| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
SV40 large T antigen NLS specifically targets importin-alpha (karyopherin-alpha), an adaptor protein that recognizes and binds to classical NLSs. The binding is mediated by the positively charged residues of the NLS (basic amino acids lysine and arginine) interacting with the acidic residues in the major and minor NLS-binding pockets of importin-alpha. Structural studies (e.g., PDB 1ejl) have shown that the monopartite SV40 large T antigen NLS binds to two binding sites on importin-alpha, similar to what is observed in yeast importin-alpha. After binding to importin-alpha, the NLS-cargo complex interacts with importin-beta, which facilitates translocation through the nuclear pore complex into the nucleus. The SV40 NLS is not an inhibitor; it is a substrate of the nuclear import machinery.
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| 体外研究 (In Vitro) |
核定位序列 (NLS) 两侧是蛋白激酶 CK2 (CK2) 结合位点 (Ser111-Ser112)，该位点可增强 SV40 大肿瘤抗原 (T-ag) 的核输入[1]。尽管已有研究表明 PK-C 可抑制某些蛋白质（包括层粘蛋白 B2）的核输入，但 T-ag NLS 仍能促进其核输入[2]。
体外实验表明，SV40大T抗原核定位信号（NLS）已被广泛用于研究核输入机制。在典型的无细胞核输入实验中，将荧光标记（例如FITC偶联）的SV40 NLS与输入蛋白α和输入蛋白β混合，并与透化细胞或分离的细胞核孵育。NLS肽段以能量依赖的方式输入细胞核，证实了其作为核定位信号的功能。SV40 NLS与输入蛋白α的结合亲和力已通过表面等离子共振（SPR）或等温滴定量热法（ITC）测定，其解离常数（KD）值通常在微摩尔范围内（例如5-20 uM）。当与非核蛋白（例如BSA、GFP）或纳米颗粒偶联时，SV40 NLS能够引导这些载体进入细胞核，证实了其作为转运信号的功能。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，SV40大T抗原核定位序列（NLS）已被用于研究活细胞和动物的核输入。当显微注射到细胞中或与异源蛋白融合表达时，SV40 NLS可将载体引导至细胞核。利用荧光标记的SV40 NLS在活细胞中进行的研究，揭示了核输入的动态过程，包括输入蛋白、核孔复合体和Ran GTP酶的作用。在动物模型中，SV40 NLS已被用于增强基因、蛋白质和纳米颗粒向细胞核的递送。例如，将SV40 NLS连接到非病毒基因递送载体（例如聚乙烯亚胺、脂质体）上，可通过促进质粒DNA的核输入，显著提高转染效率。
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| 酶活实验 |
一种典型的用于评估SV40大T抗原核定位序列（NLS）与输入蛋白α结合的非细胞（无细胞）方案是利用表面等离子共振（SPR）技术。根据制造商的说明，通过胺偶联将输入蛋白α固定在CM5传感器芯片上。SV40 NLS肽段可通过在N端标记生物素或直接使用合成肽段进行合成。将不同浓度（0.1-100 uM）的SV40 NLS溶液以30 uL/min的流速注入到传感器芯片上，注入缓冲液为10 mM HEPES（pH 7.4）、150 mM NaCl和0.005% Tween-20，持续60秒，随后进行120秒的解离。每个循环后，用10 mM甘氨酸-HCl（pH 2.0）进行30秒的脉冲再生。结合亲和力 (KD) 是通过将传感图拟合到 1:1 Langmuir 结合模型来计算的。或者，也可以进行竞争性结合实验，即将 importin-α 与固定浓度的已知 NLS（例如，FITC 标记的 SV40 NLS）和递增浓度的未标记 SV40 NLS 一起孵育，然后进行荧光偏振或各向异性测量。
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| 细胞实验 |
评估SV40大T抗原核定位序列（NLS）核输入活性的典型体外细胞实验方案是使用经洋地黄皂苷透化的细胞（例如HeLa细胞）。HeLa细胞在盖玻片上培养至50-70%汇合度。用转运缓冲液（TB：20 mM HEPES pH 7.3、110 mM乙酸钾、2 mM乙酸镁、1 mM EGTA、2 mM DTT）洗涤细胞，然后在冰上用40 ug/mL洋地黄皂苷的TB溶液处理5分钟进行透化。将透化后的细胞用TB缓冲液洗涤，然后在含有2 uM FITC标记的SV40 NLS肽、2 uM importin-α、2 uM importin-β、2 mM ATP和ATP再生系统（0.5 mM磷酸肌酸，10 ug/mL肌酸激酶）的TB缓冲液中，于30℃孵育20-60分钟。阴性对照反应省略ATP或importin，或使用突变型NLS（例如，PKKKRKV → PKKTKRKV）。孵育后，洗涤细胞，用4%多聚甲醛固定，DAPI染色，并通过荧光显微镜观察。使用图像分析软件测量核荧光与胞质荧光的比值来定量核输入。
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| 动物实验 |
一项用于评估SV40 NLS增强基因递送的体内动物实验方案采用目标疾病（例如癌症）的小鼠模型。将聚乙烯亚胺（PEI）基纳米颗粒与质粒DNA（例如编码荧光素酶或治疗基因）复合，其中纳米颗粒表面可偶联SV40 NLS，也可直接通过DNA结合域将SV40 NLS偶联到DNA上。将纳米颗粒通过尾静脉注射或瘤内注射的方式给药给携带皮下肿瘤异种移植瘤的小鼠。在给药后不同时间点（例如6、12、24、48、72小时），处死小鼠并收集器官（肿瘤、肝脏、脾脏、肾脏、肺）。通过生物发光检测或测量组织裂解液中的酶活性来检测报告基因（例如荧光素酶）的表达。比较了SV40 NLS修饰纳米颗粒和未修饰纳米颗粒的基因递送效率。在成像实验中，向动物注射D-荧光素，并进行生物发光成像（BLI）以追踪活体动物的基因表达。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
SV40大T抗原核定位序列（NLS）作为一种肽，其药代动力学特征表现为快速降解和半衰期短。该肽由7个氨基酸（PKKKRKV）组成，分子量约为911 Da。静脉注射后，由于血清肽酶的蛋白水解降解和肾脏的快速清除，该肽在几分钟内即可从循环中清除。为了将其作为核递送增强剂应用于体内，SV40 NLS通常与较大的载体（蛋白质、纳米颗粒、聚合物）偶联，以降低清除率并保护肽免受降解。偶联后，NLS作为靶向部分而非独立药物发挥作用。偶联载体的药代动力学主要取决于载体本身，NLS标签对整体药代动力学特征的影响极小。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于SV40大T抗原NLS肽段是一种研究工具而非治疗药物，因此目前尚无针对该肽段的毒性数据。该肽段来源于病毒蛋白，但是一种短的合成肽（7个氨基酸），在研究常用浓度（通常为1-20 μM）下不被认为具有毒性。在细胞培养中，SV40 NLS未表现出明显的细胞毒性。当与基因递送载体偶联时，其毒性取决于载体（例如，聚乙烯亚胺、脂质体）而非NLS本身。处理该肽段时应遵循标准的实验室安全预防措施，包括佩戴手套、实验服和护目镜。冻干肽段应储存在-20℃，避光防潮。该肽段仅供研究使用，不得用于人体或动物的治疗或诊断目的。
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| 参考文献 |
[1]. Xiao CY, et al. Negative charge at the protein kinase CK2 site enhances recognition of the SV40 large T-antigen NLS by importin: effect of conformation. FEBS Lett. 1998 Dec 4;440(3):297-301.
[2]. Xiao CY, et al. An engineered site for protein kinase C flanking the SV40 large T-antigen NLS confers phorbol ester-inducible nuclear import. FEBS Lett. 1998 Oct 9;436(3):313-7. |
| 其他信息 |
SV40大T抗原核定位信号（NLS）是一种合成肽，对应于猿猴病毒40（SV40）大T抗原的核定位信号。该肽序列为PKKKRKV（Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val）。它是一种经典的单体NLS，可与核输入蛋白α（核转运蛋白α）结合，介导货物蛋白的核输入。SV40 NLS是细胞生物学研究中研究核质转运、蛋白质核输入以及核孔复合物功能机制的重要工具。它还可用于增强非病毒基因治疗载体的核递送。该肽可商购，通常以冻干粉末形式提供，纯度≥95%。它可溶于水和PBS缓冲液。该肽应储存于-20℃并避光。本品仅供研究使用，未获准用于临床。
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| 分子式 |
C58H104N20O18S
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|---|---|
| 分子量 |
1401.63457107544
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| 精确质量 |
1400.755
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| CAS号 |
163815-24-5
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| PubChem CID |
156599041
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
-14.1
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| tPSA |
648
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| 氢键供体(HBD)数目 |
22
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| 氢键受体(HBA)数目 |
25
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| 可旋转键数目(RBC) |
51
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| 重原子数目 |
97
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| 分子复杂度/Complexity |
2660
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| 定义原子立体中心数目 |
10
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| SMILES |
CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N
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| InChi Key |
BKONVPKKIKALJE-HQIXXVJESA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C58H104N20O18S/c1-32(2)47(56(94)75-39(19-20-45(82)83)53(91)76-40(57(95)96)27-46(84)85)77-54(92)37(16-6-10-24-62)72-52(90)38(17-11-25-66-58(64)65)73-50(88)35(14-4-8-22-60)70-49(87)34(13-3-7-21-59)71-51(89)36(15-5-9-23-61)74-55(93)41-18-12-26-78(41)44(81)30-68-42(79)28-67-43(80)29-69-48(86)33(63)31-97/h32-41,47,97H,3-31,59-63H2,1-2H3,(H,67,80)(H,68,79)(H,69,86)(H,70,87)(H,71,89)(H,72,90)(H,73,88)(H,74,93)(H,75,94)(H,76,91)(H,77,92)(H,82,83)(H,84,85)(H,95,96)(H4,64,65,66)/t33-,34-,35-,36-,37-,38-,39-,40-,41-,47-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[2-[[2-[[2-[[(2R)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]butanedioic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.7135 mL | 3.5672 mL | 7.1345 mL | |
| 5 mM | 0.1427 mL | 0.7135 mL | 1.4269 mL | |
| 10 mM | 0.0713 mL | 0.3567 mL | 0.7135 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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