| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Organic cyanylating reagent; Biochemical assay reagents
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| 体外研究 (In Vitro) |
在本研究中,研究人员使用有机氰基化试剂——四氟硼酸-1-氰基-4-二甲氨基吡啶鎓(CDAP),于水溶液中活化多糖,随后使其与己二胺反应,为蛋白质与多糖的偶联做准备。CDAP对多糖的活化过程迅速(<2分钟)且高效,可适用于多种化学性质的多糖,包括葡聚糖以及肺炎球菌6型、14型、19型和23型多糖。CDAP活化多糖的关键参数包括试剂浓度和pH值。活化过程可在较宽的碱性pH范围内进行,最佳pH为9–10。此外,蛋白质无需借助间隔臂即可与CDAP活化的多糖偶联,该直接偶联过程可在弱碱性条件下(pH 7–9)完成。这一条件使得CDAP可用于对碱性敏感的多糖及蛋白质。通过直接偶联或借助间隔臂制备的牛血清白蛋白(BSA)–肺炎球菌14型多糖(Pn14)偶联物免疫小鼠后,均可诱导高水平的抗Pn14及抗BSA血清IgG1抗体,而未偶联的组分则未诱导出IgG1抗体。CDAP操作简便、活化条件温和,这些特点使其在制备偶联疫苗及其他免疫相关试剂方面具有重要应用价值。[1]
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| 酶活实验 |
多糖活化 [1]
多糖的CDAP活化按下述通用步骤进行,具体参数调整见相应图注。将CDAP溶于乙腈配制成100 mg·ml⁻¹溶液,于-20℃储存(可保存1个月)。取适量CDAP溶液缓慢滴加至涡旋状态的多糖水溶液中(有机共溶剂的快速加入会导致多糖沉淀),30秒后,加入与所用CDAP等体积的0.2 M三乙胺(TEA)水溶液。反应至2.5分钟时,加入大摩尔过量的0.5 M己二胺溶液(溶剂为pH 9.3的0.1 M硼酸钠溶液或pH 7.5的0.75 M HEPES溶液)。将反应混合物置于4℃静置过夜,先后通过P-6 DG或P-6柱脱盐(平衡液为生理盐水)并进一步透析至生理盐水中。采用TNBS法测定伯胺含量以确定己二胺修饰程度:在366 nm波长处测定吸光度,使用消光系数11000 M⁻¹·cm⁻¹进行计算。多糖浓度测定参照Monsigny等的方法¹⁹,以相应多糖为标准品。结果以每100 kDa多糖中检测到的胺基摩尔数表示。 蛋白质偶联 [1] 将牛血清白蛋白(BSA)通过硫醚键与己二胺修饰的肺炎球菌14型多糖(制备方法见表3)偶联。将蛋白质直接偶联至CDAP活化多糖的基本操作流程如下:多糖的CDAP活化步骤与上述胺基修饰方法相同。在加入CDAP后2分30秒,将蛋白质快速加入轻微涡旋的反应液中。反应至少经乙醇胺淬灭1小时后,使用经生理盐水平衡的S300HR或S400HR柱进行凝胶过滤。具体操作细节及流程变体详见相应图注。收集洗脱体积前端峰位的组分,采用Bradford法(BSA为标准品)测定蛋白质含量。多糖浓度测定参照Monsigny等的方法¹⁹,以相应多糖为标准品。蛋白质偶联结果以每毫克多糖结合的蛋白质毫克数表示。用于免疫的偶联物需经0.45 μm Millex GV滤膜过滤除菌。 |
| 参考文献 |
[1]. Activation of soluble polysaccharides with 1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate for use in protein-polysaccharide conjugate vaccines and immunological reagents. Vaccine. 1996 Feb;14(3):190-8. doi: 10.1016/0264-410x(95)00195-7.
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| 其他信息 |
本文所述的活化多糖、用功能基团衍生化多糖或直接偶联蛋白质的一般条件,已被证实适用于多种多糖和蛋白质(未发表的观察结果)。CD.4P 的易用性使得反应可以在小规模下进行,从而可以轻松地为特定的多糖和蛋白质组合确定一系列合适的反应条件。例如,我们发现,在氰酸酯中间体促进链间和链内交联以及蛋白质多点连接的条件下,反应混合物会发生凝胶化,例如过量的 CDAP、升高的 pH 值、高浓度的多糖和/或不足的蛋白质。该技术具有可重复性好、反应速度快以及能够制备不同蛋白-多糖比例的偶联物等优点。这为研究蛋白-多糖比例对偶联物抗体反应强度的影响提供了一种可重复的方法。此外,由于可以在各种不同的实验条件下获得相近的蛋白-多糖比例,因此可以研究不同程度的蛋白-多糖交联对偶联物免疫原性的影响。除了在制备蛋白-多糖构建体方面的价值外,CDAP活化可溶性多糖还可用于合成其他免疫学和诊断试剂。许多亲核基团可以直接偶联到CDAP活化的多糖上。例如,我们利用氨基生物素制备了生物素化多糖,用于ELISA试剂;制备了三硝基苯基化多糖,用于研究T细胞非依赖性抗原的性质;以及制备了肽-多糖偶联物,用于免疫原。[1]
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| 分子式 |
C8H10BF4N3
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|---|---|
| 分子量 |
234.99
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| 精确质量 |
235.09
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| CAS号 |
59016-56-7
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| PubChem CID |
9881151
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 熔点 |
196-200ºC
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| LogP |
1.669
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| tPSA |
30.91
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
16
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| 分子复杂度/Complexity |
179
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CN(C1=CC=[N+](C#N)C=C1)C.F[B-](F)(F)F
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| InChi Key |
MBLVMDCQDCVKNE-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C8H10N3.BF4/c1-10(2)8-3-5-11(7-9)6-4-8;2-1(3,4)5/h3-6H,1-2H3;/q+1;-1
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| 化学名 |
4-(dimethylamino)pyridin-1-ium-1-carbonitrile;tetrafluoroborate
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| 别名 |
1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluroborate; CDAP
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.2555 mL | 21.2775 mL | 42.5550 mL | |
| 5 mM | 0.8511 mL | 4.2555 mL | 8.5110 mL | |
| 10 mM | 0.4256 mL | 2.1278 mL | 4.2555 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。