RT-AM

目录号: V67115 纯度: ≥98%
RT-AM是真正的硫醇前体活性分子。
RT-AM CAS号: 2280796-94-1
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
Other Sizes

Other Forms of RT-AM:

  • Real Thiol
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
RT-AM 是一种真正的硫醇前体活性分子。真正的硫醇是一种基于可逆反应的荧光探针,可以定量监测活细胞中谷胱甘肽的实时动态变化。
RT-AM 是 Real Thiol 的一种细胞渗透性前体(前药),Real Thiol 是一种基于可逆反应的荧光探针,用于定量监测活细胞中谷胱甘肽 (GSH) 的实时动态变化。RT-AM 的分子式为 C26H25N3O11,分子量为 555.49。
生物活性&实验参考方法
靶点
Intracellular glutathione (GSH) is the primary molecular target. The Real Thiol probe, generated intracellularly after esterase cleavage of the AM group, reversibly reacts with GSH to allow quantitative, real-time monitoring of GSH dynamics.
体外研究 (In Vitro)
乙酰氧基甲基酯(AM)易于被酯酶水解,从而在细胞内再生Real Thiol,其由羧酸基团生成,旨在提高Real Thiol在细胞内的通透性。当细胞用RT-AM处理时,将每个对应像素的405 nm通道荧光强度值除以488 nm通道荧光强度值,即可生成单个细胞内GSH浓度快速变化的实时比率图像[1]。
Real Thiol(活性形式)是一种基于可逆反应的荧光探针,可定量监测活细胞中谷胱甘肽的实时动态变化。其荧光信号与谷胱甘肽浓度相关,且该反应具有可逆性,因此可以追踪谷胱甘肽水平在受到刺激后的升高和降低。
体内研究 (In Vivo)
目前尚无该化合物的具体体内活性数据。RT-AM 旨在用于活细胞成像,以实时监测内源性 GSH 水平的波动。它不适用于直接在动物体内使用。
酶活实验
标准实验方案包括将RT-AM(例如,5-10 uM)与不同浓度的谷胱甘肽(GSH,0-10 mM)在缓冲溶液(例如,pH 7.4的PBS缓冲液)中于37℃孵育。通过测量荧光信号随时间的变化来表征探针的可逆性和灵敏度。作为对照反应,可以添加氧化剂(例如,H2O2)来观察信号变化。
细胞实验
细胞成像的一般流程包括将细胞接种于共聚焦培养皿中,并在37℃下用RT-AM(例如,5-10 uM)孵育30分钟。AM酯基可促进细胞摄取,进入细胞后,酯酶会裂解AM酯基以捕获活性Real Thiol探针。洗涤后,即可进行活细胞成像。为了诱导GSH的动态变化,可使用氧化剂(例如,H2O2或二酰胺)处理细胞以降低GSH水平,或使用还原剂(例如,DTT)处理细胞以增加GSH水平。实时记录荧光变化。
动物实验
典型的体内成像方案是将RT-AM(例如,1-10 mg/kg)静脉或腹腔注射到活体动物模型中。经过适当的循环时间,使探针分布并被酯酶激活后,将动物置于体内成像系统下监测GSH动态变化。然而,这种应用并不常见。
药代性质 (ADME/PK)
AM酯探针的一般药代动力学特性:AM酯基团可增强细胞渗透性,使探针进入细胞。进入细胞后,细胞内酯酶会裂解AM基团,从而捕获活性探针。该探针可配制成DMSO储备液,并可用PBS或培养基稀释。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
成像探针的总体毒性被认为较低。目前尚无RT-AM的具体毒性数据。对于类似的AM酯探针,在细胞模型中,浓度高达10 μM,持续24小时,均显示出良好的生物相容性。
参考文献

[1]. Quantitative real-time imaging of glutathione. Nat Commun. 2017 Jul 13;8:16087.

其他信息
RT-AM 是一种用于研究氧化还原生物学的工具,尤其适用于研究谷胱甘肽(细胞内含量最丰富的硫醇和关键抗氧化剂)的动态调控。与不可逆的 GSH 探针相比,其可逆反应机制具有显著优势,能够实时监测 GSH 的消耗和恢复。本产品仅供研究使用。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C26H25N3O11
分子量
555.490207433701
精确质量
555.148
CAS号
2280796-94-1
相关CAS号
Real Thiol;2280796-90-7
PubChem CID
134128279
外观&性状
Pink to red solid powder
LogP
1.8
tPSA
179
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
13
可旋转键数目(RBC)
15
重原子数目
40
分子复杂度/Complexity
1110
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O1C(C(/C=C(\C#N)/C(N(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=O)=CC2=CC=C(C=C12)N1CCC1)=O
InChi Key
CLCCMBNDDZVBCA-AWQFTUOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C26H25N3O11/c1-16(30)36-14-38-23(32)12-29(13-24(33)39-15-37-17(2)31)25(34)20(11-27)9-19-8-18-4-5-21(28-6-3-7-28)10-22(18)40-26(19)35/h4-5,8-10H,3,6-7,12-15H2,1-2H3/b20-9+
化学名
acetyloxymethyl 2-[[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]-[(E)-3-[7-(azetidin-1-yl)-2-oxochromen-3-yl]-2-cyanoprop-2-enoyl]amino]acetate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 25 mg/mL (45.01 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.8002 mL 9.0011 mL 18.0021 mL
5 mM 0.3600 mL 1.8002 mL 3.6004 mL
10 mM 0.1800 mL 0.9001 mL 1.8002 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们