Muvalaplin (LY3473329)   中文名称: 莫伐倍林

Lipoprotein(a) (Lp(a))[1]
The primary target of Muvalaplin is the interaction between apo(a) and apoB100, which is essential for Lp(a) particle assembly. By binding to the KIV7-8 domain of apo(a), it blocks this interaction and prevents Lp(a) formation. It does not affect Lp(a) expression.

脂蛋白(a) (Lp(a)) 是一种独立的、致病性的心血管危险因素，它是由低密度脂蛋白 (LDL) 颗粒与载脂蛋白(a) (apo(a))^1,2相互作用形成的脂蛋白颗粒。Apo(a) 首先通过 Kringle IV (KIV) 7 和 8 结构域与 LDL 上的载脂蛋白 B-100 (apoB-100) 的赖氨酸残基结合，随后 apo(a) 与 apoB-100 之间形成二硫键，生成 Lp(a)（参考文献 3-7）。本文研究表明，小分子与 apo(a) KIV7-8 的相互作用可以抑制 Lp(a) 形成的第一步。我们筛选出能与 apo(a) KIV7-8 结合的化合物，并通过化学优化和多价性的进一步应用，合成出亚纳摩尔级效力的化合物，这些化合物能够抑制 Lp(a) 的形成 [2]。

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在体外，Muvalaplin 是一种强效且特异性的 Lp(a) 形成抑制剂。它能破坏 apo(a) 和 apoB100 之间的初始非共价相互作用。通过抑制 Lp(a) 组装的这一关键步骤，它可以阻止成熟 Lp(a) 颗粒的形成。

原型化合物和一种强效多价干扰剂LY3473329（muvalaplin）的口服剂量降低了转基因小鼠和食蟹猴体内的Lp(a)水平。尽管多价分子与大鼠纤溶酶原的Kringle结构域结合并降低纤溶酶活性，但纤溶酶原序列的物种选择性差异表明，抑制剂分子会降低人体内Lp(a)的水平，但不会降低纤溶酶原的水平。这些数据支持LY3473329的临床开发——该药物已进入II期临床试验——作为一种强效且特异性的口服药物，用于降低Lp(a)水平[2]。体内研究表明，口服Muvalaplin可降低转基因小鼠和食蟹猴体内的Lp(a)水平。它已进入II期临床试验，作为一种强效且特异性的口服药物，用于降低Lp(a)水平。

针对Muvalaplin的非细胞检测通常包括使用生化检测方法（例如表面等离子共振(SPR)或ELISA）来测量其抑制apo(a)和apoB100相互作用的能力。这些检测方法可以证实其作用机制。

使用表达 apo(a) 和 apoB100 的细胞系进行 Muvalaplin 的细胞活性检测。用该化合物处理细胞，并使用特异性抗体检测 Lp(a) 的生成。评估该化合物对 Lp(a) 组装和分泌的影响。

LPA转基因小鼠研究[2]
LPA基因（GenBank登录号NM_005577）编码人载脂蛋白(a)，该蛋白包含一个信号肽、一个KIV 1型重复序列、六个KIV 2型重复序列、一个KIV 3-10型重复序列、一个KV结构域和一个蛋白酶结构域。该基因被亚克隆到含有小鼠白蛋白启动子盒和人生长激素多聚腺苷酸化信号的转基因载体中。通过LPA转基因载体的原核注射构建转基因小鼠品系。对8只转基因创始人小鼠进行基因分型和血浆载脂蛋白(a)水平检测，以评估LPA的种系遗传情况。将阳性创始人小鼠与ApoB100转基因小鼠（Taconic 1004型）杂交，并根据种系传递的确认、LPA和huApoB100转基因的鉴定以及血浆中Lp(a)的水平，选择所得小鼠品系（B6.SJL-Tg(APOB)1102Sgy Tg(Alb-LPA)32Arte）。选择同时携带两种转基因的半合子小鼠进行药理学研究。研究对象为雌性Lp(a)双转基因小鼠（年龄约7-17月龄）。小鼠饲养于标准光照周期（12小时光照，12小时黑暗）、室温（22 ± 4 °C）、相对湿度30-70%的笼子中。小鼠通过笼卡上的编号进行识别。小鼠到达后，饲喂常规饲料（Harlan Teklad 2014饲料）。本研究采用区组随机分配工具（BRAT），根据小鼠的体重和基线血浆Lp(a)浓度，将小鼠随机分配至各治疗组（每组n=5，除非另有说明）。例如，在一项Lp(a)转基因小鼠研究中，预先筛选了66只小鼠的基线Lp(a)水平，平均Lp(a)水平为45±1.8 µg ml−1（范围20–78 µg ml−1）。小鼠分别口服给予不同化合物（溶于溶剂中，剂量为10 ml kg−1，含1%羟乙基纤维素（HEC）、0.25% Tween-80和消泡剂）或仅给予溶剂作为对照，每日两次，连续五天。在指定时间点通过尾部采血采集血样，并由一位对分组情况不知情的实验人员采用ELISA法测定Lp(a)水平。简而言之，脂蛋白颗粒被山羊抗Lp(a)抗体包被的微孔板（Abcam ab31675，用HEPES缓冲盐溶液1:12,500稀释）捕获，洗涤微孔板后，使用HRP标记的山羊抗apoB抗体（Abcam ab27622，1:3,000稀释）检测样品。加入比色过氧化物酶底物3,3',5,5'-TMB，并用1 N硫酸终止反应。使用Molecular Devices SpectraMax酶标仪在450 nm处读取吸光度。在给药第5天给药后4小时采集血样以确认药物暴露。未评估完整的药代动力学(PK)曲线。化合物浓度通过非良好实验室规范(GLP)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析，从干血斑中测定。数据分析采用 GraphPad Prism v.9.5.1。[2]
食蟹猴研究[2]
雌性或雄性中华食蟹猴（Macaca fascicularis cynomolgus）（详见图例），年龄不详，体重2.0 kg至5.0 kg，饲养于室温（20–26 °C）下，光照周期为12小时光照，12小时黑暗，相对湿度30%至70%。为丰富猴子的环境，提供水果、蔬菜或膳食，并配备各种笼内设施。每日两次喂食Purina Lab 5048C饲料，每只猴子均通过笼卡进行识别。根据体重和基线血浆Lp(a)浓度（采用市售Randox试剂盒（Randox LP2757）测定），使用BRAT法将猴子随机分配至各治疗组。在一项食蟹猴研究中，对39只猴子进行了基线Lp(a)水平的预筛选，平均Lp(a)水平为350 ± 57 µg ml−1（范围53–1,667 µg ml−1）。猴子分别口服给予赋形剂（纯净水）或化合物，每日一次（QD）或每日两次（BID），持续14天，剂量水平和给药频率如先前针对每种化合物所述。在给药前几天采集血浆样本以确定基线Lp(a)水平，并在研究期间的早晨给药后再次采集血浆样本。由一位对分组情况不知情的调查员使用Randox试剂盒测定Lp(a)水平，并以校准系列（Randox LP3404）进行定量。数据使用GraphPad Prism v.9.5.1进行分析。非人灵长类动物给药后Lp(a)水平的百分比变化使用SAS v.9.4（SAS）中的重复测量方差分析进行分析。在每个时间点，采用 Bonferroni 校正法将各治疗组的 Lp(a) 百分比变化与溶媒组进行比较。所有猴子均在给药前以及第 1、3、5、9 和 14 天的 4 小时时间点采集血浆样本。在第 15 天，对每个剂量组的前三只猴子进行完整的药代动力学分析，采集给药前以及给药后 1、2、4、8、12、24、48 和 96 小时的样本。采用非 GLP LC-MS/MS 法测定血浆样本中化合物的浓度。使用 Watson 软件（v.7.5）计算非房室血浆药代动力学参数。

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Muvalaplin 的体内动物实验在表达人 Lp(a) 的转基因小鼠或食蟹猴中进行。该化合物经口服给药，并测量血浆 Lp(a) 水平。评估其对血脂谱和心血管终点的影响。

穆瓦拉普林的药代动力学研究表明其具有口服生物利用度。临床前和临床研究已对其半衰期和其他药代动力学参数进行了表征，支持其作为口服治疗药物的开发。

穆瓦拉普林的毒理学数据显示，其在临床前研究中具有可接受的安全性。目前正在进行临床试验，并对其安全性进行监测。最常见的不良反应尚未完全明确。

[1]. Bhatia HS, et al. Lipoprotein(a): Evidence for Role as a Causal Risk Factor in Cardiovascular Disease and Emerging Therapies. J Clin Med. 2022 Oct 13;11(20):6040.
[2]. Discovery of potent small-molecule inhibitors of lipoprotein(a) formation. Nature. 2024 May 8. doi: 10.1038/s41586-024-07387-z.

Muvalaplin 是一种小分子药物。目前正在进行临床试验（NCT05563246，即 LY3473329 研究），受试者为高脂蛋白(a)水平且心血管事件风险高的成年患者。Muvalaplin 的单同位素分子量为 710.4 Da。Muvalaplin (LY3473329) 是一种首创的口服 Lp(a) 抑制剂。它由礼来公司开发，旨在降低与 Lp(a) 水平升高相关的心血管风险。与注射疗法相比，其口服给药途径具有显著优势。

C42H54N4O6

710.901371479034

710.4

C, 70.96; H, 7.66; N, 7.88; O, 13.50

2565656-70-2

155369486

Off-white to light yellow solid

-2.8

151

6

10

18

52

1020

6

C1CNC[C@H]1[C@H](CC2=CC(=CC=C2)CN(CC3=CC=CC(=C3)C[C@@H]([C@H]4CCNC4)C(=O)O)CC5=CC=CC(=C5)C[C@@H]([C@H]6CCNC6)C(=O)O)C(=O)O

BRLGERLDHZRETI-BGBFCPIGSA-N

InChI=1S/C42H54N4O6/c47-40(48)37(34-10-13-43-22-34)19-28-4-1-7-31(16-28)25-46(26-32-8-2-5-29(17-32)20-38(41(49)50)35-11-14-44-23-35)27-33-9-3-6-30(18-33)21-39(42(51)52)36-12-15-45-24-36/h1-9,16-18,34-39,43-45H,10-15,19-27H2,(H,47,48)(H,49,50)(H,51,52)/t34-,35-,36-,37-,38-,39-/m0/s1

(2S,2'S,2''S)-3,3',3''-((nitrilotris(methylene))tris(benzene-3,1-diyl))tris(2-((R)-pyrrolidin-3-yl)propanoic acid)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 11.36 mg/mL (15.98 mM)
H2O: < 0.1 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。