Rhod-2 AM

别名: 9-(4-{二[2-(乙酰氧基甲氧基)-2-氧代乙基]氨基}-3-[2-(2-{二[2-(乙酰氧基甲氧基)-2-氧代乙基]氨基}-5-甲基苯氧基)乙氧基]苯基)-6-(二甲基氨基)-N,N-二甲基-3H-氧杂蒽-3-亚氨鎓溴化物
目录号: V67097 纯度: ≥98%
Rhod-2是一种具有可见光激发波长的高亲和力Ca2+荧光探针。
Rhod-2 AM CAS号: 145037-81-6
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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1mg
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产品描述
Rhod-2 是一种高亲和力的 Ca2+ 荧光探针,具有可见光激发波长。Rhod-2 AM 是 Rhod-2 的乙酰甲酯类似物。它具有细胞膜渗透性,可通过简单的培养方法轻松进入细胞。进入细胞后,Rhod-2 AM 会被乳糖酶水解生成 Rhod-2,后者不具有细胞膜渗透性,因此会留在细胞内发挥相应的生理功能。最大激发/发射波长:549/578 nm。
Rhod-2 AM(CAS 编号:145037-81-6)是红色荧光钙指示剂 Rhod-2 的乙酰氧基甲基 (AM) 酯。其分子式为 C₅₂H₅₉BrN₄O₁₉,分子量为 1123.94 g/mol。 AM基团促进细胞摄取,并被胞质酯酶去除,从而导致Rhod-2在细胞内积累。该化合物的激发/发射波长最大值分别为552/581 nm。Rhod-2是所有钙指示剂中荧光信号波长最长的。它是一种荧光线粒体探针,用于监测细胞内钙水平,特别是线粒体中的钙水平。
生物活性&实验参考方法
靶点
Rhod-2 AM targets intracellular calcium ions (Ca²⁺). The compound does not target a specific protein or enzyme but rather serves as a fluorescent calcium indicator. The AM ester form is cell-permeable and is hydrolyzed by intracellular esterases to the active Rhod-2 form, which is trapped inside cells. Rhod-2 binds calcium ions, resulting in an increase in fluorescence intensity. The long-wavelength excitation and emission make it valuable for use with laser microscopes.
体外研究 (In Vitro)
1. Rhod-2 AM 工作液的制备方法如下:1.1 将 Rhod-2 AM 溶解于 DMSO 中,配制成 5 mM 的储备液。1.2 配制 Rhod-2 AM 工作液:使用无血清细胞培养基或 PBS 将储备液稀释至 5–10 μM 的工作液。请根据实际情况调整 Rhod-2 AM 工作液的浓度。2. 细胞染色(96 孔板)2.1 细胞悬液 a. 在 4°C 下以 1000g 离心 3 至 5 分钟后,弃去上清液。用 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。细胞浓度为 1 × 10^6 个/mL。b. 加入 1 mL 工作液后,室温静置 5 至 30 分钟。在 4°C 下以 400 g 离心 3 至 4 分钟后,弃去上清液。D. 用 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。E. 将细胞重悬于 PBS 或无血清细胞培养基中。可通过流式细胞仪监测或荧光显微镜观察。贴壁细胞 2.2 a. 将贴壁细胞培养在无菌盖玻片上。B. 将盖玻片从培养基中取出,并用吸液器吸去多余的培养基。a. 加入 100 μL 工作液,轻轻摇晃使细胞完全被工作液覆盖,然后在室温下孵育 5 至 30 分钟。D. 用中等离心力洗涤两次,每次 5 分钟。可通过流式细胞仪或荧光显微镜观察。
Rhod-2 AM 的体外活性是其作为荧光钙指示剂的功能。该化合物可透过细胞膜,并被细胞质酯酶水解为活性 Rhod-2 形式。与钙离子结合后,荧光强度增加。Rhod-2是所有钙指示剂中荧光信号波长最长的,其激发/发射最大值分别为552/581 nm。它是一种荧光线粒体探针,用于监测细胞内钙离子水平。
体内研究 (In Vivo)
Rhod-2 AM 不用作治疗药物。其体内用途仅限于测量细胞内钙水平的研究应用。该化合物不适用于全身治疗。
酶活实验
体外测定 Rhod-2 AM 的钙离子浓度的方法是将细胞与 AM 酯在细胞培养基中孵育。细胞吸收该化合物后,胞质酯酶会去除 AM 基团,从而将活性 Rhod-2 捕获在细胞内。随后洗涤细胞,并通过荧光显微镜或流式细胞仪进行分析。Rhod-2 AM 与钙离子结合后荧光强度增加,从而可以测量细胞内钙离子浓度。
细胞实验
在体外细胞实验中,Rhod-2 AM 溶于 DMSO,并用细胞培养基稀释。将细胞与染料孵育一定时间后,洗涤,然后用荧光显微镜进行分析。红色荧光(激发/发射波长 = 552/581 nm)可用于测量线粒体钙水平。该化合物用于研究各种细胞类型中的钙信号传导。
动物实验
Rhod-2 AM 通常不进行体内动物实验,因为该化合物主要用作体外探针,用于测量细胞中的钙含量。
药代性质 (ADME/PK)
由于 Rhod-2 AM 是一种研究用荧光探针而非候选药物,因此尚未对其药代动力学性质进行表征。该化合物的分子量为 1123.94 g/mol,应在适当的条件下避光保存。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Rhod-2 AM 仅供研究用途,不得用于人体治疗或诊断。处理此化学试剂时,应遵守标准的实验室安全预防措施。
参考文献

[1]. Calcium flux between the endoplasmic reticulum and mitochondrion contributes to poliovirus-induced apoptosis. J Virol. 2010 Dec;84(23):12226-35.

[2]. Calcium flux between the endoplasmic reticulum and mitochondrion contributes to poliovirus-induced apoptosis. J Virol. 2010 Dec;84(23):12226-35.

其他信息
Rhod-2染料是一种有机溴化盐和铊染料。它用作荧光染料。它包含rhod-2(1+)。
Rhod-2 AM(CAS#: 145037-81-6)是红色荧光钙指示剂Rhod-2的细胞可渗透的乙酰氧基甲基酯。它用于监测细胞内钙水平,特别是在线粒体中。该化合物没有临床或治疗应用。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C52H59BRN4O19
分子量
1123.94
精确质量
1122.3
CAS号
145037-81-6
PubChem CID
25229581
外观&性状
Green to dark green ointment
LogP
2.304
tPSA
254.96
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
23
可旋转键数目(RBC)
33
重原子数目
76
分子复杂度/Complexity
2060
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CC1=CC(=C(C=C1)N(CC(=O)OCOC(=O)C)CC(=O)OCOC(=O)C)OCCOC2=C(C=CC(=C2)C3=C4C=CC(=CC4=[O+]C5=C3C=CC(=C5)N(C)C)N(C)C)N(CC(=O)OCOC(=O)C)CC(=O)OCOC(=O)C.[Br-]
InChi Key
RWXWZOWDWYQKBK-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C52H59N4O19.BrH/c1-32-10-16-42(55(24-48(61)71-28-67-33(2)57)25-49(62)72-29-68-34(3)58)46(20-32)65-18-19-66-47-21-37(11-17-43(47)56(26-50(63)73-30-69-35(4)59)27-51(64)74-31-70-36(5)60)52-40-14-12-38(53(6)7)22-44(40)75-45-23-39(54(8)9)13-15-41(45)52;/h10-17,20-23H,18-19,24-31H2,1-9H3;1H/q+1;/p-1
化学名
[9-[4-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-3-[2-[2-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]phenyl]-6-(dimethylamino)xanthen-3-ylidene]-dimethylazanium;bromide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.8897 mL 4.4486 mL 8.8973 mL
5 mM 0.1779 mL 0.8897 mL 1.7795 mL
10 mM 0.0890 mL 0.4449 mL 0.8897 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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