生物素蛋白链菌素,链亲合素;链霉抗生物素蛋白 (来自链霉菌);链酶亲和素;链霉抗生物素蛋白;链酶亲和素/链霉抗生物素蛋白/Streptavidin
目录号: V64179 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
链霉亲和素是大约 60 kDa 的同源四聚体。
Streptavidin CAS号: 9013-20-1
产品类别: Peptides | 多肽
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品描述
链霉亲和素是大约 60 kDa 的同源四聚体。链霉亲和素以高亲和力结合四个生物素分子。生物素与链霉亲和素的结合亲和力是迄今为止报道的最高的非共价相互作用之一，KD 约为 0.01 pM。链霉亲和素具有免疫抑制作用。
链霉亲和素 是一种来源于细菌 Streptomyces avidinii 的约 60 kDa 的同源四聚体蛋白。它以与其配体生物素形成自然界中最强的非共价键之一（K_D ~ 10⁻¹⁴ M）而闻名。除了在生物技术中的广泛应用外，链霉亲和素还被研究其免疫调节特性。研究表明，移植围术期使用链霉亲和素治疗可延长大鼠模型中的心脏移植物存活时间，其机制可能是通过抑制宿主 T 细胞增殖。其与生物素的结合热力学具有高度温度依赖性，在较高温度下由熵驱动转变为焓驱动。[1][2]
生物活性&实验参考方法
靶点
- Biotin: Streptavidin binds biotin with extremely high affinity. The dissociation constant (K_D) is ~1.00E-09 M at 2-20°C, decreasing to 2.88E-04 M at 40°C. The stoichiometry (n) of binding is 0.94-0.98 at 15-25°C. The heat capacity change (ΔC_p) is -459.9 cal/mol·K (2-30°C). [1]
- T-cells (for immunomodulation): Streptavidin suppresses the proliferative response of host T-cells to alloantigens. In mixed lymphocyte culture, 2-200 μg/mL streptavidin inhibits Lewis T-cell proliferation against WF stimulators by 76-83% (P < 0.001). [2]
体外研究 (In Vitro)
- 链霉亲和素-生物素结合热力学（ITC）： 使用亲和等温滴定量热法，在 2°C 至 40°C 的温度下，用生物素（750 μM）滴定 链霉亲和素（40 μM）。结合是自发的（所有温度下 ΔG 均为负值）。在较低温度（2-20°C）下，K_D 为 1.00E-09 M；在较高温度（25-40°C）下，K_D 降至 1.79E-05 至 2.88E-04 M，表明亲和力降低。在 15-25°C 时化学计量比（n）约为 1，但在极端温度下增加至 1.59-5.76。反应在 15-25°C 时为熵驱动，但在 30-40°C 时为焓驱动。热容变化（ΔC_p）为 -459.9 cal/mol·K（2-30°C），表明极性溶剂化作用。[1]
- T 细胞增殖抑制（MLR）： 在使用 Lewis responder T 细胞和 γ 辐照的 WF 刺激细胞进行的混合淋巴细胞反应中，链霉亲和素 在 2-200 μg/mL 浓度下，与未处理的 responder 相比，显著抑制了 T 细胞增殖，抑制率达 76-83%（P < 0.001）。较低浓度（0.1-0.2 μg/mL）无显著效果。[2]
与未治疗的反应者相比，链霉亲和素 (2-200 μg/mL) 极大地抑制了 Lewis T 细胞向 WF 的增殖，抑制率达 76%–83%[1]。
体内研究 (In Vivo)
- 心脏移植物存活（大鼠模型）： 在高 responder 的 WF-to-Lewis 大鼠心脏移植模型中，移植围术期使用 链霉亲和素（8-60 mg/kg，腹腔注射，连续 5 天）联合单剂量抗淋巴细胞血清（0.5 mL，第 0 天）治疗，显著延长了移植物的存活时间。平均存活时间从 7.3 ± 0.5 天（未治疗）和 8.4 ± 0.5 天（仅 ALS）延长至 15-24 天（取决于剂量，例如 60 mg/kg：MST 24 ± 1 天）。使用 10 或 20 mg/kg 链霉亲和素联合 ALS 治疗 10 天，MST 分别为 18 ± 1 和 21 ± 1 天（P < 0.001）。然而，与低 responder 的 Lewis-to-ACI 组合不同，在此高 responder 组合中未实现永久性移植物存活。[2]
在高反应 WF-Lewis 组合中，链霉亲和素 (8-80 mg/kg) 治疗有利于延长大鼠同种异体心脏移植[2]。
酶活实验
- 结合热力学的等温滴定量热法： 将 链霉亲和素（40 μM 溶于 PBS, pH 7.8, 350 μL）加入样品池，将生物素（750 μM 溶于 PBS, pH 7.8, 250 μL）加入滴定注射器。滴定参数为 30 次注射，每次 5 μL，间隔 200 秒，搅拌速度为 75 rpm。在九个不同温度（2°C 至 40°C）下进行测定。使用 NanoAnalyze 软件积分原始数据，并使用独立结合模型拟合等温线，得到 K_D、n、ΔH 和 ΔS。计算 ΔG，并通过 ΔH 对温度的斜率得出 ΔC_p。[1]
细胞实验
- 混合淋巴细胞反应（用于 T 细胞增殖）： 将 Lewis 大鼠脾细胞（反应细胞）与 γ 辐照的 WF 大鼠脾细胞（刺激细胞）在存在不同浓度 链霉亲和素（0.1-200 μg/mL）的条件下共培养。测量增殖情况，并与未处理的反应细胞（无链霉亲和素）相比计算抑制率。[2]
细胞活力测定[1]
细胞类型： Lewis T 细胞
测试浓度： 2-200 μg/mL
孵育时间：
实验结果：与未治疗的反应者相比，WF刺激剂对Lewis T细胞的增殖抑制76%-83%，较低浓度0.1和0.2 μg/mL并没有显着抑制抑制T细胞增殖。
动物实验
- 大鼠心脏移植模型： 使用改良的 Ono-Lindsey 技术，将 WF (RT1) 大鼠心脏异位移植到 Lewis (RT1) 大鼠受体体内。受体在移植后腹腔注射 链霉亲和素（8-80 mg/kg），连续 5 或 10 天。在第 0 天给予单剂量抗淋巴细胞血清（0.5 mL）。通过每日触诊评估移植物存活，排斥定义为触及不到心跳，并通过组织学确认。[2]
动物/疾病模型：Lewis 大鼠[2]
剂量：8、12、20、40、60 或 80 mg/kg
给药途径：移植后连续 5 天腹腔注射，并于第 0 天单次注射 0.5 mL 抗淋巴细胞血清 (ALS)
实验结果：心脏同种异体移植存活时间从未接受治疗的对照组和 ALS 治疗组的中位生存时间 (MST) 分别延长至 15±1、20±3、16±3、17±3 和 23±2 天。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
- 体外细胞毒性： 未直接评估；然而，在高达 200 μg/mL 的浓度下，链霉亲和素 在 MLR 培养中未引起非特异性细胞死亡，因为抑制是针对同种异体抗原驱动的增殖。[2]
- 体内毒性（体重减轻）： 使用 8-60 mg/kg 的 链霉亲和素 治疗 5 天（联合 ALS）导致第一周内出现 12-20% 的短暂性体重减轻，3 周内完全恢复。10-20 mg/kg 治疗 10 天导致约 25% 的体重减轻，恢复延迟（30-40 天）。80 mg/kg 剂量（5 天疗程）对所有动物均致死，在移植后 12-15 天内死亡。推测体重减轻是由于生物素结合作用，可能抑制了细胞内代谢。[2]
参考文献

[1]. The effects of temperature on streptavidin-biotin binding using affinity isothermal titration calorimetry. AIMS Biophysics. 2020, 7(4): 236-247.

[2]. Effect of streptavidin on cardiac allograft prolongation is due to host T-Cell suppression. Transplant Proc. Jan-Feb 2005;37(1):116-8.
其他信息
- 蛋白结构和特性： 链霉亲和素 是一个约 60 kDa 的同源四聚体。它具有耐热性（Tm ≥ 75°C，结合生物素后升至 112°C）、抗蛋白水解和抗化学变性剂的特性。四聚体有四个生物素结合位点。紧密结合由氢键、范德华力和疏水相互作用驱动。N54A 界面突变阻止二聚化并将亲和力降低至 K_D ~ 10⁻⁷ M。[1]
- 免疫调节机制： 提出的延长移植物存活机制是抑制宿主 T 细胞在接触抗原后的活化。这一机制得到了体外发现的支持，即链霉亲和素在混合淋巴细胞培养中抑制 T 细胞对同种异体抗原的增殖反应。[2]
- 免疫抑制治疗的背景： 在移植模型中，链霉亲和素与抗淋巴细胞血清联合使用以实现显著的移植物存活延长。其效果具有剂量依赖性，并且在低 responder（Lewis-to-ACI）品系组合中比在高 responder（WF-to-Lewis）品系组合中更有效。[2]
链霉亲和素是一种有机氯化合物。
链霉亲和素是链霉菌（Streptomyces avidinii）的一种60 kDa胞外蛋白，具有四个高亲和力生物素结合位点。与AVIDIN不同，链霉亲和素的等电点接近中性，且不含碳水化合物侧链。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
精确质量
376.985
CAS号
9013-20-1
PubChem CID
51062757
外观&性状
White to off-white solid powder
tPSA
65.6
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
20
分子复杂度/Complexity
351
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1CC[N+](=C(C2=CC(=CC=C2)Cl)SCC(=O)O)CC1.[Br-]
InChi Key
RTWACOLFHOBGCE-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C14H16ClNO2S.BrH/c15-12-6-4-5-11(9-12)14(19-10-13(17)18)16-7-2-1-3-8-16;/h4-6,9H,1-3,7-8,10H2;1H
化学名
2-[(3-chlorophenyl)-piperidin-1-ium-1-ylidenemethyl]sulfanylacetic acid bromide
别名
9013-20-1; Strepavidin; RefChem:389287; DTXSID701054443; ...; Recombinant Streptavidin protein (PerCP);
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O: ~100 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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