Streptavidin

别名: 9013-20-1; Strepavidin; RefChem:389287; DTXSID701054443; ...; Recombinant Streptavidin protein (PerCP); 链霉亲和素;链霉青合素;链霉亲合素;链霉亲和素 (来自链霉菌); 抗生物素蛋白;链霉亲合素,Promega;链亲合素;链亲和素;抗生物素蛋白链菌素,链亲合素;链霉抗生物素蛋白 (来自链霉菌);链酶亲和素;链霉抗生物素蛋白;链酶亲和素/链霉抗生物素蛋白/Streptavidin
目录号: V64179 纯度: ≥98%
链霉亲和素是大约 60 kDa 的同源四聚体。
Streptavidin CAS号: 9013-20-1
产品类别: Peptides | 多肽
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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产品描述
链霉亲和素是一种分子量约为 60 kDa 的同源四聚体。链霉亲和素能以高亲和力结合四个生物素分子。生物素与链霉亲和素的结合亲和力是迄今为止报道的最高非共价相互作用之一,其解离常数 (KD) 约为 0.01 pM。链霉亲和素具有免疫抑制作用。
链霉亲和素是一种分子量约为 60 kDa 的同源四聚体蛋白,来源于链霉菌(Streptomyces avidinii)。它以能与配体生物素形成自然界最强的非共价键之一而闻名(K_D ~ 10⁻¹⁴ M)。除了在生物技术领域的广泛应用外,链霉亲和素的免疫调节特性也备受关注。研究表明,在大鼠模型中,围移植期使用链霉亲和素治疗可以延长心脏同种异体移植的存活时间,这可能是通过抑制宿主 T 细胞增殖实现的。链霉亲和素与生物素的结合热力学性质高度依赖于温度,在较高温度下由熵驱动过程转变为焓驱动过程。[1][2] 链霉亲和素是由链霉菌(Streptomyces avidinii)产生的一种蛋白质,是一种约60 kDa的四聚体。链霉亲和素与亲和素一样,具有四个生物素结合位点。生物素-链霉亲和素复合物的解离常数(Kd)约为~10^-15 M。链霉亲和素常用于蛋白质印迹、酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞术和亲和纯化等应用。与亲和素相比,链霉亲和素缺乏糖基化修饰,从而降低了非特异性结合,提高了检测灵敏度。它常与酶、荧光染料或纳米颗粒偶联,用于靶向检测和分子标记。链霉亲和素具有免疫抑制作用。该蛋白质通常固定在固体载体上,形成亲和基质,可从复杂的混合物中选择性地捕获生物素化分子,从而实现其纯化。
生物活性&实验参考方法
靶点
- Biotin: Streptavidin binds biotin with extremely high affinity. The dissociation constant (K_D) is ~1.00E-09 M at 2-20°C, decreasing to 2.88E-04 M at 40°C. The stoichiometry (n) of binding is 0.94-0.98 at 15-25°C. The heat capacity change (ΔC_p) is -459.9 cal/mol·K (2-30°C). [1]
- T-cells (for immunomodulation): Streptavidin suppresses the proliferative response of host T-cells to alloantigens. In mixed lymphocyte culture, 2-200 μg/mL streptavidin inhibits Lewis T-cell proliferation against WF stimulators by 76-83% (P < 0.001). [2]
Streptavidin targets biotin. It binds biotin with extremely high affinity (Kd ~10^-15 M). This strong and specific interaction is the basis for its widespread use in various biochemical and molecular biology applications.
体外研究 (In Vitro)
链霉亲和素-生物素结合热力学 (ITC):采用亲和等温滴定量热法,在 2°C 至 40°C 的温度范围内,用生物素 (750 μM) 滴定链霉亲和素 (40 μM)。该结合反应是自发的(所有温度下 ΔG 均为负值)。在较低温度 (2-20°C) 下,K_D 为 1.00E-09 M;在较高温度 (25-40°C) 下,K_D 降至 1.79E-05 至 2.88E-04 M,表明亲和力降低。在 15-25°C 时,化学计量比 (n) 约为 1,但在极端温度下增加至 1.59-5.76。该反应在 15-25°C 时由熵驱动,而在 30-40°C 时由焓驱动。热容变化 (ΔC_p) 为 -459.9 cal/mol·K (2-30°C),表明存在极性溶剂化。[1]
- T 细胞增殖抑制 (MLR):在以 Lewis 反应性 T 细胞和 γ 射线照射的 WF 刺激脾细胞进行的混合淋巴细胞反应中,浓度为 2-200 μg/mL 的链霉亲和素显著抑制了 T 细胞增殖,抑制率达 76-83%(与未处理的反应细胞相比,P < 0.001)。较低浓度 (0.1-0.2 μg/mL) 无显著影响。[2]
与未处理的反应细胞相比,链霉亲和素 (2-200 μg/mL) 可显著抑制 Lewis T 细胞对 WF 的增殖,抑制率达 76%–83%[1]。
链霉亲和素是一种能与生物素高亲和力结合的蛋白质。其体外活性通过其与生物素化分子的结合能力来评估,这可以通过表面等离子共振(SPR)或酶联免疫吸附试验(ELISA)进行测量。生物素-链霉亲和素复合物的解离常数(Kd)约为~10^-15 M。
体内研究 (In Vivo)
心脏移植存活率(大鼠模型):在WF-Lewis大鼠心脏移植高反应性模型中,移植前后受体接受链霉亲和素(8-60 mg/kg,腹腔注射,连续5天)治疗,并联合单次注射抗淋巴细胞血清(0.5 mL,第0天),可显著延长移植存活时间。平均存活时间(MST)从7.3 ± 0.5天(未接受治疗组)和8.4 ± 0.5天(仅接受抗淋巴细胞血清治疗组)延长至15-24天,具体延长时间取决于剂量(例如,60 mg/kg:MST为24 ± 1天)。链霉亲和素10 mg/kg或20 mg/kg联合抗淋巴细胞血清治疗10天,MST分别为18 ± 1天和21 ± 1天(P < 0.001)。然而,与低反应性Lewis-ACI组合不同,这种高反应性组合并未实现永久性移植存活。[2]在高反应性WF-Lewis组合中,链霉亲和素(8-80 mg/kg)治疗有利于延长大鼠心脏同种异体移植的存活时间。[2]链霉亲和素在体内不用作治疗剂。它是一种用于各种生化分析和亲和纯化技术的试剂。其用途主要是在体外用于检测和纯化生物素化分子。
酶活实验
等温滴定量热法 (ITC) 用于结合热力学研究:将链霉亲和素(40 μM,溶于 pH 7.8 的 PBS 缓冲液,350 μL)加入样品池,将生物素(750 μM,溶于 pH 7.8 的 PBS 缓冲液,250 μL)加入亲和 ITC 仪器的滴定注射器中。在 75 rpm 的搅拌下,以 200 秒的间隔进行 30 次 5 μL 的滴定。该实验在九个不同的温度(2°C 至 40°C)下进行。使用 NanoAnalyze 软件对原始数据进行积分,并采用独立的结合模型拟合等温线,得到 K_D、n、ΔH 和 ΔS。计算 ΔG,并根据 ΔH 与温度的关系曲线的斜率导出 ΔC_p。 [1]
链霉亲和素与生物素的结合可以通过生物素结合试验进行评估。将生物素固定在固相载体上,然后加入链霉亲和素。使用标记的检测试剂(例如酶联抗体)测量结合的链霉亲和素的量。
细胞实验
混合淋巴细胞反应 (MLR) 用于检测 T 细胞增殖:将 Lewis 大鼠脾细胞(反应细胞)与经 γ 射线照射的 WF 大鼠脾细胞(刺激细胞)在不同浓度的链霉亲和素 (0.1-200 μg/mL) 存在下进行共培养。测量细胞增殖情况,并计算相对于未处理的反应细胞(不含链霉亲和素)的抑制率。 [2]
细胞活力检测[1]
细胞类型:Lewis T 细胞
测试浓度:2-200 μg/mL
孵育时间:
实验结果:与未处理的应答细胞相比,抑制 Lewis T 细胞对 WF 刺激的增殖达 76%-83%,较低浓度(0.1 和 0.2 μg/mL)对 T 细胞增殖的抑制作用不显著。
链霉亲和素不用于药理学研究的标准细胞培养。它是一种用于各种生化检测的试剂,例如蛋白质印迹法、酶联免疫吸附试验 (ELISA) 和流式细胞术。它用于检测和定量细胞裂解液或细胞表面的生物素化分子。
动物实验
大鼠心脏同种异体移植模型:采用Ono和Lindsey改良的方法,将WF (RT1)大鼠心脏异位移植到Lewis (RT1)大鼠受体中。移植后,受体连续5天或10天腹腔注射链霉亲和素(8-80 mg/kg)。于移植当天(第0天)给予单剂量抗淋巴细胞血清(0.5 mL)。每日触诊评估移植存活情况,组织学证实为触诊停止心跳即为排斥反应。 [2]
动物/疾病模型:Lewis大鼠[2]
剂量:8、12、20、40、60或80 mg/kg
给药途径:移植后连续5天腹腔注射,并于第0天单次注射0.5 mL抗淋巴细胞血清(ALS)。
实验结果:心脏同种异体移植存活时间(MST)显著延长,从未接受治疗的对照组和ALS治疗组的7.3±0.5天和8.4±0.5天分别延长至15±1天、20±3天、16±3天、17±3天和23±2天。
链霉亲和素在动物研究中并非作为活性化合物使用,而是作为试剂用于涉及动物样本的检测中。该蛋白质从未被用于动物的治疗或研究目的。
药代性质 (ADME/PK)
链霉亲和素的分子量约为55-60 kDa,由四条基本相同的多肽链组成。它是一种冻干白色粉末,可溶于水(1 mg/mL)。该蛋白应储存于-20°C,并防潮。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外细胞毒性:未直接评估;然而,在浓度高达 200 μg/mL 时,链霉亲和素在混合淋巴细胞反应 (MLR) 培养中未引起非特异性细胞死亡,因为其抑制作用仅限于同种异体抗原驱动的增殖。[2]
- 体内毒性(体重减轻):连续 5 天给予 8-60 mg/kg 的链霉亲和素(伴有肌萎缩侧索硬化症 (ALS)),导致第一周出现 12-20% 的短暂体重减轻,并在 3 周内完全恢复。连续 10 天给予 10-20 mg/kg 的链霉亲和素导致约 25% 的体重减轻,且恢复延迟(30-40 天)。连续 5 天给予 80 mg/kg 的链霉亲和素对所有动物均致死,导致移植后 12-15 天死亡。体重减轻被认为是由生物素结合引起的,生物素结合可能抑制细胞内代谢。 [2]
链霉亲和素的毒理学数据并不十分详尽。它是一种通常被认为对研究用途安全的蛋白质。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。
参考文献

[1]. The effects of temperature on streptavidin-biotin binding using affinity isothermal titration calorimetry. AIMS Biophysics. 2020, 7(4): 236-247.

[2]. Effect of streptavidin on cardiac allograft prolongation is due to host T-Cell suppression. Transplant Proc. Jan-Feb 2005;37(1):116-8.

其他信息
蛋白质结构和性质:链霉亲和素是一种分子量约为 60 kDa 的同源四聚体。它耐热(熔点 ≥ 75°C,生物素结合后升至 112°C)、耐蛋白水解和耐化学变性。该四聚体具有四个生物素结合位点。其紧密结合由氢键(例如,来自 N23、S27、Y43、S45 和 D128 的氢键)、范德华力和疏水相互作用(例如,来自 Trp-79、Trp-92、Trp-108 和 Trp-120 的疏水相互作用)驱动。N54A 界面突变会阻止二聚化,并将亲和力降低至 K_D ~ 10⁻⁷ M。[1]
- 免疫调节机制:同种异体移植延长存活期的机制被认为是抑制抗原暴露后宿主 T 细胞的活化。体外实验结果表明,链霉亲和素能够抑制混合淋巴细胞培养中T细胞对同种异体抗原的增殖反应,这一发现支持了上述观点。[2]
- 免疫抑制治疗背景:在移植模型中,链霉亲和素与抗淋巴细胞血清(ALS)联合使用,显著延长了移植存活时间。该效果呈剂量依赖性,且在低反应菌株(Lewis-to-ACI)组合中比在高反应菌株(WF-to-Lewis)组合中更有效。[2]
链霉亲和素是一种有机氯化合物。链霉亲和素是链霉菌(Streptomyces avidinii)的一种60 kDa胞外蛋白,具有四个高亲和力生物素结合位点。与AVIDIN不同,链霉亲和素的等电点接近中性,且不含碳水化合物侧链。
链霉亲和素因其对生物素极高的亲和力,在生物化学和分子生物学中被广泛应用。它可用于多种应用,包括蛋白质印迹法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞术和亲和纯化。由于其缺乏糖基化修饰,可减少非特异性结合,从而提高检测灵敏度。该蛋白未获准用于治疗用途,仅限实验室研究。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
精确质量
376.985
CAS号
9013-20-1
PubChem CID
51062757
外观&性状
White to off-white solid powder
tPSA
65.6
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
20
分子复杂度/Complexity
351
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1CC[N+](=C(C2=CC(=CC=C2)Cl)SCC(=O)O)CC1.[Br-]
InChi Key
RTWACOLFHOBGCE-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C14H16ClNO2S.BrH/c15-12-6-4-5-11(9-12)14(19-10-13(17)18)16-7-2-1-3-8-16;/h4-6,9H,1-3,7-8,10H2;1H
化学名
2-[(3-chlorophenyl)-piperidin-1-ium-1-ylidenemethyl]sulfanylacetic acid bromide
别名
9013-20-1; Strepavidin; RefChem:389287; DTXSID701054443; ...; Recombinant Streptavidin protein (PerCP);
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O: ~100 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们