| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Rhodopsin Epitope Tag is a peptide tag that does not have a biological target in the context of a drug. Instead, it is a molecular tool that is recognized by specific anti-rhodopsin antibodies (e.g., monoclonal antibody Rho-1D4). The tag is genetically fused to the N-terminus, C-terminus, or internal region of a protein of interest via recombinant DNA technology. The epitope tag serves as an antigenic determinant that allows the fusion protein to be detected, purified, or immunoprecipitated using anti-rhodopsin antibodies. This system does not target any cellular pathway; rather, it is a tool for studying protein expression, localization, interaction, and function. The tag is small (9 amino acids) and is generally considered to have minimal impact on the structure or function of the fusion protein.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
牛视紫红质C端区域存在一种名为视紫红质表位标签（Rhodopsin Epitope Tag）的9个氨基酸肽段。许多抗视紫红质抗体能够识别该视紫红质表位标签，因此它被广泛用作表位标签。研究人员利用合成肽段确定了四种单克隆抗体（rho 1D4、1C5、3A6和3D6）的特异性，这些抗体是通过免疫含有视紫红质的视杆细胞外节而产生的。所有这些抗体均能识别由4-11个氨基酸残基组成的线性抗原决定簇，并与视紫红质羧基末端（COOH末端）的18个氨基酸残基相互作用[1]。
视紫红质表位标签本身不具有生物活性；它是一种用于体外生化和细胞生物学实验的化学工具。在体外，该肽段可用作免疫检测中的阳性对照或阻断肽。例如，在ELISA或Western blot实验中，合成肽段（视紫红质表位标签）可与标记的融合蛋白竞争抗体结合位点，从而验证抗体-抗原相互作用的特异性。当该肽段与抗视紫红质抗体预孵育时，它会阻断抗体与表位标记蛋白的结合，从而降低信号强度。这可作为特异性对照。此外，该肽段还可与载体蛋白（例如KLH、BSA）偶联，用于制备针对该标签的多克隆抗体。在细胞实验中，该标签不影响细胞活力或信号传导。它被认为是惰性的，仅用作检测标记。 |
| 酶活实验 |
以下是使用视紫红质表位标签作为ELISA对照的典型非细胞（无细胞）实验方案。将96孔板每孔加入100 uL含有1 ug/mL表位标签融合蛋白的PBS溶液（pH 7.4），并在4℃下孵育过夜。用PBS-T（含0.05% Tween-20的PBS）洗涤三次，然后在室温下用3% BSA的PBS-T溶液封闭1小时。对于竞争性实验，将一抗（例如，抗视紫红质抗体Rho-1D4，1:1000稀释）与浓度递增的合成视紫红质表位标签肽（0.1-100 ug/mL）在室温下预孵育1小时。将抗体-肽混合物加入孔中（100 uL/孔），室温孵育1-2小时。用PBS-T洗涤三次。加入稀释度为1:5000的二抗（HRP标记的抗小鼠或抗兔抗体，视情况而定）（100 uL/孔），用1% BSA-PBS-T稀释，孵育1小时。洗涤后，加入100 uL TMB底物，避光孵育5-15分钟。加入50 uL 1 M H2SO4终止反应，在450 nm处读取吸光度。竞争百分比以不含肽的对照组为基准计算。肽应以浓度依赖的方式阻断抗体结合，从而证实抗体对该表位的特异性。
|
| 细胞实验 |
典型的体外细胞实验方案是将视紫红质表位标签用作哺乳动物细胞表达融合蛋白的标签。首先，将目标基因克隆到含有视紫红质表位标签序列的哺乳动物表达载体中（例如，pCDNA3.1-RhoTag）。然后，通过测序验证构建体。将人胚肾细胞（HEK293T）以5×10⁵个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养基为含10%胎牛血清的DMEM，并在37℃、5% CO2条件下培养24小时。之后，使用转染试剂（例如，Lipofectamine 3000），按照制造商的说明书，将2 ug质粒DNA转染到细胞中。培养48-72小时后，收集细胞，用PBS洗涤，并在冰上用RIPA裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脱氧胆酸钠，0.1% SDS，蛋白酶抑制剂）裂解30分钟。裂解液在4℃下以14,000 g离心15分钟澄清。取上清液进行Western blot分析：样品经SDS-PAGE电泳分离后，转移至PVDF膜，用5%脱脂奶粉封闭，并在4℃下与抗视紫红质抗体（Rho-1D4，1:1000-1:5000）孵育过夜，随后与HRP标记的二抗孵育。最后进行化学发光检测。免疫沉淀实验中，将澄清的细胞裂解液与抗视紫红质抗体（2-5 ug）和蛋白A/G琼脂糖珠在4℃下孵育2-4小时，然后洗涤，用2×SDS上样缓冲液洗脱，并通过Western blot分析。该标签还可用于对4%多聚甲醛固定的细胞中的融合蛋白进行免疫荧光定位。
|
| 动物实验 |
视紫红质表位标签的体内动物实验方案并非标准方案，因为该标签用于体外或离体蛋白质检测，而非作为治疗药物给药。然而，若要评估视紫红质标签治疗性蛋白在动物模型中的表达，典型的实验方案是将标记蛋白（例如，标记抗体或酶）静脉或腹腔注射给小鼠。例如，将含有视紫红质表位标签的重组融合蛋白（1-10 mg/kg）静脉注射到6-8周龄的雌性BALB/c小鼠体内。在注射后不同时间点（例如，0.5、1、2、4、8、24、48小时），从尾静脉采集血液样本至EDTA抗凝管中。通过离心分离血浆，并储存于-80℃。在最终时间点对动物实施安乐死，并采集组织（例如肝脏、肾脏、脾脏、肺脏），进行速冻，然后在RIPA缓冲液中匀浆。使用抗视紫红质抗体，通过Western blot或ELISA分析血浆样本和组织裂解液，以检测标记蛋白。使用相同纯化蛋白的标准曲线对蛋白含量进行定量。计算消除半衰期、曲线下面积（AUC）和其他药代动力学参数。该方法可以追踪蛋白的分布和清除情况。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
由于视紫红质表位标签本身是一种肽，并非单独给药，因此其药代动力学 (PK) 数据不适用。当该标签与蛋白质进行基因融合时，融合蛋白的药代动力学特性由载体蛋白决定，而非表位标签本身。该9个氨基酸的标签较小，不太可能显著改变母体蛋白的药代动力学。如果动物先前接触过牛视紫红质，该标签在体内可能具有免疫原性，但在大多数实验条件下，该标签被认为是惰性的。出于研究目的，该标签用作检测工具，而非药代动力学调节剂。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
视紫红质表位标签肽（9肽）本身通常被认为无毒。它是一种合成肽，在体外实验所用的浓度（μg/mL至mg/mL）下不会引起细胞毒性。在体内，当作为融合蛋白的一部分给药时，该标签不会产生毒性。处理该合成肽时，应遵循标准的实验室安全预防措施，包括佩戴手套、实验服和护目镜。冻干肽应储存在-20℃，避光防潮。用清水或缓冲液复溶后，应将肽分装后储存在-20℃，以避免反复冻融。该肽仅供研究使用，不得用于人类治疗、诊断或临床应用。
|
| 参考文献 |
[1]. Hodges RS, Heaton RJ, Parker JM, Molday L, Molday RS. Antigen-antibody interaction. Synthetic peptides define linear antigenic determinants recognized by monoclonal antibodies directed to the cytoplasmic carboxyl terminus of rhodopsin. J Biol Chem. 1988;263:11768–11775.
|
| 其他信息 |
视紫红质表位标签（Rhodopsin Epitope Tag）是一种源自牛视紫红质C端区域的9个氨基酸肽段（TETSQVAPA）。它可被抗视紫红质抗体识别，尤其是单克隆抗体Rho-1D4。该标签广泛应用于分子生物学领域，用于重组融合蛋白的检测、纯化和免疫沉淀。其小尺寸（9个氨基酸，分子量约903 Da）最大限度地减少了对蛋白质功能的干扰。该标签可融合到靶蛋白的N端或C端。它还可用作免疫检测中的阳性对照或阻断肽。其分子式为C37H62N10O16，分子量为902.95。该产品以冻干固体形式提供，纯度≥95%。本产品仅供研究使用，未经批准用于临床或诊断应用。
|
| 精确质量 |
902.435
|
|---|---|
| CAS号 |
102099-07-0
|
| PubChem CID |
134611628
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| tPSA |
428
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
14
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
17
|
| 可旋转键数目(RBC) |
26
|
| 重原子数目 |
63
|
| 分子复杂度/Complexity |
1700
|
| 定义原子立体中心数目 |
11
|
| SMILES |
C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O
|
| InChi Key |
YNNNDDQTLPJPIA-KCMKZVLYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C37H62N10O16/c1-15(2)27(34(59)40-16(3)36(61)47-13-7-8-23(47)32(57)41-17(4)37(62)63)45-29(54)20(9-11-24(38)51)42-31(56)22(14-48)44-35(60)28(19(6)50)46-30(55)21(10-12-25(52)53)43-33(58)26(39)18(5)49/h15-23,26-28,48-50H,7-14,39H2,1-6H3,(H2,38,51)(H,40,59)(H,41,57)(H,42,56)(H,43,58)(H,44,60)(H,45,54)(H,46,55)(H,52,53)(H,62,63)/t16-,17-,18+,19+,20-,21-,22-,23-,26-,27-,28-/m0/s1
|
| 化学名 |
(4S)-5-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(1S)-1-carboxyethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
H2O: 12.5 mg/mL (13.84 mM)
DMSO: 2.86 mg/mL (3.17 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
