HKPerox-2

目录号: V67109 纯度: ≥98%
HKPerox-2 是一种高灵敏度的绿色荧光探针,专门检测活细胞中的 H2O2。
HKPerox-2 CAS号: 2245230-79-7
产品类别: Reactive Oxygen Species
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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1mg
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产品描述
HKPerox-2 是一种高灵敏度的绿色荧光探针,可特异性检测活细胞中的 H2O2。其最大激发波长和发射波长分别为 520 nm 和 543 nm。
HKPerox-2 是一种高灵敏度的绿色荧光探针,用于特异性检测活细胞中的过氧化氢 (H2O2)。它是一种 O-甲基罗丹醇衍生物,基于串联 Payne/Dakin 反应特异性识别 H2O2。其最大激发波长和发射波长分别为 520 nm 和 543 nm。
生物活性&实验参考方法
靶点
Hydrogen peroxide (H2O2) is the primary molecular target. The probe is designed for the highly selective detection of H2O2 over 30-fold other tested reactive oxygen/nitrogen species (ROS/RNS) in chemical and biological systems.
体外研究 (In Vitro)
1. HKPerox-2 工作液的制备 1.1 储备液的制备:将 1 mg HKPerox-2 溶解于 172 μL DMF 中,配制成 10 mM 的储备液。注意:建议将储备液避光保存于 -20°C 至 80°C 之间,以避免反复冻融。1.2 制备 HKPerox-2 工作液:使用无血清细胞培养基或 PBS 稀释储备液,配制成浓度为 1 至 10 μM 的工作液。根据具体情况调整 HKPerox-2 工作液的浓度非常重要。2. 将悬浮细胞接种于 6 孔板 (2.1) 中进行染色。A. 在 4°C 下以 1000 g 离心 3 至 5 分钟后,弃去上清液。用 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。b 为细胞密度 1×10⁶/mL。加入 1 mL 工作液后,室温静置 5 至 30 分钟。a. 在 4 °C 下以 400 g 离心 3 至 4 分钟后,弃去上清液。D. 用 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。E. 使用荧光显微镜或流式细胞仪,将细胞重悬于 PBS 或无血清细胞培养基中。贴壁细胞 2.2 a. 将贴壁细胞培养在无菌盖玻片上。B. 将盖玻片从培养基中取出,用吸液器吸去多余的培养基。a. 加入 100 μL 工作液,轻轻摇晃,室温孵育 5 至 30 分钟,使细胞完全被覆盖。D. 使用中等设置洗涤两次,每次 5 分钟。可通过流式细胞仪监测或荧光显微镜观察。
HKPerox-2 在无细胞检测中对 H2O2 表现出优异的选择性和灵敏度。该探针通过串联 Payne/Dakin 反应与 H2O2 反应后,发生特定的化学转化,产生强烈的荧光增强信号。它能够检测低浓度的 H2O2。
体内研究 (In Vivo)
目前尚无该化合物的具体体内活性数据。HKPerox-2 是一种高选择性的绿色荧光探针,可用于活细胞内源性和外源性 H2O2 的实时成像,并可能用于小型动物模型。
酶活实验
标准实验方案包括将HKPerox-2(例如,5 uM)与不同浓度的H2O2在缓冲溶液(例如,pH 7.4的PBS缓冲液)中于37℃孵育5-30分钟。然后使用荧光分光光度计测量荧光强度(激发/发射波长:520/543 nm)。通过与其他活性氧/活性氮(例如,·OH、O2-、NO、ONOO-)的对比测试来验证其选择性。
细胞实验
细胞成像的一般流程包括将细胞接种于共聚焦培养皿中,并在37℃下用HKPerox-2(例如,1-10 uM)孵育30分钟。之后,洗涤细胞以去除过量的探针,并用H2O2供体或氧化应激诱导剂(例如,PMA或鱼藤酮)处理细胞。使用共聚焦显微镜进行荧光成像,激发波长为520 nm,发射波长为543 nm。
动物实验
典型的体内成像方案包括将优化浓度的HKPerox-2通过静脉或腹腔注射到活体动物模型中。经过适当的循环时间(例如30分钟至2小时)后,将动物置于体内成像系统下,以监测H2O2诱导的荧光。
药代性质 (ADME/PK)
小分子探针的通用药代动力学特性不适用,因为这些化合物通常用于急性成像。对于体内应用,HKPerox-2 可配制于含 1-5% DMSO 的 PBS 缓冲液或生理盐水中。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
成像探针的总体毒性被认为较低。目前尚无HKPerox-2的具体毒性数据。对于类似化合物HKPerox-1,在RAW264.7巨噬细胞中以高达20 μM的浓度孵育24小时未显示细胞毒性。
参考文献

[1]. Trends Cell Biol. 2007 Sep;17(9):422-7. doi: 10.1016/j.tcb.2007.07.009. Epub 2007 Sep 4.

[2]. Tandem Payne/Dakin Reaction: A New Strategy for Hydrogen Peroxide Detection and Molecular Imaging. Angew Chem Int Ed Engl. 2018 Aug 6;57(32):10173-10177.

[3]. Diarylamine-based fluorogenic probes for detection of peroxynitrite. EP2809666B1.

其他信息
HKPerox-2 是一种用于研究 H2O2 在氧化应激、信号传导以及炎症、神经退行性疾病和癌症等多种疾病中作用的研究工具。它对其他活性氧/活性氮的高选择性使其成为解析 H2O2 特异性通路的重要试剂。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C32H23NO10
分子量
581.53
精确质量
1178.296
CAS号
2245230-79-7
PubChem CID
168325903
外观&性状
Yellow to orange solid powder
tPSA
298
氢键供体(HBD)数目
4
可旋转键数目(RBC)
14
重原子数目
87
分子复杂度/Complexity
2170
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C.CN(C1=CC2=C(C=C1)C3(C4=C(C=C(C=C4)C(=O)O)C(=O)O3)C5=C(O2)C=C(C=C5)OC)C(=O)OCC6=CC(=C(C=C6)C=O)O.CN(C1=CC2=C(C=C1)C3(C4=C(O2)C=C(C=C4)OC)C5=C(C=CC(=C5)C(=O)O)C(=O)O3)C(=O)OCC6=CC(=C(C=C6)C=O)O
InChi Key
PEPBXYWAYSPIJB-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/2C32H23NO10.CH4/c1-33(31(39)41-16-17-3-4-19(15-34)26(35)11-17)20-6-9-24-27(13-20)42-28-14-21(40-2)7-10-25(28)32(24)23-8-5-18(29(36)37)12-22(23)30(38)43-32;1-33(31(39)41-16-17-3-4-19(15-34)26(35)11-17)20-6-9-23-27(13-20)42-28-14-21(40-2)7-10-24(28)32(23)25-12-18(29(36)37)5-8-22(25)30(38)43-32;/h2*3-15,35H,16H2,1-2H3,(H,36,37);1H4
化学名
3'-[(4-formyl-3-hydroxyphenyl)methoxycarbonyl-methylamino]-6'-methoxy-1-oxospiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-5-carboxylic acid;3'-[(4-formyl-3-hydroxyphenyl)methoxycarbonyl-methylamino]-6'-methoxy-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylic acid;methane
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMF: 50 mg/mL (85.98 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.7196 mL 8.5980 mL 17.1960 mL
5 mM 0.3439 mL 1.7196 mL 3.4392 mL
10 mM 0.1720 mL 0.8598 mL 1.7196 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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