| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Fluorescent dye; PKH26 does not bind to a specific molecular target. Its mechanism of action is based on the non-specific, stable integration of its lipophilic aliphatic tails into the lipid bilayer of cell membranes, including plasma membranes and organelle membranes. It partitions into the lipid region without covalent bonding to membrane proteins, enabling uniform labeling of the entire cell surface. This physical insertion mechanism allows PKH26 to label virtually any cell type containing a lipid membrane, including eukaryotic cells, bacteria, parasites, and exosomes.
PKH 26 targets cell membranes, specifically the lipid bilayer, through its lipophilic properties. The compound does not target a specific protein or enzyme but rather inserts into the lipid region of cell membranes, where it is stably retained. This membrane labeling allows for the tracking of labeled cells over extended periods. The dye is minimally cytotoxic and is compatible with flow cytometry and fluorescence microscopy. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
1. PKH 26 工作液的制备
1.1 储备液的制备 将 1 mg PKH 26 溶解于 1 mL DMSO 中，配制成 1 mM 的储备液。 注意：建议将储备液避光保存于 -20°C 或 -80°C，并避免反复冻融。 1.2 PKH 26 工作液的制备 用无血清细胞培养基或 PBS 稀释储备液，配制成浓度为 5-10 µM 的工作液。 注意：根据需要调整 PKH 26 工作液的浓度。 2. 细胞染色 2.1 悬浮细胞（6 孔板） a.在 4°C 下以 1000g 离心 3-5 分钟，弃去上清液，并用 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。细胞密度应为 1×10⁶/mL。 b. 加入 1 mL 工作液，室温孵育 10-45 分钟。 c. 在 4°C 下以 400g 离心 3-4 分钟，弃去上清液。 d. 用 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。 e. 将细胞重悬于无血清细胞培养基或 PBS 中。在荧光显微镜下或通过流式细胞仪观察。 2.2 贴壁细胞 a. 将贴壁细胞培养在无菌盖玻片上。 b. 将盖玻片从培养基中取出，吸去多余的培养基。 c.加入 100 µL 工作液，轻轻摇晃以确保细胞完全被覆盖，并在室温下孵育 5-30 分钟。 d. 用培养基洗涤两次，每次 5 分钟。在荧光显微镜下或通过流式细胞仪观察。 储存 -80°C 避光保存 1 年。 注意事项 1. 根据实际实验条件调整 PKH 26 工作液的浓度。 2. 本产品仅供研发使用，不得用于药物、家庭或其他用途。 3. 为了您的安全和健康，请在操作过程中穿戴实验服和一次性手套。 PKH-26 是一种亲脂性荧光染料，可稳定整合到细胞膜中，且不干扰表面标志物的表达。它不会损害标记靶细胞的活力。靶细胞中凋亡细胞或PI阳性细胞的百分比在PKH-26标记4小时后保持不变。功能性效应细胞/靶细胞相互作用所需的表面抗原（包括CD54、CD58、HLA-ABC、HLA-DR、CD33、CD34、Mel-1和Mel-2）的表达在PKH-26染色4小时后也未见显著变化。在所有测试的活细胞中，PKH-26标记至少在72小时内保持稳定，荧光强度无明显损失。凋亡靶细胞的PKH-26荧光强度略有下降，但仍可清晰区分为PKH-26阳性靶细胞。[1]体外研究表明，PKH-26能够高效（通常>99%）地标记多种细胞类型，且不会显著影响细胞活力、增殖或生物活性。 MTT 实验证实 PKH26 与成骨细胞具有细胞相容性，且不影响细胞生长。在胞外体标记方面，PKH26 (100 μM) 在 37°C 孵育 10 分钟后可有效标记胞外体。然而，共培养实验表明，PKH26 可通过细胞碎片转移至未标记的细胞，表明该染料并非仅存在于最初标记的细胞内。在神经干细胞研究中，PKH26 (5 μM) 在第 1 天标记了 100% 的细胞，尽管细胞活力和增殖在第 1 天短暂下降，但到第 7 天恢复正常。PKH26 的体外活性在于其作为亲脂性膜染料用于细胞标记和追踪的功能。该化合物可稳定结合于细胞膜的脂质区域并发出红色荧光。它可用于体外细胞标记、体外细胞增殖研究和细胞追踪研究。这种染料常用于流式细胞术中检测T细胞增殖，并广泛应用于免疫学、肿瘤学和干细胞研究。该标记稳定，可用于长期追踪标记细胞。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
PKH26 具有卓越的体内稳定性，荧光可持续检测长达 100 天或更久，使其适用于长期细胞追踪研究。在小鼠模型中，静脉注射 PKH26 标记的人外周血淋巴细胞 (huPBL) 后，细胞迅速分布，循环动力学监测持续 24 小时。在大鼠颅骨缺损模型中，植入支架的 PKH26 标记的成骨细胞在骨缺损区域未显示明显的毒性迹象。在胃癌异种移植模型中，PKH26 标记的 CIK 细胞的标记效率达到 99.37%，局部、静脉或腹腔给药后均能显著抑制肿瘤生长。然而，研究表明 PKH26 可通过标记的细胞碎片转移到宿主组织，这可能导致移植细胞的假阳性鉴定。
PKH26 不用作治疗药物。该化合物在体内可用作细胞示踪染料，用于研究应用。该化合物可用于体内细胞示踪研究，以追踪动物模型中标记细胞的迁移和分布。 |
| 酶活实验 |
PKH26 不适用于无细胞酶/受体结合实验，因为它需要脂质膜才能整合。对于外泌体标记（一种无细胞应用），建议采用以下方案：将外泌体与 100 μM PKH26 染料溶液（每 100 μg 外泌体使用 50 μL PKH26 染料溶液）在 37°C 避光孵育 10 分钟。随后，加入 20 mL PBS 终止染色反应。通过差速离心获得 PKH26 标记的外泌体，并将其重悬于 500 μL PBS 中，用于后续实验。对于红细胞标记，PKH26 可稳定整合到红细胞膜脂质部分，从而可以制备用于吞噬作用实验的标记探针。
PKH26 的体外细胞标记实验包括将细胞与染料在合适的标记缓冲液中孵育。这种亲脂性染料会插入细胞膜，过量的染料可通过洗涤去除。标记后的细胞可通过流式细胞术或荧光显微镜进行分析。红色荧光（激发/发射波长：551/567 nm）可提供明亮且稳定的标记。该标记方法适用于细胞增殖研究，可通过流式细胞术测量每次细胞分裂时染料的稀释情况。 |
| 细胞实验 |
在 PKH-26 细胞毒性试验中，将靶细胞（例如，人黑色素瘤细胞系、原代白血病 AML 原始细胞或 T2 细胞）转移至试管中，并用无血清培养基洗涤两次。将细胞重悬于上样缓冲液中，并与新鲜配制的 PKH-26（1 mM 乙醇储备液）在室温下孵育 40 分钟。对于肿瘤细胞，小细胞（淋巴细胞）使用 0.8 µL PKH-26，而对于其他细胞，则使用 0.5 µL PKH-26 溶于 200 µL 上样缓冲液中，最终最佳浓度为 2 µM。在振荡的同时缓慢加入染料溶液，以避免细胞过度染色。在室温下振荡 30-40 分钟后，加入人血清在室温下孵育 30 秒以终止染色。将细胞沉淀转移至新的离心管中，并用含10%人血清的RPMI培养基洗涤两次。
将PKH-26标记的靶细胞（5×10³个细胞/孔）与效应细胞在96孔V型底板中共培养3小时（推荐标准培养时间），然后收集细胞。加入1 mL PBS并离心。将细胞重悬于100 µL高钙Annexin V结合缓冲液中。加入5 µL Annexin V-FITC，在室温下避光染色10分钟。在进行流式细胞术分析前，每100 µL结合缓冲液中加入0.1 µg碘化丙啶。 分析时，通过对PKH-26阳性细胞群进行设门来选择靶细胞。特异性细胞毒性百分比的计算公式为：(% 特异性 Annexin V 阳性细胞) = ([Annexin V 阳性细胞样本数 - Annexin V 阳性细胞对照数] / [样本总事件数 - Annexin V 阳性细胞对照数]) × 100。研究发现，同时进行 PI 染色并不能提供 Annexin V-FITC 单独染色所获得的信息，因为 PI 单阳性靶细胞很少见。[1] 标准的 PKH26 细胞标记方案如下：收集细胞，洗涤后重悬于稀释液 C（试剂盒提供）中，细胞浓度为 2×10⁷ 个/mL。将 PKH26 染料用稀释液 C 稀释至 2×10⁻⁶ M (2 μM)。将等体积的细胞悬液和染料溶液快速混合，并在室温下孵育 2-5 分钟。加入等体积的血清或 1% BSA 终止染色，孵育 1 分钟。然后用完全培养基洗涤细胞三次以去除未结合的染料。对于肿瘤细胞标记，建议在室温下用新鲜配制的PKH26（0.5-0.8 μL 1 mM原液溶于200 μL上样缓冲液）孵育40分钟。标记的细胞可用于增殖研究、共培养实验或流式细胞术分析。标记效率通常超过99%。在体外细胞实验中，PKH26用于标记细胞，以便在共培养系统、迁移实验和增殖研究中进行追踪。根据制造商的方案将细胞与染料孵育，洗涤后用于实验。红色荧光可以区分混合细胞群中的标记细胞和未标记细胞。 |
| 动物实验 |
典型的体内PKH26细胞追踪方案：如上所述，用PKH26标记细胞，彻底洗涤后，将细胞重悬于无菌PBS中，浓度为所需浓度（例如，10×10⁶个细胞/200 μL）。将标记的细胞悬液通过选定的途径给药：静脉注射（尾静脉）、腹腔注射或局部注射（肿瘤周围或心肌内）。在追踪研究中，于预定时间点（例如，移植后2周）处死动物，并收集目标组织（例如，肝脏、肿瘤）进行冰冻切片。在荧光显微镜下观察组织切片，以检测PKH26阳性细胞（激发/发射波长=551/567 nm）。可在同一切片上进行特定标记物（例如，用于肝细胞分化的白蛋白）的免疫荧光染色。在SCID小鼠模型中，于不同时间点（10分钟、30分钟、60分钟、24小时）采集血样以评估循环动力学。
对于体内动物实验，可将PKH 26标记的细胞注射到动物模型中以进行追踪研究。标记细胞可通过荧光成像进行追踪，也可通过采集组织并进行流式细胞术或荧光显微镜分析来进行追踪。该染料稳定，可用于长期追踪细胞迁移和分布。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
PKH26 因其独特的膜整合机制而展现出独特的药代动力学特性。该染料具有显著的体内持久性，标记后可检测到的荧光可持续长达 100 天或更久。静脉注射 PKH26 标记的细胞后，循环细胞呈现快速的初始分布，注射后 30 分钟约有 50% 的细胞仍留在循环中，60 分钟后约有 30% 的细胞仍留在循环中。24 小时后，仍有少量标记细胞可在外周血中检测到。该染料稳定地整合到细胞膜中，不会被快速清除或代谢。然而，当细胞死亡和崩解时，含有 PKH26 的碎片可被宿主细胞吞噬，导致染料转移，并在未移植的细胞中产生潜在的假阳性信号。在正常条件下，活细胞中未观察到明显的染料泄漏，完整细胞之间也未发生染料转移。
由于PKH 26是一种研究用细胞标记染料而非候选药物，因此其药代动力学性质尚未得到表征。该化合物的分子量为961.32-961.34 g/mol，应在0-10°C下避光保存。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PKH26 通常被认为具有较低的细胞毒性。体外研究证实，PKH26 标记的细胞保持正常的生物活性、增殖能力和活力，与未标记的对照组相当。MTT 和 Alamar Blue 检测表明，与未标记的对照组相比，PKH26 不会抑制脂肪来源干细胞的增殖，且无毒性。然而，有报道称 PKH26 存在一些短暂效应：在 5 μM 浓度下，标记后第 1 天细胞活力和增殖能力下降，但这些效应在第 7 天恢复正常。过度标记可能导致细胞膜完整性受损和细胞恢复。体内实验中，在植入 PKH26 标记的成骨细胞的骨缺损区域未观察到明显的毒性迹象。其他染料（例如 Hoechst 33342）曾报道过延迟性细胞毒性，但 PKH26 未见报道。总体而言，PKH26 在推荐浓度下用于细胞追踪应用时被认为是安全的。PKH26 仅供研究使用，不得用于人体治疗或诊断。处理此化学试剂时应遵守标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PKH-26 被用作流式细胞术细胞毒性测定中的荧光示踪剂，以区分靶细胞和效应细胞。它是标准的 ⁵¹Cr 释放测定的可靠替代品，避免了使用放射性同位素。PKH-26 测定允许在单细胞水平上直接评估靶细胞死亡（早期凋亡、膜损伤）。该测定与 ⁵¹Cr 释放测定显示出良好的相关性（r² = 0.9777），尽管 PKH-26 测定的结果显示出稍高的细胞毒性百分比。该测定可以在 1.5–3 小时内完成。用孔雀绿素 A 阻断穿孔素通路会完全阻止在 PKH-26 测定中测得的细胞毒性活性。抗原特异性 T 细胞的频率（例如，通过四聚体染色测量）不一定与 PKH-26 测定中测得的细胞毒性活性相关。[1]
PKH 26（CAS#: 154214-55-8）是一种红色荧光脂溶性膜染料，用于细胞标记、细胞增殖研究和细胞追踪。它通常用于流式细胞术中测量 T 细胞增殖，并广泛应用于免疫学、肿瘤学和干细胞研究。该化合物没有临床或治疗应用。 |
| 分子式 |
C59H97IN2
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|---|---|
| 分子量 |
961.319370031357
|
| 精确质量 |
960.669
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| 元素分析 |
C, 73.71; H, 10.17; I, 13.20; N, 2.91
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| CAS号 |
154214-55-8
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| PubChem CID |
162642097
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| 外观&性状 |
Brown to reddish brown solid powder
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| tPSA |
6.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
36
|
| 重原子数目 |
62
|
| 分子复杂度/Complexity |
1200
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C([N+]1=C(C(C)(C)C2C=CC=CC1=2)C=CC=C1C(C2C=CC=CC=2N1CCCCCCCCCCCCCC)(C)C)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC.[I-]
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| InChi Key |
XOOOYQALQHJRCY-UHFFFAOYSA-M
|
| InChi Code |
InChI=1S/C59H97N2.HI/c1-7-9-11-13-15-17-19-21-22-23-24-25-26-27-28-30-32-34-36-42-51-61-55-47-40-38-45-53(55)59(5,6)57(61)49-43-48-56-58(3,4)52-44-37-39-46-54(52)60(56)50-41-35-33-31-29-20-18-16-14-12-10-8-2;/h37-40,43-49H,7-36,41-42,50-51H2,1-6H3;1H/q+1;/p-1
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| 化学名 |
2-[(E,3E)-3-(3,3-dimethyl-1-tetradecylindol-2-ylidene)prop-1-enyl]-1-docosyl-3,3-dimethylindol-1-ium;iodide
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| 别名 |
PKH 26; PKH-26; PKH26; 154214-55-8;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 1.67 mg/mL (1.74 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0402 mL | 5.2012 mL | 10.4024 mL | |
| 5 mM | 0.2080 mL | 1.0402 mL | 2.0805 mL | |
| 10 mM | 0.1040 mL | 0.5201 mL | 1.0402 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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